丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活基因NS5ATP13的克隆化研究

目的 应用微矩阵 (microarray)技术 ,结合生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白5A(NS5A)的反式激活基因 ,阐明慢性HCV感染、肝纤维化及肝细胞癌 (HCC)的等相关疾病的发病机制。方法 根据HCV H病毒株序列设计、合成序列特异性的引物。以含有全长HCV H株cDNA的pBRTM 3 0 11质粒DNA作为模板 ,进行多聚酶链反应 (PCR)扩增 ,获得的HCVNS5A编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定 ,构建真核表达载体pcDNA3 1(-) NS5A。以pcD NA3 1(-) NS5A转染肝母细胞瘤细胞系HepG2 ,提取总RNA ,逆转录为cDNA后进行表达谱基因芯片分析。应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆HCVNS5A反式激活作用的新的靶基因。结果 构建了真核表达载体pcDNA3 1(-) NS5A ,经过限制性内切酶作图分析和核苷酸序列分析证实正确无误。以pcDNA3 1(-) NS5A转染HepG2后提取总RNA ,逆转录后进行表达谱基因芯片技术分析。应用分子克隆技术结合生物信息学技术克隆NS5A反式激活的新型靶基因 ,命名为NS5ATP13 ,在GenBank中登录 ,登录号为D2 12 62。NS5ATP13基因的编码序列全长为 2 10 3个核苷酸 (nt) ,编码产物由 70 0个氨基酸残基 (aa)组成。结论 丙型肝炎病毒NS5A基因产物具有显著的反?