施氮量对裸燕麦源库生理特性和茎鞘NSC积累与转运的影响

为探究施氮量对燕麦源库生理特性和茎鞘间非结构性碳水化合物(NSC)积累和转运的影响,2021年和2022年选取穗粒数差异大的两个裸燕麦品种坝莜1号(穗粒数多)和定莜8号(穗粒数少)为试验材料,设置0、100和200 kg·hm^(-2)3个施氮水平,测定和分析了不同氮素供应条件下燕麦叶片光合指标、粒叶比、茎鞘NSC积累量(TMNSC)、NSC表观转运量(ATMNSC)及其对籽粒产量表观贡献率(ACNSC)的差异。结果表明,施氮对2个燕麦品种的籽粒产量具有增加效应,其中在施氮100 kg·hm^(-2)时产量最高。在100 kg·hm^(-2)施氮处理下,坝莜1号的旗叶面积、SPAD值、Pn和籽粒产量两年平均值较不施氮处理分别提高57.57%、80.70%、101.68%和40.15%,定莜8号分别提高43.70%、44.33%、69.49%和37.36%;坝莜1号的ATMNSC、ACNSC和粒叶比两年平均值较不施氮处理分别增加767.25 g、1.96倍和54.55%,定莜8号分别增加859.52 g、8.26倍和43.25%。综合以上结果,增施氮肥对两品种均有显著正向影响,坝莜1号表现出更优的源、库活性,从而获得更高的穗粒数,达到增产目的;定莜8号则表现出更优的源-库关系,增大库器官对源物质的“拉力”,促进NSC由茎鞘向籽粒的转运,弥补生育前期光合能力较弱导致的同化物质生产的不足,从而促进源库协调,提高籽粒产量。

稳定转染TDP-43导致NSC34细胞自噬异常

目的 探讨稳定转染TDP-43对NSC34细胞自噬的影响。方法 体外培养稳定转染空质粒的NSC34细胞系(E细胞)和转染TDP-43的NSC34细胞系(TDP-43细胞)。应用CCK-8试剂盒测定两组细胞活力,应用EdU试剂盒测定两组细胞增值能力,应用透射显微镜观察两组细胞线粒体形态,应用免疫荧光检测两组细胞自噬相关蛋白表达水平。结果 与E组细胞相比,TDP-43组细胞活力明显下降,增殖能力下降,差异有统计学意义(P<0.05);线粒体形态异常,自噬相关蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 稳定转染TDP-43可导致NSC34细胞自噬异常,线粒体形态改变,降低细胞活力和增殖能力。

基于UHPLC-MS技术的NSCLC血浆生物学标志物的筛选及鉴定研究

目的研究UHPLC-MS技术的NSCLC血浆生物学标志物的筛选及鉴定。方法本研究纳入符合非小细胞肺癌临床诊断标准的60例NSCLC患者,随机分为两组,接受靶向治疗(TACE)的非小细胞肺癌患者为鉴别诊断组,未接受靶向治疗的NSCLC患者为正常对照组。结果在60例NSCLC患者中,通过LC-MS/MS技术共检测到552个生物标志物。在其中17个生物标志物中,有8个出现在已知的EGFR突变患者中,另7个出现在ALK融合患者中,6个出现在HER2突变患者中。此外,NSCLC患者血浆中含有丰富的非编码RNA(miRNA),包括58个miRNA和23个mRNA。结论本研究中,采用LC-MS/MS技术对NSCLC患者血浆进行分析,可快速、高效地获得血浆样品中的生物学标志物。这些标志物可以作为NSCLC诊断的潜在生物学标志物,并且可以用于预测肿瘤进展和不良预后。

施氮量对滴灌春小麦茎鞘NSC积累与转运的影响

在新疆气候条件下,为明确滴灌春小麦不同茎鞘节位果聚糖和NSC向籽粒转运提高产量的氮素响应机制,采用裂区试验设计,以强筋小麦‘新春37号’(XC37)、中筋小麦‘新春6号’(XC6)为主区,分别以施氮量300、255、210、0 kg·hm^(-2)为副区,研究施氮量对滴灌春小麦茎鞘不同节位(穗下节间、倒二节间、其余节间)果聚糖和非结构碳水化合物(NSC)的积累转运及其对产量贡献的影响。结果表明,随生育期的推进,两个品种春小麦茎鞘蔗糖果糖基转移酶(SST)活性、果聚糖含量、NSC含量及茎鞘干物质量呈先升后降的变化趋势,而果聚糖外水解酶(FEH)活性则为先降后升再降的趋势,各指标均以施氮量255 kg·hm^(-2)处理表现最优;各节位相比,其余节果聚糖代谢酶活性、果聚糖含量、NSC含量以及茎鞘干物质量最大,其果聚糖、NSC以及茎鞘干物质对产量贡献率分别比倒二节高11.18%~35.77%、14.77%~45.65%和25.81%~33.83%;两品种比较,XC37茎鞘中贮藏物质积累运转效率高于XC6,其果聚糖、NSC以及茎鞘干物质对产量贡献率分别比XC6高32.53%~116.74%、26.06%~35.26%和6.32%~21.73%;施氮量与品种互作效应对果聚糖、NSC花前转运率和贡献率及其穗下节干物质对产量贡献率均有显著影响。研究表明,果聚糖和NSC代谢及产量在施氮量为255 kg·hm^(-2)时表现最佳,该施氮量是新疆滴灌春小麦适宜的施氮水平。

α-淀粉酶对不同NSC含量稻草青贮品质的影响

适时收获的新鲜稻草中含有相当数量的非结构性碳水化合物（NSC）,其中淀粉占有相当比例.淀粉在青贮中需水解成可溶性糖（WSC）才能被大部分乳酸菌利用.本研究选用两个稻草中NSC 含量差异显著的水稻品种（杂交籼稻两优培九和常规粳稻武香粳14）,设置0.5,1.0和1.5g/kg的3个α-淀粉酶添加浓度和对照（无添加）进行试验,研究不同的α-淀粉酶添加浓度对稻草青贮品质的影响,为改善稻草饲用品质提供依据.结果表明,两优培九稻草中的NSC 含量为6.89%,淀粉含量为3.68%,显著低于武香粳14 稻草中的NSC（16.51%）和淀粉（10.63%）含量（P〈0.05）;添加不同浓度的α-淀粉酶后青贮稻草的饲用品质和发酵品质间存在显著差异（P〈0.05）,两优培九以1.5g/kg的α-淀粉酶添加浓度效果最好,武香粳14以1.0g/kg的添加浓度效果最好;武香粳14稻草添加α-淀粉酶的青贮效果显著优于两优培九.添加α-淀粉酶后两优培九稻草中的NSC、WSC 和淀粉含量,以及武香粳14稻草中的NSC 和淀粉含量均呈持续下降趋势,而武香粳14稻草中的WSC 含量则呈“降-升-降”变化趋势;添加α-淀粉酶处理组的WSC 含量在青贮第3天时较青贮第2天均有不同程度上升,并显著高于对照;但在青贮第5～14天期间,WSC 含量大幅下降,与对照组差异减小.

一组纤维素分解菌复合系NSC-7的酶活表达特性

为了揭示一组具有降解纤维素和林丹双重功能的细菌复合系NSC-7的降解活性,本文对该菌系的分解能力、纤维素酶活性和半纤维素酶活性进行测定。结果表明,NSC-7在14d内,可降解稻秆干重的73.6%,其中降解纤维素82.1%,半纤维素58.2%,木质素5.4%。用广泛采用的酶活测定方法测定了4种纤维素酶和半纤维素酶活性,在培养的第8天,内切酶、总纤维素酶、外切酶和β-糖苷酶活性都达到最大值,分别为4.48U/mL、7.51U/mL、15.83U/mL和25.78U/mL。在培养的第5天,半纤维素酶活性达到最高值为280.9U/mL,其平均值比纤维素酶活性高43.71倍。

iPSC-NSCs脑立体定向注射对脑出血大鼠脑血肿周围组织中IL-6、TGF-β1表达及神经功能的影响

目的:探讨脑立体定向注射诱导多能干细胞来源的神经干细胞(i PSC-NSCs)对脑出血(ICH)模型大鼠神经功能及脑血肿周围组织中IL-6、TGF-β1表达水平的影响。方法:选取84只雄性SD大鼠采用大鼠脑立体定位仪制作ICH模型,然后分成3组:假手术组(仅定位穿刺,不注射胶原酶和PBS)、对照组(ICH模型+PBS)、实验组(ICH模型+PBS含i PSC-NSCs),每组28只。随后通过m NSS评分评价各组10只ICH模型大鼠在造模后第1、3、7、14、28天神经功能的动态变化。用ELISA方法检测各组ICH模型大鼠血肿周围组织中IL-6、TGF-β1的表达水平,每组每个时间点有6只大鼠。结果:不同处理方法的ICH大鼠在不同时间点脑血肿周围组织中IL-6、TGF-β1的表达不同(P均<0.05)。实验组大鼠神经功能在第14、28天较对照组有明显改善。结论:i PSC-NSCs脑立体定向注射可调节ICH模型大鼠脑内主要促炎因子IL-6及抑炎因子TGF-β1的表达,并明显改善大鼠的神经功能。

骨髓源性EPCs对脊髓源性NSCs增殖分化的影响

目的观察骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)对脊髓源性神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响。方法通过密度梯度离心法获取骨髓血单个核细胞,以EBM-2进行诱导培养EPCs并进行免疫细胞化学染色鉴定,成熟的方法获取及鉴定SD大鼠的脊髓NSCs,1×105/ml第3代NSCs置于Transwell小室下层与1×105/ml上层原代EPCs进行体外1∶1共培养,以单纯第3代的NSCs培养为对照,培养7 d,双盲法分别计数各组在相差显微镜下神经球形成的数目,并用目镜测微尺测量神经球的平均直径,通过5%血清诱导培养NSCs7 d后,行β-微管蛋白-Ⅲ免疫荧光染色,Hoechst细胞核染色后在显微镜下计算神经元/细胞总数得出百分率。结果骨髓源性EPCs与脊髓源性NSCs共培养组神经球平均数目为(22.27±3.85)个,平均直径为(61.70±7.21)μm,诱导培养后分化为神经元的平均百分率为(46.10±3.70)%,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论骨髓源性EPCs能促进脊髓源性NSCs增殖及其向神经元分化。

人参皂甙Rg1、Rb1对SVZa-NSCs增殖的影响及其与STAT3的关系

目的:研究人参皂甙Rg1、Rb1对体外培养大鼠SVZa-NSCs(室管膜前下区神经干细胞)增殖的影响及其与STAT3(信号转导与转录激活因子3)的关系。方法:采用体外细胞培养法对大鼠SVZa-NSCs分离、培养,用细胞计数法和MTT法测定人参皂甙Rg1、Rb1对NSCs增殖的影响,并寻找促进NSCs增殖的人参皂甙Rg1、Rb1最佳浓度和最佳时间;用免疫细胞化学法检测STAT3的表达和阳性细胞百分比,NSCs增殖与JAK/STAT通路的关系。结果:人参皂甙Rg1、Rb1能够促进SVZa-NSCs的增殖,其最佳浓度为40μM、最佳时间为4d。与对照组比较,人参皂甙Rg1、Rb1明显促进STAT3的表达和阳性细胞百分比增加(P<0.01)。结论:人参皂甙Rg1、Rb1对内源性NSCs的增殖、分化有较大价值,为中枢神经系统损伤修复提供实验基础理论。

休眠期石蒜鳞茎NSC分布格局

【目的】为进一步阐明石蒜属植物的鳞茎休眠机制,以红花石蒜(Lycoris radiata)3种不同径级(大、中、小)的鳞茎为材料。【方法】采用分光光度法测定了不同径级鳞茎不同部位的淀粉、蔗糖、可溶性糖、葡萄糖含量,了解NSC的构成及其分布格局。【结果】表明,不同径级鳞茎相同部位内的NSC总含量差异明显(中球>大球>小球)。其中,淀粉、可溶性糖含量均以中球最高,蔗糖含量以大球最高,果糖含量却以小球最高;鳞茎不同部位的NSC含量由大到小依次为中层、内层鳞片、外层鳞片和鳞茎盘。【结论】可见,石蒜鳞茎内的NSC含量与鳞茎的大小、部位及发育阶段存在一定的相关性,可考虑作为判别其发育阶段的标识之一。另外,NSC的分布格局还会受外界条件、自身的生长与代谢状况影响。

一组多功能细菌复合系NSC-7的培养特性及稳定性

本研究探讨了一组具有分解纤维素和农药林丹双重功能的复合菌系NSC-7的培养特性和稳定性。NSC-7在14d的培养过程中,使稻秆分解73.6%;用GC-MS测定结果发酵液中检测到10种化合物成分,其中峰值较大的依次为乙酸、甘油、丁酸、丙酸;NSC-7在-80℃冷冻和冻干条件下保存4年后仍具有稳定的秸秆分解能力和纤维素内切酶活性;经90℃高温处理30min后,仍能够保持分解能力,105℃处理30min后转接2次就能恢复分解能力,显示出很高的保存稳定性和热稳定性。利用DGGE分析多次继代接种过程的培养物结果条带基本没有变化,表明NSC-7的菌种组成稳定。

SHP2抑制剂NSC-87877对炎性疼痛的抑制作用及其机制

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2(src homology-2 domain-containing phosphatase 2)的抑制剂NSC-87877对炎性疼痛的影响及其机制;方法小鼠左后足底皮下注射完全佛氏佐剂(Complete Freund's Adjuvant;CFA)建立疼痛模型;鞘内给予NSC-87877前后,测定缩足阈值;随后分离左侧L4-L5节段脊髓背角,免疫印迹法检测N-methyl-D-aspartate(NM-DA)型谷氨酸受体的表达;结果 SHP2广泛分布于脊髓背角;且SHP2抑制剂NSC-87877(3μg)能够抑制CFA诱发的痛觉超敏,而对正常动物的痛行为无作用。虽然NSC-87877不影响NMDA受体NR2B和NR2A亚基的总蛋白含量,但却能够特异性降低CFA组动物NR2B的突触表达水平;结论 SHP2抑制剂NSC-87877通过逆转NR2B的突触表达亢进,对炎性疼痛产生明显的抑制作用。

日粮不同SC:NSC比例对体外发酵参数的影响

采用体外批次培养法,以青贮玉米、玉米秸秆和苜蓿为主要粗饲料来源,通过研究日粮不同SC:NSC比例对体外批次VFA产量、产气量和pH值的影响,确定维持奶牛瘤胃健康同时保持较高生产性能适宜的日粮SC:NSC比例,为奶牛日粮合理配制及日粮适宜SC:NSC比例的研究提供参考依据。结果表明在本试验条件下SC:NSC在0.59～0.70范围内,体外培养液发酵相对最为理想。

mGluR5特异性激动剂CHPG促进人NSCs增殖

目的:研究代谢型谷氨酶受体mGluR5特异性激动剂CHPG对人胚胎皮质神经干细胞(NSCs)增殖的影响以及分子机制。方法:采用MTT比色法和神经球直径测量分析CHPG对人NSCs增殖的影响;流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;采用免疫蛋白印迹法,观察磷酸化ERK,JNK和p38 MAPKs表达水平的变化。结果:mGluR5激动剂CHPG促进人胚胎皮质NSCs增殖;CHPG组与对照组相比,S期与G2/M期细胞数量显著增加(P<0.05),G1/G0期细胞数量显著减少(P<0.05);CHPG组早期凋亡和晚期凋亡细胞显著减少(P<0.05);CHPG组与对照组相比,ERK1/2和JNK2的磷酸化水平显著增高,但是p38 MAPKs的磷酸化水平显著降低(P<0.01)。结论:mGluR5激动剂CHPG促进人胚胎皮质NSCs增殖,同时伴随着ERK和JNK的磷酸化激活。

喜树碱药物NSC606985抗卵巢癌细胞活性及其机制的研究

目的:体外观察喜树碱药物NSC606985对人卵巢癌细胞的生长抑制效应、凋亡诱导效应以及抗癌机制。方法:采用MTT法检测不同浓度(6.25,12.5,25,50,100nmol/L)NSC606985作用特定时间(24,48,72h)后对人卵巢癌COC1细胞的生长抑制效应,用AnnexinV-FITC/PI双染法FCM检测NSC606985对COC1细胞的凋亡诱导效应,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测缺氧(2%O2)对HIF-1α,AMFR及RhoC mRNA表达水平的影响。用免疫印迹技术(Western blot)检测物理性缺氧及氯化钴(CoCl2)化学模拟缺氧下HIF-1α蛋白的表达水平以及NSC606985对HIF-1α的调控效应。结果:纳摩尔浓度的NSC606985可以显著抑制人卵巢癌COC1细胞生长,呈现剂量及时间依赖效应。不同浓度(50,100,200nmol/L)NSC606985作用24h凋亡细胞比率分别是68.44%,80.86%,91.98%,具有剂量依赖性。在人卵巢癌细胞系COC1和SKOV3中,缺氧(2%O2)14h对HIF-1α、AMFR及RhoC mRNA的表达无影响,却可以上调HO-8910PM细胞HIF-1αmRNA水平。物理性缺氧(2%O2 14h)及CoCl2化学模拟缺氧(50μmol/L或150μmol/L 24h)诱导COC1,HO-8910PM及SKOV3等卵巢癌细胞株HIF-1α蛋白高水平表达,NSC606985(20～400nmol/L 14h或24h)可呈剂量依赖性显著下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白。结论:NSC606985抑制卵巢癌细胞增殖具有剂量和时间依赖性,可能与诱导细胞凋亡相关。缺氧下HIF-1α在卵巢癌细胞的恶性生物学行为中发挥重要作用,NSC606985可通过下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白发挥独特的抗癌机制。

抑制和激活Wnt信号通路对甾醇类新药NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化的影响

目的:探讨抑制和激活Wnt信号通路在甾醇类新药NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化中的作用和可能机制。方法:用5、10和20μmol/L的Wnt信号通路抑制剂XAV-939作用于HL-60细胞3 d,用10、20和30mmol/L的Wnt信号通路激活剂Li Cl作用于HL-60细胞1 d,应用RT-RCR和Western blot检测Wnt信号通路的下游靶点基因和蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD14的表达和细胞早期凋亡,筛选最佳抑制浓度和激活浓度。然后用10μmol/L NSC67657分别对已经抑制及激活了的Wnt通路的HL-60细胞作用3 d。分析比较空白对照组、NSC67657单独处理组和激活/抑制剂作用后NSC67657处理组的细胞表面抗原CD14和Wnt下游靶点蛋白的表达水平。结果:20μmol/L XAV-939和20 mmol/L Li Cl能分别有效抑制和激活HL-60细胞Wnt信号通路,分别显著下调和上调cyclin D1,TCF1,c-Jun基因(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达,且在该条件下CD14^+HL-60细胞不超过1%,没有早期凋亡发生;NSC67657单独作用HL-60细胞能下调Wnt通路下游靶点cyclin D1、TCF1和c-Jun的蛋白表达(P<0.05),CD14^+细胞占(62.13±9.44)%;NSC67657作用于经XAV-939预处理的细胞,可使CD14^+细胞达到(84.17±5.39)%,cyclin D1,TCF1和c-Jun蛋白表达比单独NSC67657处理组降低更显著(P<0.01);而NSC67657作用经Li Cl预处理的细胞,可使CD14^+细胞减少至(33.99±8.37)%,cyclin D1,TCF1和c-Jun蛋白表达较非处理组下降明显较低(P<0.05),但高于单独使用NSC67657处理组(P<0.05)。结论:20μmol/L XAV-939和20 mmol/L Li Cl作为HL-60细胞Wnt信号通路的有效抑制剂和激活剂能够分别显著下调和上调Wnt下游通路靶点基因和蛋白表达,其干预后对NSC67657诱导细胞分化的影响提示Wnt信号通路可能在NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化中起到关键作用。

稳定转染hSOD1G93A增加NSC34细胞凋亡

目的探讨稳定转染hSOD1G93A对NSC34细胞凋亡的影响。方法常规体外培养稳定转染空质粒、hSOD1WT或hSOD1G93A质粒的NSC34细胞系,分为3组:空转组、野生组和突变组。应用CCK-8试剂盒和LDH试剂盒来测定各组细胞活力,应用透射电镜观察细胞线粒体形态,通过TUNEL染色来检测细胞凋亡情况,应用Western blotting检测各组细胞凋亡相关蛋白的表达水平。结果与空转组和野生组细胞相比,突变组细胞线粒体形态异常,细胞活力明显下降,凋亡细胞数量增多,差异有统计学意义(P<0.05);且突变组细胞Bcl-2的蛋白表达水平显著下降,Bax的蛋白表达水平均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论稳定转染hSOD1G93A可导致NSC34细胞线粒体形态异常,降低抗凋亡蛋白的表达水平,增加促凋亡蛋白的表达水平,最终导致凋亡细胞增加。

大鼠脊髓损伤亚急性期NSCs脊髓内移植对脊髓神经电生理的影响

目的研究神经脊髓损伤的亚急性期(第7天)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)脊髓内移植对大鼠受损伤脊髓神经电生理的影响.方法正常成年SD雌性大鼠15只,分为3组:单纯全横断组、假手术组和神经干细胞移植组.测定3组大鼠的皮层体感诱发电位(cortical somatosensoryevoked potential,CSEP)、运动诱发电位(motion evoked potential,MEP)和电针刺激大脑皮质运动区.结果神经干细胞移植组的诱发电位CSEP、MEP的潜伏期短于单纯脊髓全横断组大鼠,电针刺激大脑皮质运动区发现NSC移植组大鼠双后肢出现明显收缩,且以对侧更为明显.结论神经干细胞脊髓内移植后能部分促进损伤脊髓的感觉和运动传导功能的恢复.

针刺作用于脑卒中后NSCs增殖的多信号通路研究进展

针刺不仅在整体水平上促进神经细胞的代偿性修复,减轻神经功能缺损程度,还可以作用到各个神经通路进行调节。针刺可以抑制或者上调很多蛋白的表达,进而影响各个信号通路。有些针刺效应更能作用于各个信号通路相链接的靶点蛋白上,从整体上抑制负性的信号通路,促进正性的信号通路。但目前针刺对各信号通路的调控主次作用不明确,各信号通路发挥的主次作用也不明确,仍需进一步研究,以寻求更明确的作用机制和作用靶点,明确主次关系。

壮通饮诱导脑梗死大鼠内源性NSC增殖和分化的实验研究

目的:研究壮通饮对脑梗死大鼠内源性神经干细胞NSC(neural stem cell,NSC)增殖分化表达的影响。方法:将240只雄性大鼠随机分为模型组、假手术组、壮通饮组、正常对照组,采用线栓法制作脑梗死模型,分别给予不同处理,于术后1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d 6个时间点分批处死大鼠。用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马区Brd U、Nestin标记的阳性细胞情况。结果:在术后1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d 6个时间点,正常对照组和假手术组大鼠的海马区可见到少量的Brd U、Nestin标记阳性细胞,差异均无统计学意义(P>0.05);与假手术组相比,模型组和壮通饮组大鼠Brd U、Nestin标记阳性细胞数目增多,差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,壮通饮组大鼠Brd U、Nestin标记阳性细胞数目均增多,且第7天时Brd U、Nestin标记阳性细胞数目达到高峰,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:壮通饮可以促进脑梗死后内源性NSC的增殖和分化,新分化的神经元有正常的兴奋性,可以和其他神经元形成突触联系,发挥相应的神经功能,从而发挥神经保护作用。