转染hSOD1-G93A对NSC-34细胞内铁代谢相关蛋白表达的影响

目的探讨转染hSODl．G93A对NSC-34细胞内铁代谢相关蛋白表达的影响。方法常规体外培养未转染、转染pcDNA3．1（-）、hSODl-pcDNA3．1（-）和hSODl-G93A—pcDNA3．1（-）质粒的NSC-34细胞系；分为正常组、空转组、野生组和突变组。利用免疫组化染色法观察各组细胞的形态变化；通过检测丙二醛（MDA）含量观察各组细胞氧化应激水平；用逆转录聚合酶链式反应rRT．PCR）和Westernblotting分别检测各组细胞内铁代谢相关蛋白的基因和蛋白表达水平。结果突变组的细胞胞体变圆，突起减少、变短，细胞内MDA含量明显高于其他3组细胞，差异有统计学意义（P〈0．05）；各组细胞内的转铁蛋白受体（TfR）、二价金属离子转运体1（DMTI）、铁蛋白等基因在基因水平上表达差异无统计学意3L（P〈0．05）；各组细胞内的TfR、DMTl、铁蛋白等在蛋白水平上表达差异无统计学意义（胗O．05），但是突变组细胞铁蛋白表达较正常组细胞明显升高，差异有统计学意义（P，0．051。结论转染hSOD1-G93A对NSC-34细胞（突变组）内TfR、DMTl表达无明显影响．但可以使细胞内铁蛋白在蛋白表达水平明显升高。

G93A突变的hSOD1基因对Nrf2/ARE信号通路的影响

目的:探讨G93A突变的hSOD1(human Cu/Zn superoxide dismutase)基因在肌萎缩侧索硬化转基因细胞模型NSC-34细胞中对Nrf2/ARE信号通路的影响。方法:将构建好的质粒hSOD1-pcDNA3.1(-)、hSOD1-G93A-pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)转染至肌萎缩侧索硬化转基因细胞模型NSC-34细胞内,根据转染质粒的不同分为4组:正常组、空转组、野生组和突变组。通过检测细胞内脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量来判断细胞氧化损伤的程度;检测线粒体膜通透性;通过Western blotting检测细胞中Nrf2、抗氧化酶的蛋白表达水平,以反映Nrf2/ARE信号通路在各组的活化程度。结果:转染hSOD1-G93A-pcDNA3.1(-)的NSC-34细胞(突变组)内氧化应激水平增高,同时线粒体通透性增加,提示线粒体受损伤;且Nrf2以及Nrf2/ARE信号通路下游效应分子血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和NAD(P)H醌氧化还原酶-1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。突变组细胞胞浆中Nrf2表达明显减少(P<0.05),而突变组和野生组细胞核中Nrf2增多,突变组细胞更为显著(P<0.05)。结论:hSOD1基因的G93A突变使细胞Nrf2/ARE信号通路受损,降低了细胞的抗氧化能力,加重了线粒体损伤。