NSE-ELISA技术在良恶性嗜铬细胞瘤鉴别诊断中的应用

目的快速提高良性恶性嗜铬细胞瘤的诊治水平 ,建立一种快速诊断嗜铬细胞瘤良性恶性的方法。方法采用原代培养的方法分别分离培养良性恶性嗜铬细胞瘤细胞 ,培养 3天后 ,应用神经元特异性烯醇化酶 (NSE) ELISA方法对两种培养的细胞进行NSE表达的量进行检测 ,最后对用于反映细胞中NSE含量的光密度OD值进行比较和分析。结果良性嗜铬细胞瘤细胞组的OD值为 0 .5 14± 0 .0 2 3 ,而恶性组的OD值为 0 .64 7± 0 .0 2 6。结论可以依据嗜铬细胞瘤细胞NSE水平的高低检测出肿瘤的良恶性 。

神经元特异性烯醇酶与急性脑梗死

目的 探讨急性脑梗死患者血清神经元特异性烯醇酶 (NSE)的变化及其临床意义。方法 采集6 9例脑梗死患者起病 3天内的血标本 ,用酶联免疫分析法测定血清 NSE含量 (其中 35例 2周时复测 )。结果脑梗死 3天内血清 NSE明显高于对照组及 2周时 (P<0 .0 0 1) ,血清 NSE含量与梗死灶大小、神经功能缺损程度明显正相关 (P<0 .0 0 1) ,与意识障碍明显负相关 (P<0 .0 0 1) ,临床疗效越差血清 NSE含量越高 (P<0 .0 0 1)。结论 脑梗死早期血清 NSE明显升高 ,血清 NSE含量与临床表现关系密切。

血清CYFRA21-1、NSE、CEA的测定在肺癌诊断中的意义

目的 :探讨在肺癌诊断中血清CYFRA2 1- 1、NSE、CEA含量的变化、敏感程度及联合检测的意义。方法 :应用ELISA法测定 81例肺癌及 18例肺良性病变的患者血清CYFRA2 1- 1、NSE、CEA浓度及阳性率 ,着重探讨其与肺癌病理类型、肺癌分期、分化程度的关系。结果 :NSCLC组和鳞癌组的CYFRA2 1- 1浓度高于SCLC组、对照组 (P <0 .0 5 ) ;腺癌组、对照组、SCLC组间的CYFRA2 1- 1浓度无统计学差异。SCLC组NSE浓度高于其他病理类型和对照组 (P <0 .0 5 )。CEA不同组别间无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ,但联合检测可提高敏感性。NSCLC和鳞癌组中 ,CYFRA2 1- 1检测肺癌的敏感性高于NSE和CEA(P <0 .0 5 )。SCLC组NSE的敏感性高于CYFRA2 1- 1、CEA(P <0 .0 5 )。对大细胞肺癌 ,NSE的敏感性亦较高 (10 0 %)。随临床TNM分期的增加 ,CYFRA2 1- 1、NSE浓度增加 ,Ⅰ、Ⅱ期与ⅢA～Ⅳ期之间有统计学差异 (P <0 .0 5 ) ,敏感性也增加。随肿瘤分化程度的降低 ,CYFRA2 1- 1和NSE的浓度有增高的趋向 ,但各组间无明确的统计学差异 (P>0 .0 5 )。联合检测可提高检测肺癌的敏感性。结论 :血清CYFRA2 1- 1、NSE、CEA的联合检测对肺癌诊断有较高的临床参考价值 ,并有助于肺癌的病理类型 ,分化程度 ,分期评估。

血清NSE TSGF CA125 CYFRA21_1联合检测对肺癌的诊断价值

目的探讨血清NSE,CYFRA21_1,CA125,和TSGF联合检测对肺癌的诊断价值。方法应用ELISA技术,测定74例肺癌患者、40例肺良性疾病患者和20例体检正常者血清NSE、CYFRA21_1、CA125、TSGF的水平。结果肺癌组的4种标志物NSE、CYFRA21_1、CA125、TSGF的水平及检测阳性率均明显高于良性肺病及正常对照组(P<0.01)。鳞癌、腺癌和小细胞肺癌分别以NSE、CYFRA21_1、CA125、TSGF升幅较为明显。NSE、CYFRA21_1、CA125、TSGF的灵敏度分别为47.3%、54.0%、59.46%、55.4%,但4种联合检测的灵敏度为91.89%,明显优于1种血清肿瘤标志物的单项测定。结论血清NSE、CYFRA21_1、CA125、TSGF联合检测提高肺癌的阳性检出率和检测特异性,对肺癌的早期诊断、疗效监测、预后判断有重要意义。

121例血清和脑脊液中NSE和NO/NOS检测在小儿惊厥中的临床价值

目的 探讨血清和脑脊液中NSE和NO/NOS在小儿惊厥发作、发作时间、引起惊厥原因以及脑神经元损伤中的变化及其规律。方法 应用酶联免疫法和分光光度法测定惊厥发作后不同时间患儿血清和脑脊液中NSE和NO/NOS的含量。结果 (1 )在观察组中 ,除热性惊厥组外 ,血清及脑脊液中NSE和NO/NOS均明显升高 ,与正常对照组相比 ,差异显著 (P <0 0 5 ) ;(2 )血清和脑脊液中NSE和NO/NOS越高 ,表明惊厥时间越长 ,脑神经元受损程度越重 ,两者成正相关 (r =80 5 ) ;(3)在所有病因中 ,颅内感染患者血清及脑脊液中NSE和NO/NOS水平升高最明显 ,持续时间最长 ,有昏迷或严重神经系统并发症者尤为突出 ,而热性惊厥者NSE和NO/NOS无明显升高或只有轻微升高 ;(4 )血清及脑脊液中NSE和NO/NOS水平升高也成正相关 (r=85 6 )。结论 在惊厥发作时 ,由于伴有不同程度神经元损伤 ,因而在不同时期检测患者血清和脑脊液中NSE ,NO/NOS水平及变化规律 ,可以帮助判断惊厥发作持续的时间、程度以及神经元受损的程度 。

脑梗死患者血液和脑脊液神经元特异性烯醇化酶含量与神经功能障碍的相关性研究

目的 :观察急性期和恢复期脑梗死患者血液和脑脊液的神经元特异性烯醇化酶 (NSE)含量变化 ,探讨其与神经功能缺损程度等方面的相关性。方法 :采用ELISA法 ,检测 4 6例急性脑梗死患者 (观察组 ) ,2 5例非脑梗死患者 (对照组 )其血液及脑脊液NSE的含量。结果 :急性脑梗死 (ACI)患者血液和脑脊液NSE显著高于恢复期患者和对照组 (P <0 0 1) ;ACI患者脑脊液NSE显著高于血液 (P <0 0 1) ;血液和脑脊液NSE含量与出院时神经功能缺损程度呈显著正相关 (P <0 0 1)。结论 :脑脊液或血清中的NSE浓度 ,是脑组织破坏程度较合适的生化标记物 ;对预测病人出院后神经症状和体征的恢复程度具有较大的预测价值。

联合应用CT和血清肿瘤标志物检测诊断小细胞肺癌的研究

目的 :探讨CT扫描和血清肿瘤标志物 (NSE、Cyfra 2 1 1)检测联合应用对小细胞肺癌 (SCLC)的临床诊断价值。方法 :①回顾性分析 2 2 0例资料完整的SCLC的CT征象和病理基础 ;②前瞻性地研究经CT发现肺内病变并怀疑为“肺癌”的患者 12 0例 ,手术或活检前 1周之内采集外周血、采用酶联免疫吸附测定技术 (ELISA)测定其血清中NSE、Cyfra 2 1 1含量 ,而后与临床病理结果 (经病理学证实为SCLC 4 0例、NSCLC 6 0例 ;临床随访证实为良性病变 2 0例 )进行对照研究。结果 :①SCLC的主要CT征象 :中央型多见 ,纺锤形或茄形肿块、肺门纵隔淋巴结肿大 ,阻塞性肺改变相对较轻。②CT、NSE、Cyfra2 1 1对SCLC诊断的敏感性为 75 %、72 5 %、32 5 % ,特异性为 73 75 %、83 75 %、4 8 75 % ,准确性为74 16 %、81 6 7%、4 3 33%。③联合应用时 ,CT +NSE有较高的敏感性 (87 5 % )和准确性 (78 3% )。结论 :SCLC的CT表现有一定的特征性 ,CT诊断SCLC的敏感性可达 75 % ;如能结合外周血NSE检测 ,对SCLC诊断的准确性为 78 3% ,敏感性可达 87.5 % ,具有较高的临床应用价值 ;与Cyfra 2 1 1联用对NSCLC的诊断有一定价值 。

神经元特异性烯醇化酶酶联免疫吸附分析技术在体外培养神经元中的应用

ＭＴＴ法是用于反映体外培养神经细胞活性的指标，但对检测细胞活性没有特异性。本实验结合神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）免疫细胞化学技术特异性强、敏感性高的优点与酶联免疫吸附试验酶促底物邻苯二胺（ｏｐｈｅｎｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ，ＯＰＤ）呈色形成弥散的可溶性有色产物，通过检测有色溶液的ＯＤ值来比较体外培养过程中神经细胞的活性以及相应的数目，在建立此方法的同时并用此方法检测了人胚脊髓提取液对神经细胞活性的影响。结果证明：分子量小于１０ｋＤ的人胚脊髓提取液对体外培养的神经元存活以及生长有促进作用，用此方法比常用的ＭＴＴ方法检测更确切，并且还排除非神经元细胞的影响，对检测在各种条件（如神经生长因子、药物、缺血）作用下，比较神经细胞活性是一个很好的方法。

神经元特异性烯醇化酶对病毒性脑炎患者脑损伤的监测和评估

目的通过测定病毒性脑炎(VE)患者治疗前和治疗后脑脊液(CSF)中神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量,探讨NSE含量变化对VE病情监测及预后评估价值。方法收集2010年6月-2011年12月河北医科大学第二医院神经内科住院患者60例,并将60例患者参照黄如训主编的《临床神经病学》提出的诊断标准进行分组:VE组40例和非VE组20例。结果 VE组治疗前CSF中NSE平均含量值为14.71±2.37μg/L,VE组治疗后CSF中NSE平均含量为12.12±2.38μg/L,非VE组中NSE平均含量值为6.26±2.34μg/L,两组间比较,P<0.05。结论病毒感染中枢神经系统后,使脑神经细胞变性、死亡,对患者神经系统功能造成不可逆性的损伤;动态观察CSF中NSE水平含量变化对VE患者的病情监测及预后评估有重要意义。

全饥饿状态对大鼠脑损伤及复食后学习记忆功能的影响

目的通过测定血清S100B蛋白,NSE的浓度探讨全饥饿状态对大鼠脑损伤的影响及大鼠复食后对其学习记忆的影响。方法采用饥饿大鼠模型,将80只成年健康雄性SD大鼠按体质量随机分成分为两组,即全饥饿组(A组:n=40),复食组(B组:n=40)组。 A组又分为5个亚组:A-Ⅰ组为正常对照组,A-Ⅱ、A-Ⅲ、A-Ⅳ、A-Ⅴ组分别为全饥饿3d、5d、7d、9d组,每组n=8。 B组也分为5个亚组:B-Ⅰ组为正常对照组,B-Ⅱ、B-Ⅲ、B-Ⅳ、B-Ⅴ组分别为全饥饿3d、5d、7d、9d后给予恢复进食组组,每组n=8。结果 A-Ⅱ组、A-Ⅲ组大鼠饥饿后,血清中S100B蛋白含量与NSE含量比较A组均下降,下降幅度 A-Ⅲ组>A-Ⅱ组。其中A-Ⅱ组与对照A-Ⅰ组比较无明显差别(P>0.05),A-Ⅲ组与A-Ⅰ组比较有差异性(P<0.05)。 A-Ⅳ组、A-Ⅴ组血清中S100B蛋白含量与NSE含量比较A-Ⅰ组均上升,但A-Ⅳ组与A-ⅠA组比较无明显差异(P>0.05),A-Ⅴ组与A-Ⅰ组比较差异明显(P<0.05),有统计学意义。水迷宫实验中,前6 d定位航行试验中B-Ⅱ、B-Ⅲ组与对照B-Ⅰ组比较其上台前平均时间均缩短,其中第1 d和第2 d与对照组比较有明显差异(P<0.05)。其余无明显差异(P>0.05)。 B-Ⅳ组与对照B-Ⅰ组比较上台前时间均延长但无明显差异(P>0.05)。 B-Ⅴ组对照B-Ⅰ组比较上台前时间均延长,其中第1、4 d上台前时间与对照B-Ⅰ组比较有明显差异(P<0.05)。饥饿后复食组平均速度与对照组无差异(P>0.05)。第7 d空间搜索试验中撤平台后B-Ⅱ、B-Ⅲ组其站台穿越次数大于对照B-玉组,但是无差异(P>0.05),站台停留时间百分比大于对照B-Ⅰ组但是无差异(P>0.05)。B-Ⅳ、B-Ⅴ组其站台穿越次数小于对照B-玉组,但是无差异(P>0.05)。站台停留时间百分比小于对照B-Ⅰ组并且有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠饥饿3 d、5 d、7 d后无脑损伤发生,饥饿9 d后有脑损伤发生。复食7d后对其学习记忆有一定的影响。

自制NSE单抗的鉴定及其双抗夹心ELISA方法的建立

目的:制备并鉴定NSE(Neuron-specific enolase)单克隆抗体,建立可检测NSE蛋白的双抗夹心ELISA方法。方法:用本实验室已表达纯化的NSE融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用WB、IP、IF、IHC等方法对获得的NSE单抗进行鉴定及亚型检测。利用辣根过氧化物酶标记纯化后的NSE单抗,建立一个可检测NSE蛋白的双抗夹心ELISA法。结果:通过分析和鉴定,选定2株可稳定分泌抗NSE抗体的杂交瘤细胞株,效价达4.2×107～6.5×107,亚型为IgG2b。免疫印迹结果显示,该抗体不仅能识别细胞内源NSE蛋白,还能识别分泌到细胞培养上清液中的NSE蛋白,此外还可用于免疫荧光及免疫组化检测。文中所建立的双抗夹心ELISA法,最低检测极限为8.85 ng/ml。结论:成功获得了效价高、灵敏度好及特异性强的NSE单抗,建立了一个双抗体夹心ELISA检测系统,具有良好的临床应用前景。

肺癌诊断试剂盒的研制

目的利用特异性与灵敏性较高的神经元特异烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)肺癌相关标志物,研制肺癌双显色的体外联合诊断酶联免疫反应(ELISA)试剂盒。方法将NSE、CYFRA21-1两种抗体按一定比例组合包被到酶标板的板底制成试剂盒。分别以NSE、CYFRA21-1抗原为研究对象,对包被液、包被时间、包被温度因素进行考察,以试剂盒的稳定性、灵敏度、准确性为指标进行结果分析。结果 NSE、CYFRA21-1肺癌双显色ELISA诊断试剂盒4℃放置时有效期为6个月。试剂盒灵敏度为83.8%(129/154),特异度为53.8%(57/106),准确性为71.5%(186/260),受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积Az为0.90,各项指标均较单独的NSE、CYFRA21-1明显提高。结论成功制备双显色ELISA肺癌诊断试剂盒,该试剂盒可提高肺癌检查的准确性、灵敏度,降低假阳性率,具有开发为新型肺癌诊断试剂盒的条件。

NSE及IGF-1在癫痫发作患儿血清中的表达及临床意义

目的更进一步对NSE及IGF-1在癫痫发作患儿血清中的临床表达及其临床意义进行探究。方法方便择取2015年7月—2017年7月于该院儿科接受治疗的120例癫痫发作患儿进行回顾分析,设为观察组,另取120名健康儿童作为对照研究,设为对照组。对两组儿童均行ELISA及放射免疫分析法进行探究,对比两组研究儿童NSE及IGF-1在血清中的表达差异。结果结果显示,对照组儿童IGF-1、NSE分别为(14.48±2.13)μmol/L、(7.11±1.19)μg/L,观察组患者对应数据为(8.82±2.96)μmol/L、(20.35±8.91)μg/L,可见,对照组IGF-1、NSE表达与观察组比较差异有统计学意义,经Pearson相关分析发现,癫痫发作期患儿血清中NSE及IGF-1二者的表达变化间呈明显的正相关(r=0.86,P<0.05);观察组平行联合检测阳性为16例,系列联合检测阳性为0例,尽管平行联合检测灵敏度高于系列联合检测,但系列联合检测的准确度、特异性均明显高于平行联合检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于癫痫患儿的诊断,检测其体内NSE及IGF-1二者联合浓度表达情况具有高敏感性与特异性,值得推广应用。

缺血缺氧性脑病患儿血清中NSE及TEOAE与听力检测关系的临床研究

目的:探讨缺血缺氧性脑病患儿血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达情况,并应用丹麦瞬态耳声发射分析仪(TEOAE)对缺血缺氧性脑病患儿听力进行检测,探讨其关系及意义。方法:收集缺血缺氧性脑病患儿259例作为观察组,选取正常足月新生儿100例作为对照组,应用ELISA法检测两组血清中NSE表达情况,应用TEOAE检查两组患儿的听力情况,观察其关系。结果:观察组患儿血清中NSE的表达明显高于对照组,听力检测通过率明显低于对照组,且未通过组患儿的血清中NSE表达量增高。结论:血清中NSE的高表达与缺血缺氧性脑病患儿听力有关,尽早检测患儿血清中NSE的表达,对评估预后、早期干预治疗及预防有重要意义。

血清TPA、NSE、CYFRA21-1和GPI联合检测对肺癌诊断价值的探讨

目的 :探讨血清 TPA、NSE、CYFRA2 1- 1和 GPI联合检测对肺癌的临床价值。方法 :对 112例原发性肺癌患者和 76例肺良性疾病患者采用酶联免疫吸附法和化学比色法分别测定TPA、NSE、CYFRA 2 1- 1和 GPI。结果 :肺癌组 TPA、NSE、CYFRA2 1- 1和 GPI水平及检测阳性率均明显高于良性肺病及正常对照组 (P <0 .0 1)。鳞癌、腺癌和小细胞肺癌分别以 CYFRA2 1- 1和 TPA、TPA和 GPI、NSE和 GPI升幅较为明显。 1～ 4项标志物联合检测对肺癌检测的敏感性分别为 94 .6 4 %、6 4 .2 8%、4 1.0 7%和 15 .18%。结论 :TPA、NSE、CYFRA 2 1- 1和 GPI联合检测可明显提高肺癌的阳性检出率和检测特异性 ,对肺癌的早期诊断、疗效监测、预后判断有重要意义。