NSO细胞DNA首批国家标准品的建立

目的建立小鼠骨髓瘤NSO细胞DNA含量测定国家标准品。方法使用QIAGEN基因组DNA纯化试剂以及Genomictip 500/G制备了NSO细胞DNA作为标准物质原料。通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳进行纯度和含量测定,每支100μL分装于螺口冻存管。组织5个独立实验室应用紫外分光光度法对我国第一批NSO DNA国家标准品进行协作标定,并评价DNA标准物质的稳定性与适用性。结果所制备的NSO细胞DNA标准品经检测,A260/A280均在1.7~1.9之间,电泳图谱条带单一,纯度符合要求。该DNA标准品经5家实验室协作标定共90次,几何平均含量为87.5μg·mL^-1,平均含量的95%可信区间为86.6~88.5μg·mL^-1。短期稳定性实验表明,该标准品在4℃条件下放置4个月,DNA标准品浓度测定值及/1260/无显著性差异;-20、-70℃贮存1年的长期稳定性结果显示,标准品DNA浓度测定值及A260/A280无显著性差异,电泳条带单一,因此该标准物质应在-20℃条件以下长期保存。在标准品适用性研究中,利用该标准品进行定量PCR法测定,在3 fg·μL^-1~300 pg·μL^-1之间线性良好,标准曲线r^2值>0.999。结论该批NSO DNA国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品用于定量PCR法检测NS0细胞DNA残留量,DNA标准品含量赋值为87.5μg·mL^-1,批号为330002-201701。