新型阿卡斑病毒NSs蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备

【目的】对新型阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)非结构蛋白(non-structura,NSs)进行生物信息学分析,进而制备抗多克隆抗体,为新型AKAV检测及功能研究提供必要材料。【方法】使用蛋白生物信息学在线分析网站,对新型AKAV NSs蛋白进行系统分析。克隆NSs全长基因,利用大肠杆菌表达系统表达NSs重组蛋白,优化蛋白诱导条件并分析重组蛋白的可溶性;收获破碎菌体,经8 mol/L尿素变性、Ni 2+-NTA亲和层析纯化、透析及浓缩后进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定;将纯化的重组NSs蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;应用间接ELISA、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)测定多克隆抗体效价及特异反应性。【结果】生物信息学分析表明,NSs蛋白由91个氨基酸残基构成,等电点为12.10,属于碱性蛋白,不稳定指数约为79.04,平均亲水性为指数为―0.059,为不稳定的亲水蛋白;无跨膜区和信号肽,属于非分泌蛋白。试验成功构建了NSs蛋白原核表达载体pET-32a-NSs,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定显示,成功表达重组NSs蛋白,分子质量为29.3 ku,主要以包涵体形式存在,与生物信息学分析结果一致;制备的多克隆抗体效价可达1∶16384000,Western blotting和IFA结果表明所制备抗体能够与NSs蛋白发生特异性反应,具有较好的特异性。【结论】试验成功获得纯化的新型AKAV NSs蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性;制备获得效价高、特异性好的多克隆抗体,为后续新型AKAV疫苗开发、检测及NSs蛋白功能研究提供了基础。

多层螺旋CT血管成像在小肾癌NSS中的应用价值

目的:探讨多层螺旋CT血管成像(MSCTA)技术在小肾癌保留肾单位手术(NSS)中的应用价值。方法:小肾癌患者67例,随机分为MSCTA组37例,非MSCTA组30例。均行NSS,比较两组手术时间、术中热缺血时间、术中出血量、拔除肾周引流管时间、术后住院时间、术后肾功能,术后并发症发生率。结果:MSCTA组显示,37例患者出现的各种肾血管异常与术中所见一致。MSCTA组和非MSCTA组手术平均时间分别为104 min和125 min,术中热缺血平均时间分别18 min和25 min,术中出血量平均分别为85 mL和130 mL,拔出肾周引流管平均时间分别为2.1 d和3.5 d,术后住院平均时间分别为9.1 d和10.5 d,两组间差异均有统计学意义(P<0.05)。MSCTA组术前、术后患肾GFR分别为(52.1±8.7)mL/min和(50.1±7.7)mL/min(P>0.05),非MSCTA组术前、术后患肾GFR分别为(53.1±7.6)mL/min和(40.1±6.7)mL/min(P<0.05)。血清肌酐及尿素氮术前、术后对比因为受对侧肾功能的影响不能反映对分肾功能的影响。结论:MSCTA能够提供较多的血管异常情况,缩短术中热缺血时间,有利于术后患肾功能的恢复。

不同电针刺激强度对急性脑缺血再灌注大鼠NSS与脑组织含水量的影响

目的研究不同电针刺激强度对急性脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损评分(NSS)与脑组织含水量的影响。方法将50只8周龄健康大鼠随机分为5组:正常组、假手术组、模型对照组、弱电针刺激组、强电针刺激组,每组10只,后3组建立大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注模型,治疗组在缺血再灌注(I/R)6 h后开始针刺。24 h二次针刺后行神经功能缺损评分,然后断头取脑,采用干湿法测定脑组织含水量;对各指标进行统计学分析。结果(1)各干预组大鼠神经功能缺损情况均较前改善(P<0.01),但各组间无明显统计学差异(P>0.05)。(2)弱电针刺激组脑组织含水量较模型对照组无明显变化(P>0.05),强电针刺激组脑组织含水量较模型对照组明显降低(P<0.05),强电针刺激组与弱电针刺激组脑组织含水量无明显差异(P>0.05)。结论急性脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损评分在24 h会有所改善,因此不能说明24 h大鼠NSS的改善是电针的作用效果。强电针刺激能通过降低MCAO再灌注模型大鼠脑组织含水量从而对急性脑缺血再灌注大鼠起保护作用。

番茄斑萎病毒属病毒非结构蛋白NSs的生物信息学分析

番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒编码的非结构蛋白NSs,可能在病毒复制、转录、抑制RNA沉默中起重要作用,本文利用生物信息方法对21个Tospovirus病毒成员的NSs序列进行分析,为进一步研究NSs的功能提供参考信息。从GenBank数据库中下载NSs基因序列,用DNAMAN5.0做NSs相似性矩阵分析,发现一些Tospovirus病毒成员之间的NSs氨基酸序列相似性很低,最低仅为7.1%;用ClustalX2.1进行NSs的氨基酸多序列比对分析,发现Tospovirus病毒成员的NSs相对保守区主要位于NSs的C端的位置,高度保守的氨基酸位点共有9个;PROSITE对NSs进行模体预测分析,结果显示Tospovirus病毒NSs共有的蛋白修饰:C蛋白激酶磷酸化、酪蛋白激酶II磷酸化和N-酰基化。此外,不同种的Tospovirus病毒NSs模体也表现出了多样性的特点。预测结果为下一步研究NSs功能奠定了基础。

布尼亚病毒非结构蛋白NSs与RNA沉默

布尼亚病毒科含5个属,350多种病毒,寄主范围包括植物、动物和人类,主要通过节肢动物传播(仅有汉坦病毒属通过啮齿动物传播),其中大部分病毒危害严重,影响农业生产,威胁人类和动物健康,造成重大经济损失。NSs蛋白是布尼亚病毒S RNA编码的非结构蛋白质,可以抑制RNA沉默,在侵染介体和寄主的过程中起时发挥重要作用。在植物寄主中,NSs蛋白通过与病毒dsRNA结合、抑制dsRNA次生扩增、长距离传播等机制抑制RNA沉默;在动物、人类寄主以及传播介体中,多种证据表明,NSs蛋白也能抑制RNA沉默。RNA沉默是植物和节肢动物中主要的抗病毒机制之一,NSs蛋白抑制RNA沉默对于病毒成功侵染寄主或传播介体非常重要。本文就近年来NSs蛋白在抑制RNA沉默方面的研究做一综述。

英国大学生调查(NSS)及对我国的启示

英国每年一度的全国大学生满意度调查(NSS)受到整个社会的普遍关注,对于提高英国的高等教育质量具有重要的监督和促进作用。作者研究了英国设立这项调查的开展背景、运作方式及调查结果的使用等,分析了该项调查的特点和不足,并提出在我国建立全国性大学生满意度调查以促进我国高等教育质量提升的策略。

鉴别检测裂谷热病毒NSs缺失型疫苗株与野生株模拟物的双重荧光定量RT-PCR方法的建立

为了建立一种能够鉴别检测裂谷热病毒野毒株与NSs缺失型疫苗株的荧光定量RT-PCR方法,本研究通过对裂谷热病毒基因组序列进行比较分析,选择其S节段NSs基因及L节段L基因的无二级结构且保守的区段,分别设计多对引物和探针,通过试验验证并优化反应条件,筛选出最佳引物和探针的组合,建立了可以快速检测裂谷热病毒并区分NSs基因缺失疫苗株和野毒株的双重荧光定量RT-PCR方法。利用该方法检测羊临床常见病原,结果显示该方法仅对裂谷热质粒标准品样品检测为阳性,不与羊常见的其他病原出现阳性反应,特异性强;将裂谷热质粒标准品10倍倍比稀释后利用本研究建立的方法进行检测,结果显示,该方法对NSs和L基因重组质粒标准品的检测下限分别为10拷贝/μL和100拷贝/μL,敏感度高;重复性实验结果显示,该方法组内和组间变异系数均小于2%,重复性好。将NSs缺失型和非缺失型质粒分别转染细胞,提取核酸,利用本方法进行检测,结果显示该方法可有效区分NSs基因缺失型和非缺失型核酸样品。本研究建立的双重荧光定量RT-PCR方法为鉴别野生病毒株和NSs缺失型疫苗株奠定了技术基础。

基于Web的NSA和NSS集成的商务洽谈系统

商务洽谈是解决电子商务冲突的最好方法之一。该文研究和讨论了基于Web的集成商务洽谈的两大实现技术：洽谈软件代理NSA和洽谈支持系统NSS，并给出了一个基于Web的NSS和NSA集成的商务洽谈系统框架。

神经症状评分(NSS)和神经体征评分(NDS)在糖尿病周围神经病变筛查中的临床观察

糖尿病周围神经病变容易并发足病、Charcot神经-骨关节病,甚至截肢[1],肌电图作为周围神经病变筛查的金标准,而NSS和NDS操作简单,适于基层推广。1资料与方法1)以2017年1月至2018年1月糖尿病(DM)患者586例为对象,男302例,女284例,年龄10~83均龄62.7岁。2型糖尿病553例,1型糖尿病25例,特殊类型糖尿病+分型待定8例。其中首次确诊98例,余488例病程5月至23年,均7.2年。其中196例具有DM家族史。

淮阳山病毒NSs基因在THP-1细胞中的稳定表达及其对白细胞介素-6的调节作用

淮阳山病毒(Huaiyangshan virus,HYSV)是一种能引起人类发热伴血小板减少综合征的新型布尼亚病毒。NSs是淮阳山病毒的毒力因子,可能在病毒的致病中起重要的作用。本研究从构建好的含HYSV NSs基因的重组质粒pBluntNSs中扩增出NSs基因,然后克隆到慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen中构建重组质粒pHAGE-NSs;利用脂质体将pHAGE-NSs与包装质粒psPAX2、包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,在荧光显微镜下可见大量绿色荧光,收上清,即慢病毒悬液;将慢病毒悬液感染THP-1细胞后,通过绿色荧光蛋白进行流式分选、Western blot验证获得稳定表达NSs蛋白的THP-1细胞。利用人白介素-6ELISA检测试剂盒检测NSs蛋白对白介素-6的调节作用,结果表明,NSs蛋白能激活THP-1细胞产生白细胞介素-6。

NSS中的潜信道及其封闭方法

NSS是2001年提出的一个新的签名体制.文章首次给出了封闭潜信道的强和弱方法的定义,强方法可以完全阻止潜信息的发送,而弱方法只能以某个概率防止潜信息的传送.随后在NSS数字签名体制中建立了一个潜信道,并给出了封闭它的弱方法.

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒非结构蛋白NSs的原核表达及初步鉴定

目的克隆、表达发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)非结构蛋白NSs,对其功能初步鉴定。方法采用PCR法扩增经密码子优化后的SFTSV NSs基因,并克隆至PGEX-4T-2载体中,构建原核表达载体PGEX-4T-2-NSs,经酶切、测序鉴定后转化表达菌BL21(DE3),再经诱导、纯化得到谷胱甘肽S-转移酶(GST)-NSs融合蛋白,用Western Blot验证融合蛋白GST-NSs的抗原性。结果成功构建了GST-NSs融合蛋白原核表达载体,并在BL21细菌中获得高效表达;纯化后的融合蛋白具有良好的抗原性。结论实现了SFTSV重组NSs蛋白的原核高效表达,为进一步深入研究其结构与功能奠定了基础。

美国国家强风暴实验室(NSSL)文献产出分析

NSSL的研究,既有基础研究层面的成果(以外场试验为代表),更有基础研究与业务应用“最后一公里”意义上的以提升业务能力为目标的研究(以新技术平台研究为代表),同时兼顾强天气的国际、国内环境、合作和文化等建设。

NSS自身安全防护系统的设计与实现

介绍了网络安全扫描系统(NSS)采用的两种安全防护保护机制和相关算法的描述。

利用酵母双杂交技术筛选鉴定与番茄环纹斑点病毒NSs蛋白互作的西花蓟马蛋白

【目的】筛选鉴定西花蓟马Franiklinella ocicdentalis体内与番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot virus,TZSV)NSs蛋白互作的介体因子。【方法】利用酵母双杂交技术筛选与TZSV NSs互作的西花蓟马蛋白;进行序列分析鉴定后,将捕获的蛋白与NSs基因回转到酵母细胞,利用营养缺陷型培养基鉴定蛋白互作情况。再利用GST Pull-down技术验证TZSV NSs与鉴定出的西花蓟马蛋白的体外互作关系。【结果】构建了TZSV NSs的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-NSs,确定了诱饵质粒对酵母AH109细胞无毒性,并且无自激活活性。序列分析发现与TZSV NSs互作的西花蓟马蛋白为类电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion-selective channel-like,VDAC)。酵母回转实验显示TZSV NSs与西花蓟马VDAC在酵母细胞内存在特异性互作。GST Pull-down结果表明TZSV NSs与西花蓟马VDAC在体外存在相互作用。【结论】通过酵母双杂交和GST Pull-down技术,分别在酵母细胞内和体外证实了TZSV NSs和西花蓟马VDAC存在特异性互作。这些结果有助于揭示西花蓟马VDAC蛋白调控西花蓟马持久传毒的机制,为虫传病毒病的防治提供理论基础。

比较NSS和RN对局限性肾癌的临床应用可行性及疗效

目的:探讨局限性肾癌采用保留肾单位手术(NSS)和肾癌根治手术(RN)治疗的临床应用可行性及疗效。方法:选取局限性肾癌患者100例,时间在2016年10月至2018年10月期间,按照随机数字表法分组,对照组(n=50)采用RN 治疗,观察组(n=50)采用NSS治疗,分析手术时间、术中出血量、住院时间、引流管留置时间、治疗前后Scr、BUN水平以及并发症发生率。结果:观察组手术时间、术中出血量、住院时间、引流管留置时间、治疗前后Scr、BUN水平以及并发症发生率均低于对照组, P <0.05。结论:局限性肾癌采用NSS治疗效果较好,可有效改善患者尿素氮以及血清肌酐水平,缩短手术时间与住院时间,减少出血量,降低并发症发生率。

云南省不同地区烟草上TSWV NSs氨基酸序列分析

【目的】探究不同正番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)分离物中NSs与其地理来源和寄主二者之间的相关性,阐明云南不同地区8个烟草样品TSWV NSs适应性进化情况。【方法】利用RT-PCR、克隆、转化和测序技术,从云南不同地区已经确定感染TSWV的8份烟草样品中获得NSs氨基酸序列。采用DNAMAN 8.0和MEGA 7.0软件,对云南不同地区8个烟草样品与GenBank公布的烟草、番茄和辣椒上31个TSWV NSs氨基酸序列进行比对分析。通过The Selecton Server软件,对云南不同地区8个烟草样品TSWV NSs氨基酸序列进行选择压力分析。【结果】云南不同地区8个烟草样品与同样来自中国云南烟草、番茄和辣椒上TSWV NSs氨基酸序列在系统发育树中处于同一支,亲缘关系最近;与来自韩国的番茄和辣椒上TSWV NSs氨基酸序列位于同一大支,亲缘关系较近;而与来自欧洲保加利亚烟草上TSWV NSs氨基酸序列处于不同分支,亲缘关系最远。在云南不同地区8个烟草样品TSWV NSs氨基酸序列中未检测到正选择位点。【结论】不同TSWV分离物中NSs与其地理来源有明显的相关性,但跟寄主的相关性不大。云南不同地区8个烟草样品TSWV NSs稳定的保持其增强病毒症状、抑制沉默等功能。

零速修正在GNSS/INS组合导航中的应用

探讨了零速修正在GNSS/INS组合导航中的应用。给出了GNSS/INS松组合的数学模型,针对载体的静止状态,设计了两种零速修正方式并给出了相应的量测方程,对实测数据以不同的实验方案进行解算和分析,实验表明:同时使用零速修正和GNSS位置、速度观测值时,可以显著提高载体处于静止状态时的速度精度;只使用零速修正和GNSS速度观测值时,又可以提高载体处于静止状态时的位置精度;但零速修正对姿态精度的改进不明显。

NSS数字签名方案安全性能分析

研究基于NTRU公钥密码体制的一种数字签名方案—NSS数字签名方案。本文对NSS数字签名方案的安全性进行详细的分析,主要讨论五种攻击方式,即穷举攻击、对公钥的格攻击、副本格攻击、格基规约攻击和副本平均值攻击,并得出结论:在大维数情况下,NSS数字签名方案能够很好地对抗这五种攻击。

银行间国债利率期限结构的实证研究——基于Nelson-Siegel-Svensson模型

本文主要运用NSS 模型对银行间国债的利率期限结构进行实证研究,从Wind 数据库选取了2016年1月4日至2018年12月31日的10个到期期限的银行间国债的即期利率。通过对数据的分析发现我国银行间国债的利率符合流动性偏好理论。通过MATLAB 编程,将数据代入到程序中得到每一个交易日的参数估计值,参照Diebold and Li 的两步法将时间参数固定在均值上,然后对参数进行二次估计。最后分析认为NSS 模型对我国银行间国债利率期限结构的拟合效果比较理想。