淮阳山病毒NSs基因在THP-1细胞中的稳定表达及其对白细胞介素-6的调节作用

淮阳山病毒(Huaiyangshan virus,HYSV)是一种能引起人类发热伴血小板减少综合征的新型布尼亚病毒。NSs是淮阳山病毒的毒力因子,可能在病毒的致病中起重要的作用。本研究从构建好的含HYSV NSs基因的重组质粒pBluntNSs中扩增出NSs基因,然后克隆到慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen中构建重组质粒pHAGE-NSs;利用脂质体将pHAGE-NSs与包装质粒psPAX2、包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,在荧光显微镜下可见大量绿色荧光,收上清,即慢病毒悬液;将慢病毒悬液感染THP-1细胞后,通过绿色荧光蛋白进行流式分选、Western blot验证获得稳定表达NSs蛋白的THP-1细胞。利用人白介素-6ELISA检测试剂盒检测NSs蛋白对白介素-6的调节作用,结果表明,NSs蛋白能激活THP-1细胞产生白细胞介素-6。

鉴别检测裂谷热病毒NSs缺失型疫苗株与野生株模拟物的双重荧光定量RT-PCR方法的建立

为了建立一种能够鉴别检测裂谷热病毒野毒株与NSs缺失型疫苗株的荧光定量RT-PCR方法,本研究通过对裂谷热病毒基因组序列进行比较分析,选择其S节段NSs基因及L节段L基因的无二级结构且保守的区段,分别设计多对引物和探针,通过试验验证并优化反应条件,筛选出最佳引物和探针的组合,建立了可以快速检测裂谷热病毒并区分NSs基因缺失疫苗株和野毒株的双重荧光定量RT-PCR方法。利用该方法检测羊临床常见病原,结果显示该方法仅对裂谷热质粒标准品样品检测为阳性,不与羊常见的其他病原出现阳性反应,特异性强;将裂谷热质粒标准品10倍倍比稀释后利用本研究建立的方法进行检测,结果显示,该方法对NSs和L基因重组质粒标准品的检测下限分别为10拷贝/μL和100拷贝/μL,敏感度高;重复性实验结果显示,该方法组内和组间变异系数均小于2%,重复性好。将NSs缺失型和非缺失型质粒分别转染细胞,提取核酸,利用本方法进行检测,结果显示该方法可有效区分NSs基因缺失型和非缺失型核酸样品。本研究建立的双重荧光定量RT-PCR方法为鉴别野生病毒株和NSs缺失型疫苗株奠定了技术基础。

侵染鸢尾的番茄斑萎病毒鉴定

2020年,在云南中医药大学校园发现叶片表现褪绿斑点、坏死环斑症状的鸢尾植株。用电子显微镜在病叶汁液中观察到典型的正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)病毒粒子。在用感病叶片汁液摩擦接种的普通烟、本生烟上观察到系统坏死斑症状,中国辣椒(PI152225)的接种叶片出现局部坏死斑,但无系统侵染。为进一步明确病原,用RT-PCR扩增番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)的NSs和N基因,序列测定发现,分别与分离自云南番茄和旱金莲的TSWV分离物具有最高的氨基酸序列相似性(99.79%和100%)。结果表明引起鸢尾褪绿斑点病的病原是番茄斑萎病毒。

Characterization of a recombinant Akabane mutant virus with knockout of a nonstructural protein NSs in a pregnant goat model

Dear Editor,Akabane virus(AKAV),an orthobunyavirus,is transmitted primarily by biting midges and is widely distributed throughout the world except the Europe.AKAV was first isolated from mosquitoes in Japan(Oya et al.,1961).Although pregnant cows,ewes,and goats infected with AKAV exhibit no clinical signs of disease,in utero infections result in abortion,premature birth,stillbirth。