树突状细胞通过NT-3/TrkC信号通路调控神经干细胞存活的体外研究

目的研究共培养状态下树突状细胞(dendritic cell,DC)对神经干细胞(neural stem cell,NSC)存活的影响及其作用机制。方法体外分离、纯化SD大鼠原代DC和NSC,将二者用Transwell技术共培养,用NT-3特异性抗体中和NT-3的表达;然后采用qRT-PCR方法检测DC中神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)的mRNA水平,流式细胞术检测NSC凋亡;同时用免疫荧光、Western blot技术确定NSC表面NT-3特异性受体Trk C的表达。结果与DC单独培养组相比,共培养体系中,DC表达NT-3水平显著性增强(P<0.05);同时共培养能显著增加NSC存活,该效应能被NT-3特异性中和性抗体阻断;共培养能够增加NSC中NT-3特异性受体TrkC表达(P<0.05),并上调TrkC磷酸化水平,而NT-3特异性抗体能够抑制TrkC表达和磷酸化上调(P<0.05)。结论 DC和NSC共培养能够增加DC中NT-3表达,高表达的NT-3则通过NSC膜上的TrkC受体促进NSC的存活。

施万细胞通过NT-3/TrkC信号通路促进SACC嗜神经侵袭的研究

目的:研究共培养状态下施万细胞(SCs)对唾液腺腺样囊性癌细胞(SACCs)侵袭、迁移能力的影响及可能机制。方法:用ELISA等检测NT-3、TrkC在共培养状态下的表达情况;通过划痕、侵袭、迁移实验和3D共培养实验,评估各组细胞的侵袭与迁移能力。结果:共培养条件下,NT-3,TrkC表达较单独培养明显升高;SACC-83细胞和SCs的侵袭、迁移能力均显著增强;SCs可早期定向趋化迁移至肿瘤。结论:NT-3/TrkC信号通路可能通过介导SCs向肿瘤细胞的迁移来促进SACC嗜神经侵袭的发生。

电针对食蟹猴前交叉韧带损伤后NT-3/TrkC信号通路的调节作用

目的观察电针对食蟹猴前交叉韧带(ACL)损伤后NT-3/Trk C信号通路的影响,探讨电针治疗ACL损伤后本体感觉减退的作用机制。方法 21只食蟹猴随机分为3组:电针干预组9只、模型对照组9只和空白对照组3只,其中对电针干预组和模型对照组进行单侧ACL损伤造模,并给予电针干预组从术后7天开始电针干预,持续时间为15 min,每天1次,共干预12周。在干预4、8、12周后,运用RT-q PCR和Western blot技术检测L2-S1脊背神经节(DRG)中NT-3、Trk C以及ACL中GAP-43的mRNA和蛋白表达水平。结果在同一时间点,与空白对照组比较,模型对照组DRG中NT-3、Trk C的mRNA、蛋白相对表达量上升,ACL中GAP-43的mRNA、蛋白相对表达量上升,差异有统计学意义(P<0.05);与模型对照组比较,电针干预组DRG中NT-3、Trk C的mRNA、蛋白相对表达量下降,ACL中GAP-43的mRNA、蛋白相对表达量上升,差异有统计学意义(P<0.05)。模型对照组NT-3、Trk C和GAP-43的mRNA和蛋白表达量随时间的增加而逐渐下降,电针干预组NT-3、Trk C和GAP-43的mRNA和蛋白表达量随时间的增加而逐渐上升,均差异有统计学意义(P<0.05)。结论电针能够通过激活NT-3/Trk C信号通路,提升DRG中NT-3、Trk C和局部GAP-43的表达量,在ACL本体感觉的康复中发挥重要的作用。

推拿影响坐骨神经损伤大鼠NT-3及其受体TrkC表达的研究

目的:观察推拿对坐骨神经损伤大鼠行为学、NT-3、TrkC的影响,探讨推拿促进坐骨神经损伤修复的机制。方法:采用大鼠坐骨神经夹持损伤模型,通过斜板实验、BBB评分观察正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组大鼠的行为学变化;通过免疫组化染色观察各组大鼠脊髓腹角NT-3、TrkC的表达情况,最后统计比较各组差异。结果:模型组和模型对照组大鼠行为学检测提示坐骨神经损伤大鼠的运动功能明显降低,在推拿干预后,斜板试验、BBB评分明显升高,神经功能恢复情况优于模型组和模型对照组;模型组、模型对照组及推拿组NT-3、TrkC表达与正常组相比均有统计学差异,推拿组NT-3表达与模型组相比也有显著差异,推拿组更高。结论:中医推拿可以通过促进NT-3及其高亲和力受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,促神经元存活的作用,最终改善坐骨神经损伤大鼠的运动功能,促进神经功能恢复。

创伤性肌筋膜触发点的形成对大鼠骨骼肌肌梭内NT-3及受体TrkC的表达影响

目的:确定创伤性肌筋膜触发点的形成对其周围肌梭组织内部蛋白和基因表达水平的影响,并分析触发点牵涉痛临床特点和针刺“打跳”的分子生物学依据。方法:32只7周龄雄性SD大鼠随机均分为实验组和对照组,实验组采取对腓肠肌定点钝性打击结合离心运动的模式进行连续8 w造模。造模结束后两组均正常饲养4w。12 w结束后,检测造模成功指标,并在此基础上提取各组腓肠肌触发点组织和非触发点组织,以及各组比目鱼肌、胫骨前肌和跖肌处骨骼肌分别进行NT-3和NT-3的受体TrkC蛋白的免疫印迹学实验和基因的聚合酶链式反应实验。结果:与对照组相比,NT-3蛋白在触发点大鼠内外侧腓肠肌中的含量均表现为降低(P<0.05),而NT-3 mRNA在触发点大鼠内外侧腓肠肌、趾肌、胫骨前肌和比目鱼肌中的含量均表现为降低(P<0.05);TrkC蛋白在触发点大鼠内侧腓肠肌、趾肌和胫骨前肌中的含量也均表现为降低(P<0.05),而TrkC mRNA在触发点大鼠内外侧腓肠肌和趾肌含量也均表现为降低(P<0.05)。结论:慢性肌筋膜触发点的形成诱发了受累肌和多块关联肌肌梭内NT-3、受体TrkC蛋白和基因的下调。

NT-3对耳蜗螺旋神经节发育的调控机制研究进展

耳蜗螺旋神经元(spiral ganglion neurons,SGN)的存活和增殖依赖于各种神经营养因子的调节。SGN的损伤和发育异常均可导致感音神经性耳聋,但SGN无再生能力,听力下降往往很难恢复。因此,对听力下降进行早期干预,防止其不可逆的损伤尤为重要。神经营养素3(neurotrophin-3,NT-3)在耳蜗中高表达并促进SGN的存活、轴突的生长和损伤的修复,这已得到广泛的共识,但对其如何将信息传递到细胞内,从而调节SGN的发育仍然不清楚。本文就NT-3在SGN发育期中作用机制的研究进展作一综述。

神经营养素3和受体在早期人胚脑发育中的定位表达

目的:了解在早期人胚脑的发育过程中,大脑神经元的增殖情况;了解神经营养素3(NT-3)和受体TrkC在人胚脑发育过程中的影响。方法:用6周龄的人胚进行免疫组织化学ABC法染色,以PCNA作为大脑神经元的增殖的指标,NT-3和受体作为了解影响人胚脑发育因素的指标。结果:在人胚胎早期发育阶段,PCNA免疫阳性反应物主要分布于人胚前脑的神经细胞核中,NT-3免疫阳性反应物主要分布于前脑脑室神经上皮层的胞质中和神经细胞的轴突中,其受体TrkC散在分布于人胚前脑神经细胞膜;发育过程中NT-3及其受体在脑室神经上皮层上呈现不同程度的免疫阳性反应。结论:NT-3及其受体TrkC在早期的人胚胎脑发育中呈现表达,提示NT-3可能诱导神经细胞增殖,并协同其它生长因子促进轴突的生长,保证神经元胞体的存活。

神经营养素3和受体在人胚脊髓发育中的定位表达

目的了解神经营养素3(NT-3)和受体TrkC在人胚脊髓发育过程中的定位分布。方法用4、5、6周龄3个时段的人胚进行免疫组织化学ABC法染色以了解不同时段NT-3和受体在人胚脊髓发育中的定位表达和分布情况。结果在人胚胎脊髓发育的3个实验段,NT-3阳性颗粒主要分布于胞质,其受体TrkC主要分布于胞膜;发育过程中NT-3及其受体在室管膜层-套层-边缘层3条带上呈现不同程度的免疫阳性反应。结论NT-3及其受体TrkC在不同时期的人胚胎脊髓发育中进行表达,提示NT-3可能诱导神经干细胞分裂增殖,并协同其它生长因子促进轴突的生长,保证神经元胞体的存活。

空肠弯曲菌脂多糖对大鼠脊髓髓鞘损伤的实验研究

目的探讨空肠弯曲菌脂多糖(Cj-LPS)对大鼠脊髓髓鞘损伤的影响。方法 Wistar大鼠分为对照组(NC组)、脂多糖组(Cj-LPS组)和抗LPS组(Anti-LPS组)。NC组使用试剂为生理盐水混合完全弗氏佐剂(CFA);Cj-LPS组试剂则由Cj-LPS、CFA和生理盐水组成;抗LPS组试剂为特异性抗Cj-LPS IgG混合CFA。注射后第4周和第6周分别处死各组大鼠。光镜观察脊髓组织形态变化,RT-PCR检测神经营养因子-3(NT-3)及其受体TrkC和神经生长抑制因子NogoA及其受体NgR mRNA的表达。结果 Cj-LPS组大鼠出现脊髓髓鞘损伤,NT-3/TrkC mRNA的表达下降,NogoA/NgR mRNA的表达增加;与Cj-LPS组比较,抗LPS组脊髓髓鞘损伤减轻。结论 Cj-LPS可诱导大鼠脊髓髓鞘损伤,而抗LPS抗体可以改善由Cj-LPS诱导的大鼠脊髓髓鞘损伤。

腺样囊性癌TrkC差异表达的PDX模型的建立与鉴定

目的:建立并鉴定腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)关于原肌球蛋白受体激酶C(trypomyosin-receptor kinase C,Trk C)差异表达的人源肿瘤异种移植模型(patient-derived tumor xenograft,PDX)。方法:收集北京同仁医院头颈外科收治的腺样囊性癌患者的新鲜肿瘤组织,皮下接种至免疫缺陷鼠体内,并不断传代至新一批的小鼠体内直至肿瘤稳定生长。分析患者ACC肿瘤组织在免疫缺陷动物体内自然生长状态下的组织病理特征。结果:本次实验共收集ACC标本10例,其中5例成功建立PDX模型,3例完成鉴定。建立的PDX模型病理形态和组织结构与患者肿瘤组织保持一致;3例PDX模型Trk C表达呈现不同的特点。结论:PDX模型可以很好地保留患者的肿瘤异质性,有助于深入研究ACC发病机理,为以Trk C为靶点的临床前药物筛选提供动物模型。