挤压伤后脊髓神经元NT-3和NT-4的表达变化

为了研究脊髓挤压伤后 ,脊髓神经元 NT-3和 NT-4的早期变化 ,本研究采用免疫组织化学 ABC法和阳性神经元计数 ,结果在大鼠脊髓证明了 NT-3免疫阳性反应产物主要在胞核着色 ,NT-4则胞浆及胞核均着色。腹角的 NT-3阳性神经元数在脊髓挤压伤后 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组明显增高 ( P<0 .0 1) ;背角的 NT-3阳性神经元仅 2 1d组较正常组有显著增加 ( P<0 .0 1)。腹角的 NT-4阳性神经元数在损伤后 2 4h组、7d组和 2 1d组均较正常组有显著增加 ( P<0 .0 5 ) ,且随时间的延长呈增加趋势 ( P<0 .0 5 ) ;背角的 NT-4阳性神经元数 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组显著增加 ( P<0 .0 1) ,随时间延长仍有增加趋势 ( P<0 .0 1)。结论 :在脊髓挤压伤后的早期腹、背角 NT-3和 NT-4阳性神经元数均有增多 ,提示内源性 NT-3和

大鼠脊髓挤压伤后NT-3、NT-4在腹角运动神经元表达的变化

我们前面的研究已证实 ,神经生长因子和脑源性神经营养因子与成年大鼠挤压性脊髓损伤修复有关。在本研究中 ,通过免疫组织化学 ABC法 ,我们探讨了挤压伤后不同时间脊髓腹角神经元 NT- 3和 NT- 4的表达。结果显示 :在对照组 ,NT- 3和 NT- 4的阳性反应主要分布在脊髓腹角神经元。挤压性脊髓损伤后 7天和 2 1天 ,NT- 3阳性神经元的数量较对照组和 2 4小时组明显增加。比较之 ,损伤后 2 4小时和 7天 ,NT- 4阳性神经元的数量已较正常者增多 ,且 NT- T的反应强度 2 1天者较 2 4小时和 7天者有增多。结果表明 NT- 3和 NT- 4的表达在挤压性损伤后的脊髓腹角神经元被不同程度地上调。提示NT- 3和 NT-

内源性GDNF、NT-4对针刺猫脊髓备用根背根节神经元的作用

为了解部分背根切除和针刺及内源性GDNF和NT-4对体外培养备用背根节（DRG）的作用，本研究对5只成年猫进行双侧备用根手术（切除双侧L1～L3和L7～S2 DRG，其中L6DRG作为备用背根）。术后当日开始针刺一侧L6脊神经后肢分布区的两组穴位，即足三里和悬钟、伏兔和三阴交，每天一次，每次30min，连续针刺7d后无菌条件下取出双侧L6 DRG进行体外培养，24h后全量换液，并将针刺侧的一部分培养孔的培养液分别用含有200ng／ml抗GDNF和NT4抗体培养液替换，分别作为抗GDNF和NT4抗体封闭组。7d后终止培养，于显微镜下用显微测微尺测量神经突起的长度；并用抗NSE抗体行免疫细胞化学ABC法染色进行神经元鉴定。结果显示：（1）免疫细胞化学染色可见体外培养的细胞95％以上为NSE阳性细胞，且为典型的体外培养的DRG神经元；（2）体外培养备用根组和抗GDNF抗体组神经突起的平均长度比针刺组的短（P〈0．05）；（3）而针刺组神经突起的平均长度与抗NT-4抗体组间无差异（P〉0．05）；两抗体组平均突起长度比备用根组的突起长（P（0．05）。本研究结果提示，针刺可促进体外培养DRG神经元突起的生长，进而可能与脊髓可塑性密切相关；内源性GDNF有促进DRG神经元突起生长的作用；而内源性NT4在DRG神经元突起生长中发挥的作用却不明显。

针刺对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的观察NT-4在针刺部分去背根猫的L6背根节(手术侧和非手术侧)和脊髓表达的时空变化,以了解NT-4与针刺促进脊髓可塑性的关系。方法25只成年健康雄猫随机分为5组即正常组,备用根术(动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根)后7d组与14d组、针刺备用根术(动物行单侧部分去背根术后针刺)后7d组与14d组。动物处死后,取L6背根节及L3、L5、L6节段脊髓,用兔抗NT-4(1∶200)抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中NT-4的分布及含量。结果针刺备用根7d组,针刺侧DRG内NT-4阳性神经元数较正常组和术后7d组减少(P<0.05),较相应非针刺侧多(P<0.05);针刺14d组,针刺侧DRG阳性神经元数比针刺7d组术后14d和同组非针刺侧增高(P<0.05),且恢复至正常水平。针刺7d,针刺侧脊髓L6板层NT-4阳性神经元数较术后7d组及正常组增加(P<0.01)。针刺14d时,L5、L6板层阳性神经元数较正常组及术后14d组相应节段均增加(P<0.01)。针刺后L3背核NT-4阳性神经元数无明显变化(P>0.05)。L5板层NT-4阳性神经元在针刺后14d时比针刺后7d时增多(P<0.05)。结论以上结果提示NT-4与针刺促进脊髓可塑性有关;针刺备用背根对非针刺侧DRGNT-4的表达亦有影响,提示非针刺侧背根节NT-4亦可能参与了脊髓可塑性和针刺促进脊髓可塑性。

戊四氮诱导癫痫大鼠脑N-cadherins和NT-4的变化及灵芝酸的干预作用

目的:观察戊四氮(PTZ)诱导大鼠癫痫后脑神经型钙粘附素(N-cadherins)和神经营养因子-4(NT-4)变化及应用灵芝酸进行干预与治疗,主要研究灵芝酸预防和治疗癫痫的痫性发作的机理。方法:采用健康的雄性Wistar实验大白鼠33只,按随机分配原则分成正常对照组、癫痫模型组和灵芝酸治疗组每组11只。癫痫模型组与灵芝酸治疗组均采用诱导癫痫亚惊厥发作剂量腹腔注射戊四氮制备Wistar大白鼠慢性点燃痫性模型。在实验室冰盒低温条件下迅速提取大鼠脑组织,采用Western-Blotting方法检测大鼠脑N-cadherins和NT-4的变化。结果:实验性诱导癫痫大鼠痫性模型制备成功,灵芝酸治疗组和癫痫模型组实验动物都达到癫痫点燃的实验标准,与癫痫模型组动物相比,灵芝酸组大鼠潜伏期明显延长,但持续时间之间的差别没有显著性。实验检测Western-Blotting结果发现:PTZ诱导癫痫发作后N-cadherins蛋白表达水平明显高于正常对照组,差异有显著性(P<0.01);用灵芝酸干预后,N-cadherins的表达有明显下降,差异有显著性(P<0.01),癫痫模型组大鼠脑NT-4蛋白含量比正常对照组蛋白含量升高,差异具显著性(P<0.05);灵芝酸组大鼠脑NT-4蛋白含量较癫痫模型组蛋白含量升高,差异具显著性(P<0.05)。结论:灵芝酸作用癫痫大鼠后N-cadherins蛋白表达降低,调整机体病变神经元的兴奋性,灵芝酸还能够增强NT-4的表达从而减轻癫痫发作给神经系统造成的损伤,从而起到抗癫痫作用。

NT-4在挤压伤脊髓背角表达的时相变化(摘要)

目的 :了解ＮＴ - 4在挤压伤脊髓背角表达的变化 .方法 :采用本室建立的成年ＳＤ大鼠 (Ｔ13 -Ｌ1)脊髓挤压伤模型 ,分别于术后 2 4ｈ ,7ｈ ,2 1ｈ处死动物并设正常对照组 ,取Ｌ3 节段脊髓制作 2 0 μｍ厚冰冻连续切片 ,用抗ＮＴ - 4抗体按ＡＢＣ法行免疫组织化学染色 .观察ＮＴ - 4在挤压伤位点尾侧端 (Ｌ3 )背角的表达 ,计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数 .结果 :ＮＴ - 4的阳性反应物主要分布于脊髓背角的神经元和胶质细胞 .挤压伤后 2 4ｈ ,背角ＮＴ - 4的免疫阳性神经元和胶质细胞数及反应强度与正常者比较无明显变化 (Ｐ >0 0 5 ) ,但从术后第 7ｈ至术后第 2 1ｈ则逐渐增加且高过正常者水平 (Ｐ <0 0 1) .结论 :脊髓挤压伤位点尾侧端背角ＮＴ - 4的表达从术后第 7ｈ开始明显增加 ,术后第 2 1ｈ时又进一步增多 .提示ＮＴ -

NT-4在成年猴脊髓的表达

目的探讨NT-4在成年猴脊髓的表达分布情况,为成年猴脊髓中该生长因子的表达提供可靠的免疫组织化学证据。方法云南成年健康雄性猕猴5只,平均体重6 kg左右,氯氨酮(0.25 ml/kg)肌肉注射麻醉后,Zamboni液经心脏主动脉插管灌注固定动物,取T8脊髓节段入4%多聚甲醛后固定(4℃)6小时。制作20μm厚的连续冰冻切片,间隔取片后,分别以抗NT-4抗体行免疫组化ABC染色。观察各生长因子在猴脊髓的表达分布情况。结果NT-4的免疫阳性反应产物在成年猴脊髓腹角神经元、脊髓背角神经元和脊髓中央管(Ⅹ板层)均有分布。结论成年猴脊髓存在多肽生长因子NT-4的表达,提示多肽生长因子在成年猴脊髓的生理过程中发挥作用。

全脑缺血再灌注大鼠额叶、海马、丘脑EGF和NT-4／5的动态表达

目的:探讨全脑缺血再灌注大鼠额叶、海马、丘脑的表皮生长因子(EGF)和神经营养因子-4/5(NT-4/5)含量变化,以揭示EGF和NT-4/5对额叶、海马、丘脑缺血再灌注损伤的动态保护作用。方法:选用Wistar老龄大鼠,雌雄随机分组,对照组5只,实验组分全脑缺血15分钟组,缺血15分钟再灌注1小时、6小时、2天、4天、9天组,每组5只。结果:正常老龄大鼠额叶、海马、丘脑均有少量EGF和NT-4/5表达。额叶仅于再灌注2天EGF表达明显增加;海马于再灌注6小时～4天EGF表达呈持续增加,且4天时其表达呈高峰;丘脑于再灌注2～9天期间,EGF表达也呈持续性增加。额叶缺血再灌注后NT-4/5表达明显减少,于再灌注9天才恢复正常;海马于缺血再灌注后有一过性NT-4/5表达减少,但很快恢复正常并有一定量增加;丘脑仅有一过性NT-4/5表达减少。结论:缺血缺氧时额叶缺乏早期快速的EGF神经保护机制,且在缺血中晚期其神经保护作用也比较有限;海马具有反应快捷、作用持久的EGF神经保护机制;丘脑具有迟发性EGF神经保护机制。额叶和海马具有迟发性NT-4/5神经保护机制,丘脑NT-4/5神经保护机制比较弱。

神经生长因子家族成员NGF、BDNF、NT-3和NT-4在猫L_6脊髓的分布

采用免疫组织化学方法观察神经生长因子家庭成员 NGF、 BDNF、 NT3和 NT4在成年猫 L6 脊髓的分布。结果 :在L6 脊髓灰质均可见四种生长因子的免疫阳性细胞 ,这些细胞主要是腹角及背角深部的大神经元及背角浅层的小神经元。灰质内亦内 NGF、NT3及 NT4阳性的胶质细胞 ,但数量多少不等。其中 NT3者最多 ,其次是 NGF,NT4者最少。此外 , 板层内还可见较多 BDNF及少量 NT- 3阳性神经膨体。本文结果表明 ,在成年猫脊髓存在 NGF、BDNF、NT3和 NT4。

神经营养素-4(NT-4)在昆虫杆状病毒表达系统中的克隆与表达

目的 通过昆虫杆状病毒表达系统的优势，表达出具有生物学活性的神经营养素-4（ hNT-4）蛋白。方法 通过 PCR方法获得 hNT-4成熟肽的基因，将其连接到昆虫表达载体 pAcGP67B上，在昆虫细胞 Sf9中进行表达。对表达产物进行免疫原性和生物学活性测定。结果 获得 hNT-4蛋白的表达产物， SDS-PAGE电泳显示表达产物相对分子质量为 15 000。 经 Western-blot验证，表达上清及细胞全蛋白均有一条能与抗人 NT-4抗体发生特异性免疫反应的条带。经 PC12细胞测定，表达上清中的 rNT-4蛋白具有明确的生物学活性。结论 hNT-4在昆虫杆状病毒表达系统中的表达为今后进一步深入研究 hNT-4的功能及其在临床中的应用提供了条件。

部分背根切断对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的 探讨 NT- 4在正常猫和部分去背根猫的 L6 背根节 (手术侧和非手术侧 )和脊髓 板层与背核表达的变化。方法 成年健康雄猫 15只分为正常组、备用根术后 7d组和 14 d组 (动物行单侧部分去背根手术 ,即切除一侧 L1 - L5、L7- S2 背根节 ,保留 L6 为备用根 ) ,采用免疫组化 ABC法 ,观察、计数各组背根节、脊髓实验侧 板层 (L3、L5、L6 )和背核 (L3)中 NT- 4的分布及含量。结果 1去部分背根后 7d,备用背根节 (术侧 )中 NT- 4阳性神经元数比正常组显著减少 (P<0 .0 5 ) ,但较非术侧明显增多 (P<0 .0 5 ) ;至术后 14 d,术侧备用背根节 NT- 4阳性神经元比正常组、7d组和非术侧均减少 (P<0 .0 5 )。 2正常组、术后两时相 L3、L5、L6 术侧脊髓 板层和 L3背核内NT- 4阳性神经元数均无明显变化。结论 去部分背根主要导致备用背根节 NT-

戊四氮致痫大鼠脑组织NT-4的变化及百里香与薄荷精油的干预作用

目的观察戊四氮致痫大鼠脑组织神经营养因子-4（Neurotrophin-4，NT-4）的变化，利用百里香与薄荷精油制备雾化吸入剂进行干预治疗，研究癫痫的发病机理及精油的作用机制。方法健康雄性Wistar实验大鼠40只，随机分为正常对照组、癫痫模型组、精油治疗I组、精油治疗Ⅱ组、每组10只。模型组和治疗组均用致痫亚惊厥剂量的戊四氮（PTZ）腹腔注射制作Wistar大鼠慢性点燃模型。在低温条件下迅速取脑，通过免疫组化检测皮质区NT-4的变化。结果实验性癫痫大鼠模型制作成功，精油组和癫痫模型组实验动物均达到点燃标准，与癫痫模型组动物相比，精油组大鼠潜伏期劈显延长，但持续时间之间的差别没有显著性。免疫组化检测实验结果表明：癫痫模型组大脑皮质NT--4含量比正常对照组增加，差异显著具有统计学意义性（P〈0．05）；精油组NT-4含量比癫痫模型组增加，差异显著有统计学意义（P〈0．01）。结论精油能够增强NT-4的表达，减轻癫痫发作时神经系统的损伤，可能有抗癫痫作用。

大鼠脊髓损伤早期CNTF与NT-4表达变化及其相互关系

目的探讨内源性睫状细胞神经生长因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)和神经营养因子4(neurotrophin-4,NT-4)在大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)早期的表达变化及其相互关系,为SCI神经营养因子疗法提供理论依据。方法成年Sprague Dawley(SD)大鼠45只随机分为假手术(Sham)组、SCI-12h、SCI-1d、SCI-3d和SCI-7d组(n=9)。各SCI组大鼠均采用改良Allen's法制备T10节段脊髓顿挫伤模型,用BBB(BassoBeattie-Bresnahan locomotor,BBB)评分法评估各组大鼠后肢运动功能;采用荧光定量PCR(Q-PCR)及免疫组织化学染色检测大鼠脊髓顿挫伤后CNTF与NT-4的表达情况;利用GeneMANIA数据库对CNTF与NT-4的相互作用进行预测分析。结果术后Sham组大鼠BBB评分不变,SCI组大鼠损伤平面以下完全瘫痪,BBB评分为0,SCI-7d组评分较SCI-12h组高(P<0.01),但仍低于Sham组(P<0.01)。与Sham组相比,SCI-12h组CNTF mRNA相对表达量降低(P<0.05),于SCI-3d组降至最低(P<0.05);NT-4mRNA相对表达量在SCI-12h组无变化,于SCI-1d组表达增高(P<0.05),至SCI-7d组表达降低(P<0.01),但与Sham组比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学染色结果显示,CNTF在神经元与神经胶质细胞均有表达,NT-4主要在神经元表达。与Sham组相比,CNTF与NT-4阳性神经元数量及IOD值均在SCI-12h组减少(P<0.01);两种蛋白质随后呈现不同的变化趋势:脊髓前角CNTF阳性神经元数量与IOD值分别在SCI-3d组与SCI-7d组再次降低(P<0.01);而NT-4阳性神经元与IOD值分别在SCI-7d组与SCI-3d组增高,表达水平接近Sham组。脊髓后角CNTF阳性神经元数量在SCI-1d组再次降低(P<0.01),至SCI-7d组无变化;NT-4阳性神经元数量及其IOD值分别在SCI-1d组及SCI-7d组增高(P<0.01),且SCI-7d组与Sham组比较差异无统计学意义(P>0.05)。GeneMANIA分析结果显示,CNTF和NT-4无直接相互作用,但与NGF、Tmem237、Kcnh6、Tph1、Psisp1和Ghrhr具有共同的共定位和/或共表达关系。结论机体在SCI急性期上调CNTF表达;在亚急性期上调NT-4,下调CNTF表达,推测与减少胶质瘢痕形成,促进运动神经元再生有关;CNTF与NT-4和多种蛋白质的共表达/共定位关系还需进一步的深入研究。

血清IL-4、NT-proBNP及PCT检测在脓毒症患者预后的应用

目的探讨血清白细胞介素(IL)-4、N-末端B型钠利尿肽前体(NT-proBNP)、降钙素原(PCT)在脓毒症患者病情评估和预后判断的应用。方法收集2015年2月至2016年2月河北北方学院附属第一医院诊断为脓毒症感染患者95例纳入脓毒症组(根据疾病结局分为存活组63例,死亡组32例);同期健康体检者30例纳入健康对照组,采用酶联免疫吸附试验测定IL-4,采用Advia Centaur CP全自动发光免疫测定NT-proBNP,采用双抗体夹心免疫层析法测定PCT,对两组结果进行分析。结果脓毒症组IL-4、NT-proBNP、PCT水平明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组比生存组的NTproBNP、PCT水平高,差异有统计学意义(P<0.05),生存组的IL-4水平高于死亡组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论动态监测血清IL-4、NT-proBNP、PCT有助于早期脓毒症的鉴别,同时可评判病情的严重程度及预后。

丙酸睾酮对小鼠睾丸NT-3和NT-4表达的影响

以30日龄雄性小鼠为研究对象,用丙酸睾酮分别处理小鼠6,12,24 h后收集睾丸,提取睾丸总RNA和总蛋白,通过实时荧光定量和Western-Blot方法探究了雄激素对睾丸中神经营养因子NT-3及NT-4表达的影响。荧光定量结果表明:丙酸睾酮处理小鼠,12 h组和24 h组NT-3及NT-4的表达显著升高,其他各组间无显著差异。Western-Blot结果与荧光定量结果一致。说明丙酸睾酮能够调节小鼠睾丸中NT-3和NT-4的表达。

人神经营养素-4成熟蛋白基因克隆

本研究的目的是克隆人神经营养素-4成熟蛋白基因(mhNT-4)并进行序列分析。应用PCR技术,以正常人血淋巴细胞染色体DNA为模板,扩增出人神经营养素-4(hNT-4)成熟蛋白编码基因。将所得基因片段重组于pGEM-T Easy质粒,筛选得到含人mhNT-4基因的阳性克隆。采用Sanger单链末端终止法测出全部的核苷酸序列。所得到的序列与国外文献所报道的结果(GenBank,M86528)完全相同。mhNT-4成熟蛋白基因的成功克隆,为研究其在原核细胞中的表达提供了有利条件。本文结果也提示不同人种间及不同个体间hNT-4成熟蛋白基因是相对保守的。

神经营养因子4/5的研究进展

神经营养因子 - 4/ 5属于神经营养因子家族 ,对神经元的生长、分化有促进作用。本文总结了近些年来NT 4/ 5的研究进展 ,包括NT 4/ 5的分子结构、分布、基因和受体 ,对前后角神经元的分化和存活及对小胶质细胞的调节作用 。

青年母猪不同生殖器官神经营养因子-4/5的表达研究

本研究旨在探讨神经营养因子-4/5(neuroteophin-4/5,NT-4/5)在青年母猪卵泡期与黄体期卵巢、输卵管及子宫3种生殖器官中表达情况。采用实时荧光定量RT-PCR方法与Western blotting技术对青年母猪卵泡期与黄体期卵巢、输卵管及子宫中的NT-4/5mRNA与蛋白质表达进行检测。结果表明,NT-4/5mRNA与蛋白质在卵泡期与黄体期卵巢、输卵管及子宫中均有表达,且卵泡期卵巢、子宫NT-4/5mRNA表达水平均显著高于黄体期(P<0.05),而卵泡期输卵管NT-4/5mR-NA表达水平显著低于黄体期(P<0.05)。试验结果为进一步研究NT-4/5参与青年母猪生殖道生理功能的调节奠定基础。

烟草硝酸盐转运蛋白基因NtNRT2.4的克隆及表达分析

植物NRT2基因家族(高亲和硝酸盐转运蛋白基因)在植物吸收和转运硝酸盐过程中发挥重要作用。本研究根据NRT2基因家族的保守序列设计兼并引物,扩增出一条821bp序列,以此序列为信息探针,通过电子克隆和RT-PCR的方法从烟草中克隆获得一个包含1593bp开放阅读框、编码530个氨基酸的c DNA序列,命名为Nt NRT2.4。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白质具有NRT家族的共有结构特征,与烟草已发现的三个本家族基因同源性达到77.54%,与拟南芥NRT2家族基因同源性达到81.63%,其启动子中包含多个与硝酸盐、光照及根系特异表达相关的元件;组织特异表达分析结果显示,烟草Nt NRT2.4基因的组织表达差异较大,在根部的表达量较高,在叶片和茎部的表达量低;不同氮素形态、光照和蔗糖处理下的基因表达分析结果表明,硝态氮、光照和蔗糖处理诱导Nt NRT2.4表达,而铵态氮抑制其表达。

人神经营养素-4的克隆及其在原核细胞的表达

目的：体外扩增人神经营养素－4(NT-4)基因，经克隆后在原核细胞中表达并鉴定人重组NT-4，为研究其生物学特性及临床应用奠定基础。方法：以人类基因组DNA为模板，扩增NT-4成熟活性蛋白的DNA编码序列，将此DNA片段克隆到载体PBV220中，对重组质粒进行PCR筛选和限制性酶切分析，确定后将该重组质粒转化到大肠杆菌DH5α进行诱导表达。用抗NT-4抗体进行Western blot鉴定重组蛋白。结果：体外成功扩增NT-4基因，转染的大肠杆菌经诱导后表达出能被抗NT-4抗体识别的重组蛋白，其表达量为15%。结论：在原核细胞能成功表达NT-4。