NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因重组腺相关病毒的构建及鉴定

目的:构建编码融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT的重组腺相关病毒表达载体。方法:利用限制性内切酶切相应载体后将Apoptin和HA2-TAT连入pUC19/NT4质粒,再将融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT亚克隆至腺相关病毒的穿梭质粒内,与辅助质粒pAAV/Ad、腺病毒质粒pFG140共同转染HEK-293细胞,通过同源重组获得NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体,收集病毒上清,Dot blot法测定其滴度。MTT比色法观察NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒表达载体,对HepG2细胞存活率的影响。结果:经酶切及测序证实克隆出NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因;得到高滴度的(3.14×1015pfu/L)重组腺相关病毒表达载体。NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒表达载体,对HepG2细胞有强烈的诱导凋亡作用,与对照组比较,处理组细胞的存活率明显降低。结论:通过分子克隆体外重组技术成功制备了NT4-Ap-optin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体,为下一步的Apoptin应用于基因治疗奠定了基础。

NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组腺相关病毒载体的构建及鉴定

目的:设计构建融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒表达载体。方法:应用非对称引物/模板法,PCR技术制备Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片段,通过连接pGEM-T-Easy载体及PBV220-NT4质粒,转化感受态细胞,获得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因,连接腺相关病毒穿梭质粒pSSHG-CMV,采用磷酸钙沉淀法三质粒共转染HEK-293细胞获取重组腺相关病毒,Dot-blot法测定重组病毒滴度,MTT比色法观察重组腺相关病毒对A549细胞存活率的影响。结果:合成Ant-Shepherdin[79-87]基因,连接PBV220-NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因;得到高滴度的(3.4×1013pfu/L)重组腺相关病毒表达载体;带有融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒对A549细胞具有强烈的诱导凋亡作用。结论:成功构建了NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因的重组腺相关病毒表达载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础。

非小细胞肺癌EML4-ALK融合基因1型的表达研究

目的:检测广西非小细胞肺癌癌组织中EML4-ALK融合基因1型的表达水平并探讨其临床意义。方法:运用两步法RT-PCR技术。检测来自于我院81例非小细胞肺癌癌组织和17例支气管扩张或肺大疱等手术切除的非癌肺组织中EML4-ALK融合基因1型的表达水平。结果:81例非小细胞肺癌癌组织和17例非癌肺组织中分别检测出26例(32.10%)和14例(82.35%)EML4基因表达阳性,全部标本中EML4-ALK融合基因1型表达阴性。结论:在广西非小细胞肺癌患者癌组织标本中未检测出EML4-ALK融合基因1型的表达,可能是EML4-ALK融合基因1型在非小细胞肺癌中的表达具有区域异质性。

NT_4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组载体的构建

目的设计构建携带NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的cDNA融合基因的重组载体,为针对Survivin的靶向治疗奠定基础。方法应用非对称引物/模板法、PCR技术制备NT4-Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片断,连接于pGEM-T-Easy载体,经克隆测序、酶切后与PBV220/NT4质粒连接;转化感受态细胞E.coliDH5α,亚克隆获得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因。结果克隆出Ant-Shepherdin[79-87]基因,经酶切及测序证实结果正确;连接PBV220/NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因片断。结论通过分子生物学技术成功构建了携带NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因的重组载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础。

毛白杨融合基因4CL1-CCR对烟草木质素沉积的影响

【目的】将毛白杨编码4CL1(4-香豆酸辅酶A连接酶)和CCR(香豆酰辅酶A还原酶)的基因连接在一起形成融合基因4CL1-CCR,在体外对其编码的融合酶4CL1-CCR进行活性分析,发现此融合酶具有4CL1和CCR的催化活性,并在大肠杆菌体内证明4CL1-CCR可以高效催化香豆酸等酚酸生成相应的醛。在前期研究基础上,本研究将融合基因转化烟草,对转基因烟草植株的木质素各单体的组成和木质部形态进行分析,以揭示融合基因在植物体内的功能。【方法】用硫酸解法结合GC-MS分析烟草茎中各个单体的含量;间苯三酚染色法和木质素由紫外激发荧光法用于观测细胞的木质化状态;并通过半定量PCR法对转基因烟草中参与木质素合成关键基因的表达进行分析。【结果】与野生型烟草相比,转基因烟草茎中木质素G+S总量增加10.89%~36.44%;其中转基因烟草中G型木质素单体含量显著增多,S型单体含量无明显变化。显微结构观察可见,转基因烟草木质部宽度增加,细胞壁显著增厚,木质素沉积状态没有变化,表现为高密度木质素区域仍然为细胞角隅和复合胞间层,而低密度区域为次生细胞壁。半定量PCR分析显示在转基因烟草中C3H、CAD和COMT的表达量较野生型烟草均有不同程度的提高,而由G型木质素单体向S型木质素单体转化的关键基因F5H的表达没有显著变化。【结论】人工融合基因4CL1-CCR可以在植物中表达并发挥其功能,在未改变木质素密度分布的前提下,增加烟草茎细胞中木质部细胞数量和木质素的含量,并使细胞壁增厚。

Genistein对K562细胞生长及CyclinD1基因和bcr-abl融合基因表达的影响

目的 研究 Genistein抑制 K5 62细胞生长的机制及对 Cyclin D1基因和 bcr- abl融合基因表达的影响 .方法 用RT- PCR方法检测 Genistein作用于 K5 62细胞前后 Cyclin D1基因和 bcr- abl融合基因的 m RNA表达变化 ,用免疫荧光、流式细胞仪和电镜检测 CDK4蛋白的表达、细胞周期及凋亡 .结果 K5 62细胞中 Cyclin D1基因、bcr- abl融合基因的 m R-NA和 CDK4蛋白表达阳性 ,用 Genistein与 K5 62细胞共同孵育后 ,bcr- abl融合基因的 m RNA表达阴性 ,Cyclin D1的m RNA和 CDK4蛋白表达下降 ,细胞阻滞于 G2 / M期 ,K5 62细胞出现凋亡 .结论 bcr- abl融合基因、 Cyclin D1基因和CDK4蛋白在 K5 62细胞中高表达 ,Genistein能使 K5 62细胞生长受抑 ,诱导其凋亡 ,抑制 bcr- abl基因的 m RNA表达 ,并使 Cyclin D1基因的 m RNA和 CDK4蛋白表达下降 ,表明bcr- abl融合基因、Cyclin D1基因和 CDK4对慢粒发展存在内在关系 .

EBV LMP2A和BZLF1融合基因重组腺病毒表达载体的构建

目的构建EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)编码基因和即刻早期基因(BZLF1)融合基因的重组腺病毒表达载体。方法逆转录-聚合酶链反应分别获得LMP2A和BZLF1编码序列的cDNA,采用剪接式重叠延伸(SOE)技术将两段基因通过多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行连接,构建融合基因Z2A。将融合基因Z2A定向亚克隆到pAdTrack-CMV质粒上,在原核细胞E.coli BJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒pAdEasy-1的同源重组,构建融合基因Z2A真核表达载体pAd-Z2A。经抗生素培养板筛选重组体,然后转染293细胞,获得复制缺陷型重组腺病毒vAd-Z2A。结果重组腺病毒载体经限制性核酸内切酶酶切,电泳后可观察到长31 kb和4.5 kb两条DNA条带,测序鉴定结果表明序列正确;从感染重组腺病毒vAd-Z2A的293细胞中检测到融合基因Z2A的表达。结论本研究成功地构建了EBV LMP2A和BZLF1融合基因Z2A重组腺病毒表达载体,为进一步研究Z2A的功能提供了实验基础。

pCDR1 Th表位和CTLA4Ig双基因共表达真核表达载体的构建

目的构建能稳定表达pCDR1 Th表位和CTLA4Ig融合基因的真核表达载体,探讨其在小鼠体内的表达并对表达产物进行鉴定。方法用Touchdown PCR法扩增CTLA4Ig基因,同时引入pCDR1Th表位。将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-CTLA4Ig-pCDR1。将构建表达CTLA4Ig-pCDR1减毒鼠伤寒沙门菌SL7207喂饲BALB/c小鼠,取脾脏进行免疫组化鉴定重组蛋白在动物体内的表达。结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功。重组蛋白在BALB/c小鼠脾脏免疫细胞胞浆中有阳性表达。结论成功构建了能稳定表达pCDR1 Th表位和CTLA4Ig融合基因的真核表达载体。

TEL/AML1、BCR/ABL、E2A/PBX1、MLL/AF4阳性儿童急性淋巴细胞白血病的临床特点及预后

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)TEL/AML1、BCR/ABL、E2A/PBX1、MLL/AF4四种融合基因的表达及其临床诊治意义。方法用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)方法检测TEL/AML1、BCR/ABL(p190和p210两种亚型)、E2A/PBX1、MLL/AF4四种融合基因在312例ALL患儿中的表达情况,并总结融合基因阳性患儿的临床和生物学特点、治疗反应及预后情况。结果 (1)融合基因阳性共120例,TEL/AML1阳性组72例(23.1%),BCR/ABL阳性组22例(7.1%),p190 16例(5.1%)、p210 6例(1.9%),E2A/PBX1阳性组18例(5.8%),MLL/AF4阳性组8例(2.6%)。(2)TEL/AML1阳性组诊断时WBC平均值为(18.02±6.45)×109/L,诱导化疗结束完全缓解率(CR)100%,随访期间无复发;BCR/ABL阳性组发病时年龄(9.40±3.55)岁,诱导化疗结束CR81.8%,强化治疗末仍有6例融合基因未转阴,随访中有8例(36.3%)复发,8例死亡;E2A/PBX1阳性组全部按高危标准给予化疗,诱导化疗结束CR88.9%,强化治疗期末仍有3例基因微量表达,随访中2例复发;MLL/AF4阳性组发病时WBC(38.41±9.30)×109/L,强化治疗期末仍有2例基因呈阳性,随访中均复发死亡。结论融合基因可作为ALL危险度分层、监测微小残留病、判断预后的重要指标之一。

TMPRSS2-ETS融合基因在前列腺癌中的研究进展及临床应用前景

西方国家前列腺癌的发病率较高,我国的发病率也日渐上升。早期发现对前列腺癌的治疗和预后有很大帮助。目前对前列腺癌的无创诊断方法存在一定局限性;TMPRSS2-ETS融合基因是新发现的与前列腺癌发生相关的生物指标,其中TMPRSS2-ERG是最常见的融合类型,尿液TMPRSS2-ETS融合基因检测有较高的特异度和阳性预测值,对早期发现前列腺癌有一定的价值。文章对TMPRSS2-ETS融合基因在前列腺癌中的研究进展及临床应用前景进行综述。

非小细胞肺癌EGFR、ALK、ROS1基因突变和临床病理特征分析

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)驱动基因突变与临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR法检测NSCLC中EGFR、ALK、ROS1基因突变,并分析其与临床病理特征的关系。结果347例NSCLC中EGFR基因突变率为49.3%(171/347),突变易发生于女性、腺癌、年龄(≤62岁)及不吸烟患者(P<0.05),与有无淋巴结转移及肿瘤分期无关(P>0.05);突变类型以19-del和L858R为主(占87.1%)。ALK基因突变率为4.3%(15/347),ROS1基因突变率为1.7%(6/347),两基因突变均与患者性别、年龄、吸烟史、组织学类型、有无淋巴结转移及肿瘤分期无关(P>0.05),但ALK基因突变和ROS1基因突变者均为腺癌。另外,EGFR和ROS1基因突变共存者占0.3%(1/347)。结论NSCLC患者中EGFR基因突变率明显高于ALK及ROS1基因突变率。EGFR突变易发生于女性、腺癌、年龄≤62岁、不吸烟者,ALK和ROS1基因突变可能更易发生于腺癌患者。EGFR基因突变和ROS1基因突变可以共存。

HSPE1-MOB4在肿瘤细胞中的表达及其新剪接形式的鉴定

目的探究热休克蛋白家族成员1(HSPE1)和鼠类人α-趋化因子类似物(MOB4)形成的融合蛋白HSPE1-MOB4在不同细胞中的表达。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测融合蛋白HSPE1-MOB4在不同细胞中的表达;Sanger基因测序探究融合蛋白的不同亚型;免疫荧光技术和激光共聚焦显微成像检测蛋白表达位置;免疫印迹法检测融合蛋白HSPE1-MOB4在正常细胞及肿瘤细胞中的表达。结果融合蛋白HSPE1-MOB4在正常细胞及肿瘤细胞中均有表达;基因测序结果显示融合蛋白HSPE1-MOB4有两种不同亚型,且两种亚型的表达位置相同;相较于正常细胞,在肿瘤细胞中融合蛋白的表达量更高。结论融合蛋白HSPE1-MOB4有两个亚型,已报道的亚型在肿瘤细胞中表达量较正常细胞高。这可能为寻找新的肿瘤生物标志物提供新的思路。

可分泌性GLP-1重组慢病毒的构建

目的:为了探讨使用基因治疗在体内分泌表达胰高血糖素样肽-1(GLP-1)方法治疗糖尿病的可行性,构建可分泌表达GLP-1的重组慢病毒。方法:1.将已构建成功的NT4-GLP-1融合基因插入慢病毒包装质粒pLenti6V5D-TOPO中,构建pLenti6V5D-TOPO/NT4-GLP-1重组慢病毒包装质粒。2.用慢病毒包装辅助质粒plp1、plp2、plp/VSVG,及重组慢病毒包装质粒pLenti6V5D-TOPO/NT4-GLP-1,四质粒磷酸钙共沉淀法转染80%融合的293细胞系,包装慢病毒。3.通过免疫组化法染色确定重组慢病毒效应。结果:重组质粒经BamHⅠ和XhoⅠ联合酶切,10g/L琼脂糖凝胶电泳可见在342bp处有一目的片段。该值与NT4-GLP-1融合基因片段的大小一致,说明NT4-GLP-1融合基因已经成功重组于慢病毒包装质粒pLenti6V5D-TOPO内。免疫组化结果显示,实验组细胞内出现大量棕黄色颗粒,阳性细胞达到70%以上,对照组中没有阳性细胞,所以说明NT4-GLP-1重组慢病毒在细胞中可以正确地分泌表达GLP-1。结论:NT4-GLP-1重组慢病毒包装质粒构建正确,病毒包装成功。

前列腺按摩后尿液中融合基因TMPRSS2:ERG亚型T1E4 mRNA的定量检测在前列腺癌诊断中的应用

目的:建立实时荧光定量RT-PCR检测前列腺按摩后尿液中融合基因TMPRSS2:ERG亚型T1E4 mRNA的方法学并探讨T1E4 mRNA在前列腺癌临床诊断中的应用价值。方法:前列腺癌(PCa)患者46例,前列腺增生(BPH)患者44例,收集前列腺按摩后尿液,离心取细胞沉淀物,提取总RNA,实时荧光定量RT-PCR方法分别检测PSA mRNA和T1E4 mRNA,以T1E4 mRNA/PSA mRNA比值表示融合基因T1E4 mRNA的含量。比较PCa组与BPH组尿液T1E4 mR-NA的含量(T1E4 mRNA/PSA mRNA比值),用受试者工作曲线(ROC)评价尿液T1E4 mRNA含量对前列腺癌的诊断价值,并分析尿液T1E4 mRNA阳性率与前列腺癌骨转移及Gleason评分之间的关系。结果:PCa组尿液T1E4 mRNA含量(9.6×10-3,0～12.6)明显高于BPH组(0,0～8.5×10-3)(P<0.01)。尿液T1E4 mRNA含量诊断前列腺癌的曲线下面积(AUC)为0.810(95%CI:0.719～0.902),以1.0×10-5为截断值时,其诊断前列腺癌的敏感度和特异性分别为71.7%和81.8%。尿液T1E4 mRNA阳性率与前列腺癌骨转移及Gleason评分之间无关。结论:前列腺按摩后尿液中融合基因TMPRSS2:ERG亚型T1E4 mRNA含量检测对前列腺癌诊断有较高的敏感度和特异性,作为前列腺癌早期诊断指标具有良好的应用前景。

NYGGF4基因过表达对成熟脂肪细胞线粒体形态及动力学的影响

目的探讨NYGGF4基因过表达对成熟3T3-L1脂肪细胞线粒体形态及动力学的影响。方法以3T3-L1前体脂肪细胞为载体,建立NYGGF4基因稳定过表达细胞株,以空载质粒转染的细胞为对照,将前体脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞。采用透射电镜观察成熟脂肪细胞的线粒体形态,采用荧光定量PCR技术检测成熟脂肪细胞中线粒体融合基因(Mfn)1 mRNA、Mfn2 mRNA、线粒体动态相关基因(Drp)1 mRNA的表达水平。采用Western blot方法检测Mfn1蛋白、Mfn2蛋白、Drp1蛋白的表达水平。结果 1.电镜观察发现NYGGF4基因过表达的成熟脂肪细胞线粒体体积变小、数量明显减少,线粒体嵴断裂、减少、消失,部分线粒体肿胀,甚至呈空泡状;对照组成熟脂肪细胞的线粒体形态基本正常,线粒体嵴清晰可见,线粒体无明显肿胀、皱缩。2.NYGGF4基因过表达成熟脂肪细胞Mfn1 mRNA及Mfn1蛋白表达水平均显著高于对照组。3.NYGGF4基因过表达成熟脂肪细胞的Mfn2 mRNA、Drp1mRNA及相应蛋白表达水平与对照组比较差异均无统计学意义。结论在3T3-L1成熟脂肪细胞中,NYGGF4基因过表达可导致线粒体形态发生变化、数量减少,同时上调Mfn1 mRNA和Mfn1蛋白表达水平,提示NYGGF4基因在成熟脂肪细胞中过表达能影响细胞线粒体形态及动力学。

尿沉淀细胞中TMPRSS2-ETS融合基因对诊断前列腺癌的意义

目的:检测尿沉淀细胞中TMPRSS2-ETS融合基因对诊断前列腺癌的意义。方法:将2010～2011年我院收治的经病理检查证实为前列腺癌者归为前列腺癌组,经病理检查证实为BPH者归为BPH组。收集两组患者前列腺按摩后首次尿液标本,用FISH检测其TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1和TMPRSS2-ETV4融合基因的表达。结果:纳入本次研究的前列腺癌组和BPH组分别为51例和20例,TMPRSS2-ERG(+)的病例分别为26例(50.98%)和4例(20%),差异有显著统计学意义(P<0.05)。其敏感度为50.98%,特异度为80%,假阳性率为20%,假阴性率为49.02%,阳性似然比为2.549,阴性似然比为0.613,Youden指数为0.3098。两组中均未发现有TMPRSS2-ETV1或TMPRSS2-ETV4融合基因阳性患者。结论:用FISH方法检测尿沉淀细胞TMPRSS2-ERG融合基因有助于区分前列腺癌与BPH。TMPRSS2-ETV1和TMPRSS2-ETV4融合基因在前列腺癌中出现率较低,故不推荐用于前列腺癌的诊断检测。

IGF-1R旁路活化在EML4-ALK阳性非小细胞肺癌Alectinib继发耐药中的作用

[目的]探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）是否以旁路激活的方式诱导EML4-ALK融合基因阳性肺癌细胞株H3122对Alectinib的耐药,并进一步探讨旁路信号激活在Alectinib耐药中的作用。[方法]通过外源性加入人胰岛素样生长因子1（h IGF-1）刺激H3122细胞株构建Alectinib耐药细胞株H3122-IGF-CR;通过CCK8法检测H3122细胞株及H3122-IGF-CR对不同浓度Alectinib的敏感性,并计算半数抑制浓度IC50和耐药指数;PE Annexin V/7-AAD双染法检测细胞凋亡情况;q RT-PCR检测亲本细胞中IGF-1R的表达情况;蛋白质印记法检测PI3K/AKT,Ras-Raf-MEK-ERK/MAPK信号通路的变化情况。[结果]q RT-PCR结果显示IGF-1R在H3122细胞中ct值为20.90±0.06,内参ct值为12.48±0.12,ΔCt值〈12,提示IGF-1R在H3122细胞株中高表达。H3122细胞的活力能被Alectinib抑制,且呈剂量依赖性,其IC50值为0.0173μmol/L;当加入50ng/ml或100ng/ml的h IGF-1刺激后,其对Alectinib敏感性降低,IC50为0.358μmol/L和0.4001μmol/L,耐药倍数为20.6倍和23.0倍。0.03μmol/L Alectinib单药处理48h后H3122细胞的凋亡率为（26.43±0.23）%,而Alectinib联合50、100、150ng/ml h IGF-1刺激48h后,凋亡率分别为（18.95±0.48）%、（15.90±0.16）%、（13.70±0.36）%,显著性低于Alectinib单药组（P〈0.05）。外源性h IGF-1与IGF-1R结合后,明显增加细胞中p-IGF-1R及其下游p-AKT、p-m TOR、p-P70S6K、p-ERK的蛋白表达水平（P〈0.05）。此外,联合应用IGF-1R抑制剂Linsitinib（OSI-906）可以抑制因h IGF-1配体导致的H3122耐药细胞的活力。[结论]h IGF-1可通过旁路激活的方式诱导EML4-ALK阳性非小细胞肺癌H3122细胞对Alectinib耐药,其机制可能为激活了其下游信号通路PI3K/AKT,MAPK/ERK,初步证实IGF-1R信号通路与Alectinib继发耐药相关。

MLL-AF4(KMT2A/AFF1)阳性急性白血病系别转化三例报告并文献复习

在急性白血病治疗过程中系别转化罕见,在与系别转化相关的染色体畸变中,t(4;11)(q21;q23)与KMT2A/AFF1融合蛋白[原混合谱系白血病(mixed linage leukemia,MLL)基因MLL/AFF1或MLL/AF4]重排最为常见[1].研究表明,MLL重排急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)起源于一个有淋巴细胞分化潜能的前体细胞,从而使系别发生潜在的变化[2].细胞毒性治疗后患者的系别转化是由选择或基因重组引起的[2].博纳吐单抗是一种双特异性单克隆抗体,由一种抗CD19抗体和一种抗CD3抗体连接而成,对B细胞CD19和细胞毒性T细胞CD3均具有特异性.在与2个表位同时结合后,正常和肿瘤B细胞被宿主细胞毒性T细胞裂解.有研究报道,6例婴幼儿和4例成人急性B淋巴细胞白血病(B cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)在CD19靶向治疗[嵌合抗原受体T细胞(chimeric anti-gen receptor T-cells,CAR-T)和博纳吐单抗]后转化为急性髓系白血病[1,3-9].有研究观察到CD19靶向免疫治疗后复发与获得髓样表型和B淋巴系抗原缺失有关,是一种新的复发机制,不同于以前注意到的孤立CD19表达丢失[3,10].可能是ALL患者接受靶向免疫治疗后经过髓系转化而产生的一种耐药和适应.