NtCPS2基因对烟草腺毛发育及其分泌物合成的影响

为探讨烟草(Nicotiana tomentosiformis L.)顺-冷杉醇合成基因NtCPS2(Ent⁃copalyl diphosphate synthase 2)与烟草腺毛发育及其分泌物合成的关系,以编辑顺-冷杉醇关键合成基因NtCPS2的8306纯合编辑系(Knock⁃down,KD)和8306野生型品系(Wild⁃type,WT)为材料,比较KD和WT正常生长条件(CK)、外施赤霉素(GA3)及矮壮素后烟株叶片腺毛密度,顺-冷杉醇、西柏三烯二醇和GA3的含量以及相关基因表达量的差异。结果表明,对于CK,与WT相比,KD烟株内源GA3含量显著增加25%,叶片腺毛密度显著增加28%,叶片西柏三烯二醇分泌物含量显著升高25%,西柏烷三烯二醇关键合成基因CYC(Cembratrien⁃ol synthetase)、CYP71D16(Cytochrome P450 hydroxylase)表达量显著升高。外施GA3后,KD和WT中GA3含量平均显著增加50%,叶片腺毛密度平均显著增加50%,叶片西柏三烯二醇含量平均显著升高50%,整体上KD升高幅度大于WT。外施GA3抑制剂矮壮素后,KD和WT内源GA3含量平均显著减少25%,叶片腺毛密度平均显著降低56%,叶片西柏三烯二醇的含量平均显著降低46%,整体上KD下降幅度大于WT。编辑NtCPS2基因后KD烟株GA3含量增加,叶片腺毛密度增加,叶片西柏三烯二醇分泌物含量升高,此结果与外施GA3结果一致,与外施矮壮素结果相反,表明NtCPS2基因通过影响GA3生物合成进而影响烟草腺毛发育及西柏三烯二醇的合成。

水飞蓟宾对利福平和异烟肼致肝损伤中胆汁酸转运体Ntcp与Bsep的影响

目的 初步探讨水飞蓟宾能否通过激动Nrf2/ARE信号通路,激活下游胆汁酸相关的转运体牛磺胆酸钠转运蛋白(Ntcp)及胆盐输出泵(Bsep)Bsep的表达,从而改善异烟肼/利福平(INH/RFP)INH/RFP引起的肝损伤。方法:选用SPF级ICR小鼠随机分成5组:对照组(CON组),模型组(IR组),水飞蓟宾干预组(SY50组,SY100组,SY200组),除对照组外,干预组及IR组根据体质量给予75 mg/kgINH+150 mg/kgRFP,对照组给予空白溶剂,干预组分别同时给予水飞蓟宾低剂量50 mg/kg(IR+SY50),中剂量100 mg/kg(IR+SY100)以及高剂量200 mg/kg(IR+SY200),连续灌胃给药14 d。第15天给予异氟烷吸入麻醉后摘眼球取血,离心后用于生化指标测定,取脏组织于10%福尔马林固定用于病理切片、HE染色;4%多聚甲醛固定用于目标蛋白免疫组化测定;Western blot测定目标蛋白Ntcp、Bsep及核Nrf2的表达。结果 与CON组相比,IR组均能够引起生化指标ALT、AST、TBil、DBil、ALP、TBA的显著变化,与IR组相比,低剂量的水飞蓟宾干预组ALT、Tbil、TBA降低明显,中剂量的水飞蓟宾能显著降低ALT、AST、Tbil、TBA,高剂量的水飞蓟宾能显著降低除ALP以外的所有指标,差异有统计学意义(P<0.05)。IR组Ntcp,Bsep蛋白表达均下调,而水飞蓟宾能显著上调这些蛋白的表达,IR组下调Nrf2核蛋白的表达,与水飞蓟宾合用后,Nrf2核蛋白的表达显著上调。结论 水飞蓟宾可能通过激活Nrf2入核,调控下游胆汁酸转运体Ntcp、Bsep的表达,治疗INH/RFP引起的肝损伤。

NTCP泡沫体系的注入方式及驱油效率

对已优选NTCP泡沫体系的注入方式及驱油效果进行了研究 ,该体系由 0 .2 %NAPS疏水聚合物为稳泡剂 ,由起泡剂和工业氮气以一定比例组成的 0 .1 5 %复合表面活性剂SDS。泡沫有高的阻力系数和低的残余阻力系数。在模拟中原油田三厂所辖的文明寨油田地质条件下 ,泡沫有很高的驱油效率和调剖能力 ,对低渗透岩心的伤害程度极小。在单管岩心实验中注入 0 .8PV ,泡沫驱油效率比水驱提高 1 7.9%～ 2 8.7%。通过并联岩心实验得出 ,注入 0 .8PV ,这种泡沫体系在渗透率极差分别为 1 4 .1和 38.2的非均质油层的深部调剖 ,分别提高采收率 44 .0 %和 2 8.6 %。

pEGFP-NTCP稳定转染HEK293细胞系的建立及鉴定

目的高效快速地建立稳定高表达钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)的HEK293细胞系。方法构建可表达EGFP-NTCP融合蛋白的p EGFP-NTCP重组质粒,并利用Fu GENE 6转染试剂将重组质粒转染至HEK293细胞中。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,挑选转染细胞进行14 d G418筛选和单克隆培养,以获得稳定转染细胞株。用RT-PCR法、qRT-PCR法和Western blot技术检测稳定转染细胞及正常细胞中NTCP mRNA和蛋白的表达情况,并进一步用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)考察稳定转染细胞的牛磺胆酸摄取能力。结果使用本文优化的方法,细胞转染率可达90%。RT-PCR、qRT-PCR、Western blot和牛磺酸摄取实验结果显示:相对于正常组,在荧光显微镜下呈绿色荧光的转染细胞;其NTCP表达均显阳性(P<0.01);且稳定转染细胞的牛磺胆酸摄取能力明显升高(P<0.05)。结论高效快速地建立了稳定高表达NTCP的HEK293细胞系,为胆酸衍生物摄取机制研究奠定了基础。

Ntcp在胆管癌大鼠胆管肿瘤组织中的表达状况

目的:本研究通过建立胆管癌大鼠模型,以牛黄胆酸钠转运蛋白(sodium/taurocholate cotransporting polypeptide,Ntcp)为研究对象,初步探讨Ntcp在胆管癌大鼠胆管肿瘤组织中的表达状况,以期为治疗胆管癌找到新的手段和方法.方法:Wistar大鼠(♂、体质量160 g±8 g)70只,随机分为2组,每组35只.普通饮食对照组(简称对照组)予以普通饮食、3'-甲基-4-二甲基氨偶氮苯(3'-Me-DAB)饮食实验组(简称实验组)予以含3'-M e-D A B饮食.经过20 wk,建立胆管癌大鼠模型,取对照组胆管组织和实验组胆管肿瘤组织:(1)实时定量PCR(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)检测胆管组织和胆管肿瘤组织的Ntcp基因表达的强度;(2)石蜡切片后用免疫组织化学SP(streptavidin-perosidase)法检测胆管组织和胆管肿瘤组织的Ntcp蛋白表达的强度.结果:q RT-PCR结果显示:Ntcp/GAPDH比率在对照组胆管组织中为12、在实验组胆管肿瘤组织中为39,2组间的表达产生了统计学差异;免疫组织化学SP法结果显示,对照组胆管组织Ntcp基因表达阳性率为15.3%,实验组胆管肿瘤组织Ntcp基因表达阳性率为69.2%(P<0.05).结论:实验组大鼠胆管肿瘤组织的Ntcp基因的表达较对照组胆管组织增多,提示我们在胆管癌的治疗中,Ntcp有成为新的治疗靶点的可能.

靶向食蟹猴NTCP基因的CRISPR/Cas9系统gRNA筛选

本研究旨在通过CRISPR/Cas9体外酶切法及细胞水平上的PCR扩增测序筛选出靶向食蟹猴NTCP基因具有高敲除活性的gRNA。首先通过比对食蟹猴与人类NTCP氨基酸序列,选择差异位点,即第84—87位和第157—165位氨基酸作为基因靶点序列区;利用gRNA软件设计针对上述基因靶点序列的gRNA,每个靶点设计3～4条候选gRNA序列;然后利用gRNA体外检测试剂盒,筛选出靶向NTCP基因的体外敲除活性较高的两条gRNA序列：gRNA1.2和gRNA2.1。将gRNA1.2和gRNA2.1分别插入pLV hUbC-Cas9-T2A-GFP载体中,转染食蟹猴原代肝细胞。提取转染后细胞基因组DNA,通过PCR扩增NTCP基因并将其克隆到T载体中进行测序分析。结果表明,gRNA1.2和gRNA2.1均可使NTCP基因产生移码突变,但gRNA2.1比gRNA1.2具有更高的敲除活性。本研究为下一步编辑食蟹猴NTCP基因及研究其在乙型肝炎病毒（HBV）感染中的功能奠定了基础。

应用微观模型研究NTCP泡沫驱油机理

在模拟文明寨油田的油藏温度，矿化度的条件下，用微观模型进行了NTCP（The New THree Composite Polymerfoam)泡沫驱实验，考察了泡沫的驱油机理，由实验观察得到泡沫驱油机理如下：（1）抑制了粘性指进，使液流改向；（2）剥离油膜；（3）气阻效应；（4）乳化，携带作用。NTCP泡沫驱综合了聚合物驱，气驱和表面活性驱三者的特点，应用前景广阔。

NTCP在去迷走神经大鼠肝细胞中的表达及临床意义

目的:本实验拟通过建立去迷走神经肝支大鼠模型,观察Na^+/牛磺胆酸盐同向转运多肽(NTCP)在大鼠肝细胞中的表达变化,探讨迷走神经对肝细胞功能及状态的影响。方法:大鼠随机分为两组:A组:迷走神经肝支切断组B组:假手术组每组20只。通过HE染色法光学显微镜下观察切断迷走神经肝支后的肝脏病理形态学改变,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法在mRNA水平上检测NTCP表达及Western blotting法检测NTCP蛋白水平,来分析迷走神经对NTCP的改变,从而确定迷走神经对肝细胞功能及状态的影响。实验结果采用SPSS软件包分析。结果:去迷走神经组中,肝脏组织NTCP mRNA随着术后时间其表达明显下降,半定量提示Pst5d时与B组相比即有明显差异(P<0.05),至Pst9d时更加明显,仅微弱表达。Western Blotting结果显示,A组Pstld～9d,肝组织NTCP蛋白表达水平明显下降,以去迷走神经肝支后第9天最低,蛋白条带隐约可见,并且不是很完整。差异有统计学意义(P<0.05)。结论:去迷走神经状态对肝脏功能变化有一定影响,在去迷走神经肝支状态下,肝细胞功能下降,NTCP表达及蛋白水平减少,影响胆盐因子转运及表达。

20例钠牛磺酸共转运多肽缺陷病(NTCP)临床表现分析

分析20例钠牛磺酸共转运多肽缺陷病(NTCP)临床表现。方法 选取2019年6月2021年4月在昆明市儿童医院消化内科住院治疗的20例高胆汁酸血症患儿,排外感染、肝内外胆管发育不良、代谢性疾病等因素,征得家长同意后,提取患儿的外周血进行相关基因的NGS测序,对选取的变异位点进行先证者及家系Sanger测序,最终确诊为NTCP缺陷病患儿作为本次研究对象,对NTCP缺陷病的临床表现、代谢及生化指标等方面进行分析。结果 20例NTCP患儿均存在SLC10A1基因的位点变异,其中17例患儿是c.800C> T(p.Ser267Phe)变异的纯合子,分别遗传自父母。剩余3例患儿中,两例为c.800C> T(p.Ser267Phe)与c.54delT构成复合杂合,一例是c.800C> T(p.Ser267Phe)与c.682_683del构成的复合杂合,其中男12例,女8例,年龄最小1个月,最大11.5个月,平均年龄4.9个月。临床表现中全部患儿肝功能检查中均出现血清总胆汁酸(TBA)不同程度升高(167.15±34.76)μmol/L;其中9例患儿有皮肤黄染(占45.0%),而9例中有6例患儿有胆汁淤积症(占30%),3例患儿以间接胆红素升高为主(15.0%);2例患儿合并有肝功能异常(ALT、AST升高)(占10.0%);肝脏B超检查有4例患儿出现肝脏肿大、肝实质回声增强征象。结论 NTCP缺陷病患儿临床上均有血清总胆汁酸的异常升高,部分患儿可合并有黄疸、肝损害。对于此类患儿,临床上排外感染、肝内外胆管发育不良、代谢性疾病等病因后,需考虑到此病的可能,可行基因测序确诊。

烟草“8306”NtCPS2基因敲除及叶面化学成分改良

8306是重要的高香气烤烟育种材料,因其腺毛分泌物中含有赖百当化合物而使其杂交后代具有晾晒烟香气特征。为此,本研究利用CRISPR/Cas9技术,对8306中赖百当生物合成途径的关键酶基因NtCPS2进行敲除,获得了gRNA区发生单碱基插入突变导致翻译提前终止的纯合突变体8306-1。与8306相比,该突变株系生长发育正常,腺毛类型和腺毛密度无显著变化;利用GC-MS技术对叶面化学成分进行检测,在8306-1中并未发现8306中所含有的顺冷杉醇和赖百当二醇等赖百当类化合物,而腺毛分泌物的其他主要成分,如西柏三烯一醇、西柏三烯二醇及蔗糖酯的含量与对照相比并无明显变化;RT-PCR检测分析显示,8306-1与8306中MEP途径及二萜生物合成途径的关键基因,如NtDXS、NtDXR、NtCMS、NtGPPS、NtGGPPS、NtCYC、NtCYP71D16等在转录水平上的表达均无明显差异。该研究结果表明,NtCPS2基因敲除能有效降低烟草赖百当类二萜化合物的含量,而对叶面其他化学成分及类萜途径基因表达无明显影响。因此,NtCPS2基因是进行烟草叶面化学成分定向改良的理想靶点,对烤烟高香气育种具有重要意义。

NtCPS2对烟草光合特征及光合产物的影响

为探讨顺-冷杉醇合成基因NtCPS2对烟草光合作用的影响,以烤烟品系8306、8306B(纯合突变植株T;代)、新豫烟11号(MSK326×8306B)和烤烟品种MSK326、豫烟11号(MSK326×8306)为试验材料,比较其顺-冷杉醇、赤霉素、脱落酸含量及相关合成基因相对表达量,光合参数及光合作用相关基因相对表达量等差异。结果表明,8306B较8306、新豫烟11号较豫烟11号的顺-冷杉醇含量均降低,赤霉素含量分别升高7.90%、9.79%,脱落酸含量分别降低35.87%、11.60%,赤霉素合成途径中正调控关键基因GA20ox表达量显著升高,负调控关键基因GA2ox表达量显著降低,脱落酸合成途径中关键基因PSY、NCED相对表达量显著降低,气孔闭合比率分别降低43.75%、8.33%,气孔导度增大,净光合速率升高,光合作用相关酶Rubisco、GAPDH的活性及基因相对表达量升高,光合产物发生变化,同时株高、叶数、节距显著升高。NtCPS2基因不仅影响烟草二萜类代谢途径,降低顺-冷杉醇含量,增加赤霉素含量,而且影响光合作用,导致光合效率提高,增大株型。本研究结果为NtCPS2基因对植物光合作用的反馈调节提供了例证。

基于TCP和NTCP模型的鼻咽癌放疗的比较分析

目的通过作者编程实现肿瘤控制概率(TCP)和正常组织并发症概率(NTCP)模型的数值计算,实现鼻咽癌放疗的比较分析。方法选择2006～2008年40例行放射治疗的病人的治疗方案,利用Matlab分别计算TCP和NTCP,并对计算结果进行统计分析。结果常规放疗和适形放疗的TCP统计结果无差异,而在NTCP计算结果中,常规放疗的脑干以及腮腺的NTCP要高于适形放疗,尤以腮腺更为显著。结论 TCP和NTCP模型都能有效评估放射治疗计划的效果。

补骨脂酚对小鼠肝功能和胆汁酸转运体BSEP、NTCP的影响

[目的]观察补骨脂酚对小鼠肝功能和胆汁酸转运体胆盐输出泵(BSEP)、钠牛磺酸胆酸共转移蛋白(NTCP)的影响。[方法]小鼠连续14 d皮下注射50 mg/kg补骨脂酚和10 mg/kgα-雌二醇,分别在给药1、3、7、14 d后处死部分小鼠取材,检测血清生化,剖取肝脏称质量并进行肝脏病理组织学检查,取新鲜肝脏用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测BSEP、NTCP的蛋白表达。[结果]补骨脂酚和α-雌二醇对小鼠体质量没有明显影响。α-雌二醇皮下注射14 d会使小鼠血清谷丙转氨酶(ALP)升高、肝脏肿大、肝系数升高,而补骨脂酚无此作用,但给药期间补骨脂酚可导致血清ALP一过性降低,14 d时恢复正常。补骨脂酚对肝脏BSEP基本没有影响,而会导致NTCP逐渐升高,给药14 d时NTCP显著高于溶剂组。给药14 d,补骨脂酚组小鼠肝脏无病变,而α-雌二醇组小鼠肝脏存在肝细胞变性。[结论]50 mg/kg补骨脂酚给药14 d未见肝脏毒性,而10 mg/kgα-雌二醇肝毒性明显。

大黄灵仙胶囊调控小鼠胆囊结石形成机制中BSEP、NTCP基因表达的研究

目的研究大黄灵仙胶囊调控小鼠肝胆管侧膜细胞上胆盐输出泵(BSEP)、钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)的蛋白及mRNA表达水平,干预胆囊结石形成的作用机制。方法将60只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为普食组(P组)、致石组(Z组)、致石+灌水组(Z+S组)、致石+大黄灵仙胶囊组(Z+D组)、致石+熊去氧胆酸组(Z+X组),每组各12只,喂养8周,1天/次。采取小鼠胆囊组织观察造模情况,运用Western Blotting及RT-PCR技术对肝脏组织中BSEP、NTCP的蛋白及mRNA表达量进行分析并对比其差异。结果Z组结石形成数多于P组,差异有统计学意义(P<0.001)。Western Blotting:Z+D组和Z+X组BSEP、NTCP蛋白表达水平无明显差异(P>0.05),Z+D组高于Z+S组,差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR:Z+S组、Z+D组与Z+X组BSEP、NTCP mRNA的转录水平存在差异,Z+S组<Z+D组、Z+S组<Z+X组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论致石性饲料喂养可致小鼠胆囊结石形成,大黄灵仙胶囊可以增强小鼠肝胆管侧膜细胞上BSEP、NTCP的蛋白及mRNA表达水平干预胆囊结石形成。

地塞米松刺激HepG_2细胞内源性NTCP表达及在抗HBV药物筛选中的应用

目的观察地塞米松处理人肝癌细胞HepG_2对细胞内源性NTCP mRNA的表达影响,以及刺激后该体系在抗HBV药物筛选中的应用。方法采用不同浓度地塞米松刺激HepG_2细胞,处理后不同时间提取HepG_2细胞中总RNA,实时荧光定量PCR检测NTCP mRNA表达量,确定刺激NTCP mRNA表达最佳浓度及时间。采用最佳浓度和时间刺激HepG_2细胞,洗去培养基中残留地塞米松,实时荧光定量PCR检测NTCP mRNA表达变化。用HepG_2.2.15细胞培养上清浓缩HBV感染地塞米松刺激后的HepG_2细胞,ELISA检测细胞培养上清中HBs Ag。最后,采用阳性药物验证该体系的有效性、可行性。结果 0.5μm地塞米松刺激HepG_2细胞24h时NTCP mRNA表达量最高。撤去地塞米松后96h内,HepG_2细胞中内源性NTCP mRNA的表达有一定程度的下降并维持在一定水平。HBV感染地塞米松刺激后的HepG_2细胞后,在培养上清中能够检测到乙肝表面抗原。在该体系中,阿德福韦酯抗HBV活性的EC50为0.26μm,环孢菌素A的EC_(50)为0.19μm。结论地塞米松能够上调HepG_2细胞内源性NTCP mRNA的表达,能够更有效地介导HBV感染,且可以应用于抗HBV药物筛选。

基于EUD鼻咽癌调强放疗中NTCP和TCP的计算程序设计研究

目的设计一个基于等效均一剂量(EUD)的计算程序来计算鼻咽癌调强放疗(IMRT)计划中正常组织并发症概率(NTCP)和肿瘤控制概率(TCP)。方法采用具有较强数学特性及友好交互界面等优势的高效编程语言Matlab编写计算NTCP和TCP程序,其中NTCP数学模型选用基于EUD的Lyman-Kutcher-Burman模型,而TCP模型则选用Schultheiss逻辑模型。收集3例接受IMRT治疗的鼻咽癌患者的正常组织和靶区剂量体积直方图(DVH),计划系统为医科达precise plan。结果编写计算机代码保存为Matlab可执行程序。3例鼻咽癌患者的4种正常组织(脑干、脊髓、左右侧腮腺)和肿瘤的EUD被编写程序算出,进而计算出NTCP和TCP。结论编写的程序对正常组织耐受量的计算结果与理论值非常吻合,有助于临床选择更安全和高效的治疗方案,将来还可将程序用于其他肿瘤如前列腺癌和肺癌的放疗计划中。

迷走神经对大鼠肝细胞中NTCP表达作用的研究

目的本实验拟通过建立去迷走神经肝支大鼠模型,探讨迷走神经对肝细胞功能、状态及NTCP的表达变化的影响。方法大鼠随机分为两组:A组:迷走神经肝支切断组,B组:假手术组,每组20只。通过HE染色法光学显微镜下观察切断迷走神经肝支后的肝脏病理形态学改变,分别通过RT-PCR及Western blotting法检测NTCP的表达变化,来分析迷走神经对其影响。结果去迷走神经组中,肝脏组织NTCP mRNA和NTCP基因表达均随着术后时间其表达明显下降。结论在去迷走神经肝支状态下,肝细胞发生改变,NTCP表达水平减少,进而影响胆盐因子转运及表达。

降黄合剂Ⅱ号对肝内胆汁淤积大鼠肝损伤及肝组织中NTCP和BSEP表达的影响

目的探讨降黄合剂Ⅱ号对复合因素诱导的阴黄证肝内胆汁淤积模型大鼠肝损伤及钠-牛黄胆酸盐共转运多肽(NTCP)、胆盐输出泵(BSEP)表达的影响。方法将60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、降黄合剂Ⅱ号高剂量组、降黄合剂Ⅱ号中剂量组、降黄合剂Ⅱ号低剂量组,每组12只。正常组大鼠予常规饲养;其余各组大鼠造模阶段施以寒湿条件、大黄煎剂灌胃及高糖高脂饮食,造模3周,第22天时模型组及降黄合剂Ⅱ号各组给予0.5%的ANIT 20 mg/100 g灌胃1次,正常组予以相同体积生理盐水灌胃,建立阴黄证肝内胆汁淤积大鼠模型。降黄合剂Ⅱ号各组于造模第8天开始每天下午给相应剂量的降黄合剂Ⅱ号灌胃,一直到造模后14 d,共用药28 d,正常组和模型组均予相同剂量生理盐水灌胃。观察各组大鼠一般状态,检测干预结束后各组大鼠血清碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)水平,镜下观察各组大鼠肝组织病理变化,采用Western blot法检测各组大鼠肝组织中BSEP、NTCP蛋白表达水平。结果正常组大鼠饮食量、活动量、被毛、体质量、排便排尿情况均正常;模型组大鼠形体均较消瘦,饮食量减少,大便增多,尿液明显变黄、增多,被毛枯黄、粗糙且易脱毛,精神状态不佳;降黄合剂Ⅱ号各组大鼠干预后情况均较模型组明显好转,以大剂量组最为明显。模型组大鼠血清ALP、ALT、AST、TBil水平均明显高于正常组(P均<0.05);降黄合剂Ⅱ号大剂量组和降黄合剂Ⅱ号中剂量组上述指标水平均明显低于模型组(P均<0.05),且降黄合剂Ⅱ号大剂量组各指标水平均明显低于降黄合剂Ⅱ号小剂量组(P均<0.05),其中血清ALP、ALT、TBil水平明显低于降黄合剂Ⅱ号中剂量组(P均<0.05)。HE染色显示降黄合剂Ⅱ号大、中剂量组肝组织较模型组中炎细胞浸润减少,毛细胆管淤堵减轻,肝细胞肿胀缓解,细胞核清晰,形态较完整,可见少量炎性细胞。模型组大鼠肝组织中NTCP、BSEP相对表达量均明显低于正常组(P均<0.05);降黄合剂Ⅱ号大剂量组和降黄合剂Ⅱ号中剂量组大鼠肝组织中NTCP、BSEP相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05),降黄合剂Ⅱ号小剂量组与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论降黄合剂Ⅱ号可改善阴黄证肝内胆汁淤积模型大鼠肝损伤,机制可能与上调NTCP和BSEP表达有关。

慢病毒介导过表达NTCP的NTCP-SK-Hep1细胞系构建

目的建立钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)过表达的肝癌细胞系,以作为研究乙肝病毒(HBV)感染的细胞模型。方法构建NTCP慢病毒重组质粒Gv-NTCP,挑取克隆进行PCR扩增和序列测定;将阳性重组质粒与慢病毒辅助质粒共转染HEK293T细胞,包装Gv-NTCP慢病毒并进行病毒滴度测定;Gv-NTCP慢病毒感染人肝癌细胞株SK-Hep1,嘌呤霉素筛选,通过荧光显微镜,PCR和Western blot检测NTCP的表达。结果测序结果证实Gv-NTCP慢病毒载体构建成功;在HEK293T细胞中包装的Gv-NTCP慢病毒滴度为2.0×10~8TU/m L;该病毒感染SK-Hep1细胞后,在荧光显微镜下可见感染细胞表达绿色荧光,PCR结果显示感染组的NTCP表达明显增高,WB结果显示感染组的NTCP蛋白表达明显增高。结论成功建立了NTCP过表达的人肝癌细胞系NTCP-SK-Hep1。