大跨度隧道冻结施工-NTR组合施工技术应用效果模拟研究

为了研究大跨度隧道冻结施工-NTR组合施工技术应用效果,利用有限差分软件FLAC3D建立隧道三维数值模型,对支护体系下温度场的变化、支护结构的应力状态以及周围地面的稳定性进行计算分析,结果表明:施工引起的建筑物差异沉降,其倾斜比小于0.8‰,即隧道开挖引起的附加位移在允许范围内。

GDI2通过p75NTR通路调节结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡

目的:探讨GDP解离抑制因子2(GDI2)对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡以及细胞周期的影响及其机制。方法:TCGA数据库分析GDI2 mRNA在CRC肿瘤组织中的表达。将CRC细胞分为sh-NC组和sh-GDI2组,采用CCK-8法检测细胞活力,克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测GDI2基因表达,western blotting检测GDI2蛋白和神经生长因子受体(p75NTR)通路关键因子(IKK、p-NF-κB和p-IκB)的表达。构建异种移植瘤裸鼠模型,观察GDI2对CRC肿瘤生长的影响。结果:与癌旁正常组织和正常结肠上皮细胞相比,GDI2在CRC患者肿瘤组织和细胞系中的表达上调(P<0.05)。sh-GDI2能抑制CRC细胞增殖、迁移、侵袭,阻滞细胞周期进程,并促进凋亡(均P<0.05)。与sh-NC组相比,sh-GDI2组p75NTR蛋白表达上调,IKK、p-NF-κB、p-IκB蛋白表达下调(均P<0.05)。敲低GDI2可明显抑制裸鼠体内CRC肿瘤的生长(P<0.05)。结论:敲低GDI2可能通过p75NTR信号通路抑制CRC细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。

缺氧促进5HRE和AFPp调控的NTR/CB1954自杀基因系统特异杀伤HepG2细胞

目的:研究5拷贝缺氧反应元件(5HRE)和甲胎蛋白启动子(AFPp)联合调控的自杀基因系统硝基还原酶/CB1954(nitro-reductase/CB1954,NTR/CB1954)在缺氧环境下对人肝癌细胞株HepG2生长的抑制作用。方法:利用5HRE作为增强子和AFPp构成联合调控元件,与自杀基因NTR构成真核表达载体。将载体转染AFP阳性的人肝癌细胞株HepG2及AFP阴性的人胃癌细胞株MKN45,利用G418筛选稳定转染的细胞。用RT-PCR和Westernblotting检测NTR的表达。将前体药物CB1954加入稳定表达NTR基因的细胞,用MTT法观察其毒性代谢产物4-羟胺还原产物对肿瘤细胞生长的抑制作用。结果:成功筛选出稳定表达NTR的单克隆HepG2细胞和MKN45细胞。RT-PCR和Westernblotting证实单克隆HepG2细胞中NTR在mRNA和蛋白水平的表达,且缺氧环境中的表达量更高;单克隆MKN45细胞在常氧和缺氧环境中均无NTR表达。MTT法检测发现,缺氧环境下NTR基因能有效地活化前体药物CB1954,剂量依赖性地抑制NTR阳性的HepG2细胞的生长(P<0.05);但对MKN45细胞和野生型HepG2细胞无抑制作用。结论:5HRE和AFPp双重调控的NTR/CB1954自杀基因系统在体外缺氧环境下可促进对人肝癌细胞株HepG2靶向性杀伤作用。

前列腺癌神经生长因子受体TrkA/p75NTR比值与临床分期、分级的关系

目的：探讨神经生长因子（NGF）的两种受体（TrkA和p75NTR）在前列腺癌（PCa）发生、发展中的表达规律及作用机制。方法：采用免疫组化法研究62例PCa和35例良性前列腺增生（BPH）组织中TrkA及p75NTR蛋白的表达，并结合临床资料进行统计分析。结果：通过成组t检验，发现自BPH组织至低分化PCa组织（Gleason 8～10分），随着组织分化逐渐降低或临床分期逐渐增高，TrkA受体表达显著增强，p75NTR受体表达显著减低，TrkA／p75NTR比例显著增大。在BPH组织中两者比例为0．32，在Gleason评分6分的PCa组织中为0．52，在7分的组织中为1．65，而在8～10分的组织中为5．75；在pT2期组织中两者比例为0．89，在pT3a期为1．5，在pT3b期为3．75，在有淋巴结转移（pTxN1）的组织中为7．00。结论：TrkA／p75NTR比例的失调性增高，可能是前列腺细胞恶变后的基本特征之一。TrkA／p75NTR比值越高，组织分化程度越低，临床分级、分期越高，患者预后可能越差。

P75NTR的研究进展

P75NTR作为神经营养因子的受体之一,在神经系统的发育过程中发挥着至关重要的生物学作用。随着s-p75NTR,proNGF,proBDNF和sortilin等的发现,P75NTR在凋亡信号转导通路中的重要作用成为研究的热点。

多质量目标的曲轴NTR弯曲镦锻成形工艺优化

研究提高曲轴NTR弯曲镦锻外形质量的工艺参数优化方法。以中速船用6G32曲轴为例,借助数值模拟方法预测曲轴成形结果,设定曲轴外形质量评价准则。应用正交实验方法设计实验方案,模拟多种工艺条件下曲轴弯曲镦锻成形。根据实验结果,以降低曲轴成形塌角缺陷、减少飞边量、降低设备载荷为目标,采用响应面分析方法,建立评价指标与各工艺参数的函数表达式,优化始锻温度、NTR设备肘杆终锻角、模具运动方式、模具运行速度等曲轴NTR弯曲镦锻工艺参数。

曲轴NTR弯曲镦锻物理模拟系统相似性分析

分析了曲轴NTR弯曲镦锻物理模拟系统与原型系统的几何相似性、运动学相似性与动力学相似性。根据相似定理,两系统几何条件与运动学条件可以实现精确相似,并能在相关性水平α=0.05的情况下实现动力学近似相似。基于此物理模拟系统,以42CrMo钢6G32曲轴为原型,采用铅轴坯进行NTR弯曲镦锻物理模拟试验,所得锻件出现了曲轴原型系统模锻工艺中容易产生的塌角与飞边现象,且主体结构尺寸与原型锻件设计尺寸之间符合系统几何相似常数,系统传感器记录的模具成形载荷数据与预期变化趋势吻合。

脑出血血肿周围组织中P75NTR和proNGF的表达及其与细胞凋亡的关系

目的:通过对人脑出血后血肿周围不同区域组织中的P75NTR及proNGF表达的检测,探讨其在脑出血后血肿周围组织细胞凋亡中的作用。方法:本实验采集脑出血血肿清除术患者的脑组织标本,分别运用DNA断裂原位末端标记(TUNEL)法检测血肿周围及远隔部位组织中凋亡细胞、免疫组化技术及WesternBlot检测P75NTR及proNGF的表达。结果:相对于远隔部位组织,脑出血后血肿周围组织中的细胞凋亡率与P75NTR的表达水平明显增加(P<0.01),而proNGF的表达水平并没有显著变化(P>0.05),P75NTR的阳性细胞率与TUNEL的阳性细胞率呈正相关(R=0.628,P=0.00)。结论:脑出血后,血肿周围组织与远隔的组织相比,细胞凋亡数量明显增多,与此相对应,P75NTR的表达显著增高。至于proNGF的表达量并没有很大变化,则是因为多大比例的proNGF被裂解为mNGF可能决定了是以proNGF发挥凋亡作用还是以mNGF形式发挥促进存活作用,或是因为细胞膜表面P75NTR的表达增加,使更多的proNGF与P75NTR相结合,大量结合的proNGF由于内化的因素而不易被检测。

红景天苷对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力和海马组织Aβ含量及p75NTR表达的影响

目的探讨红景天苷对Aβ1~40所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力,p75NTR信号通路关键蛋白表达和β-淀粉样蛋白(Aβ)含量的影响。方法选取96只雄性SD大鼠,随机分为假手术组,模型对照组,红景天苷小、中、大剂量组,石杉碱甲组,每组16只。除假手术组外,各组大鼠均于双侧海马CA1区缓慢注射Aβ1~40各1μL(10μg)制备AD大鼠模型,假手术组则注射等量0.9%氯化钠溶液。红景天苷小、中、大剂量组分别于术后24 h灌胃红景天苷25,50,100 mg·kg^(-1),石杉碱甲组给予灌胃石杉碱甲50 mg·kg^(-1),假手术组及模型对照组灌胃等量0.9%氯化钠溶液,共21 d。给药结束后经Morris水迷宫实验观察红景天苷对模型大鼠学习记忆能力的影响,并采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清与海马组织中Aβ的含量,免疫组化法检测海马区神经元中p75NTR和p-JNK蛋白表达。结果与模型对照组比较,红景天苷小、中、大剂量组大鼠在水迷宫训练中潜伏期明显缩短(P<0.05或P<0.01),而水迷宫测试中跨越平台的次数显著增加(P<0.05或P<0.01);红景天苷小、中、大剂量组血清与海马组织中Aβ含量显著降低;海马神经元p75NTR、p-JNK表达显著减少(P<0.05或P<0.01)。结论红景天苷可改善Aβ1~40所致学习记忆障碍模型大鼠学习记忆能力,其作用机制可能与其抑制p75NTR对Aβ的调控通路,减少Aβ的神经毒性作用,从而使海马神经细胞凋亡减少有关。

钼对人食管癌细胞ECA-109的化疗增敏作用及对食管癌干细胞p75^(NTR)的影响

目的:探讨钼对食管癌细胞ECA-109化疗敏感性的影响及对食管癌干细胞p75NTR作用.方法:本实验选用人食管癌细胞(esophageal cancer cells,ECCs)ECA-109.设计分为4组:空白对照组、顺铂组、单纯加钼组、顺铂加钼组,后3组均采用不同的浓度进行试验.用MTT法检测各组对人食管癌细胞ECA-109的生长抑制作用;流式细胞仪检测各组p75NTR百分率的变化.结果:顺铂组各浓度对食管癌细胞ECA-109有一定的抑制作用,且对食管癌干细胞也有不同程度的抑制作用,并且随着给药浓度和时间的增加均呈增强趋势;单纯加钼组对食管癌细胞ECA-109和对食管癌干细胞的抑制作用均不明显;顺铂加钼组对食管癌细胞ECA-109和食管癌干细胞的抑制作用则明显增强,与单用同浓度顺铂组及空白对照组比较有差异性(P<0.05),且呈一定的浓度、时间依赖性.结论:钼可明显增强顺铂对食管癌细胞ECA-109和食管癌干细胞的抑制作用,而单用钼则达不到理想的效果,说明钼可作为化疗增敏剂,为其作为食管癌化疗的辅助剂提供了实验依据.

NGF及其受体trkA及p75NTR在子宫内膜异位症患者在位内膜中的表达及其与内异症疼痛的关系

目的:研究子宫内膜异位症(内异症)患者在位内膜神经生长因子(NGF)及其受体trkA、p75NTR的表达,探讨上述因子与内异症疼痛的关系。方法:选择就诊于北京协和医院并进行了腹腔镜手术的28例子宫内膜异位症患者作为研究组,非子宫内膜异位症患者10例作为对照组(B组),收集上述患者分泌期在位子宫内膜。根据患者有无痛经,分为内异症疼痛组(A1组,18例)及内异症非疼痛组(A2组,10例)。采用免疫组化比较各组病灶中NGF及其受体trkA、p75NTR的表达,并分析其与痛经的关系。结果:各组在位内膜腺上皮中NGF的表达显著高于间质(P<0.05);内异症疼痛组腺上皮NGF表达较非疼痛组明显升高(359.9±18.7 vs 201.3±34.3,P<0.05)。p75NTR主要在子宫内膜间质细胞中表达;内异症组明显高于非内异症组(58.8±21.1、22.5±16.1 vs 0,P<0.05);内异症疼痛组较非疼痛组p75NTR表达明显升高(58.8±21.1 vs 22.5±16.1,P<0.05)。trkA在非内异症组子宫内膜间质中表达明显高于腺上皮(P<0.05);在内异症组腺上皮中,trkA的表达较非内异症组明显增高(P<0.05);trkA的表达量与内异症患者疼痛无关。结论:p75NTR可能参与内异症的发病,NGF及其受体p75NTR在在位内膜中的表达与患者疼痛相关,表明其可能参与了内异症疼痛发病机制。

脑白质损伤新生大鼠脑白质P75NTR蛋白与RhoA mRNA的表达及意义

目的最近研究发现NgR-P75NTR-RhoA信号通路在神经损伤和重塑方面发挥关键作用,但其确切传导机制及在缺氧缺血后新生动物P75NTR对下游分子RhoA调控变化尚不清楚。该实验在建立新生大鼠缺氧缺血性脑白质损伤(WMD)模型基础上,观察WMD新生大鼠脑白质P75NTR和RhoA mRNA表达变化,探讨WMD时两者的关系及意义,为临床治疗早产儿WMD提供新思路和实验依据。方法制备新生大鼠WMD模型,光镜及电镜观察脑组织形态学改变。应用免疫组织化学方法及荧光定量RT-PCR检测对照组及WMD12,24,48,72h和7d组病变侧脑白质P75NTR蛋白及RhoA mRNA表达变化。结果光镜和电镜形态学发现WMD组缺氧缺血48h后即有显著的脑室周围脑白质损伤。WMD组大鼠纹状体和胼胝体P75NTR蛋白水平12h开始升高,48h达峰值,至72h略有下降,与对照组比较差异有显著性,均P<0.01,之后下降明显,第7天与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。WMD组大鼠脑白质RhoA mRNA表达12h开始升高,48h达到峰值,与对照组比较,差异有显著性,均P<0.05。72h仍高于对照组水平,之后开始下降,第7天与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论WMD新生大鼠脑白质中P75NTR蛋白水平呈现先上升后下降的趋势。其升高与介导神经细胞凋亡和抑制神经轴突再生可能有关,表达下降则与缺氧缺血性损伤加重神经细胞坏死相关。RhoA mRNA的表达变化趋势与P75NTR一致,提示P75NTR水平升高可促使RhoA mRNA高表达。

p75NTR对舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的影响

目的:探讨p75NTR基因对舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的影响。方法:流式细胞技术分选Tca8113细胞系中p75NTR阳性细胞及阴性细胞,对阳性细胞用脂质体瞬时转染荧光标记的p75NTR siRAN,实时定量RT-PCR检测p75NTR基因,western blot检测p75NTR蛋白表达;流式细胞仪Annexin V/PI双染色标记法进行凋亡检侧;MTT检测细胞增殖的影响。结果:p75NTR表达阳性的Tca8113细胞经p75NTR siRNA转染后p75TNR的表达被抑制;细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞增殖率明显降低。结论:p75NTR在Tca8113细胞凋亡中具有调控作用。

p75^(NTR)在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨神经营养因子受体p75NTR在乳腺癌中的表达及与临床病理、激素受体、分子分型之间是否存在相关性。方法:利用免疫组织化学法检测186例乳腺癌组织p75NTR、ER、PR、HER2、Ki-67的表达情况,分析p75NTR与临床病理参数间的相关性。结果:p75NTR在乳腺癌组织中阳性表达占11.3%(21/186),p75NTR的表达与组织分级、Ki-67蛋白水平正相关(P<0.05),与ER表达负相关(P<0.05),与肿瘤大小、是否绝经、淋巴结转移等无关(P>0.05),但在淋巴结转移分层分析中淋巴结转移<4枚与淋巴结≥4之间,p75NTR的表达与之相关(P<0.05);p75NTR表达与Luminal B型及三阴乳腺癌亚型显著相关。结论 :p75NTR可预测三阴乳腺癌及Luminal B亚型,较准确地进行分子分型,为指导临床分层治疗提供依据。

p75^(NTR)阳性人食管鳞癌细胞的干细胞特性研究

目的探讨p75NTR阳性人食管鳞癌细胞的干细胞特性。方法取15例新鲜人食管鳞癌组织制成单细胞悬液,分别获取p75NTR阳性和p75NTR阴性细胞,进行Transwell侵袭试验、耐化疗药物试验及裸鼠成瘤试验。结果15例新鲜人食管鳞癌组织中有7例发现p75NTR表达,其阳性表达率最高为10.37%,p75NTR阳性和p75NTR阴性细胞在侵袭性、对化疗药物的耐受能力及致瘤能力上差异有统计学意义。结论 p75NTR阳性较p75NTR阴性食管鳞癌细胞具有更强的侵袭性、耐化疗能力及致瘤能力,可能富集人食管鳞癌干细胞。

应用p75^NTR分选食管肿瘤干细胞并鉴定其生物学特性

目的:应用p75NTR进行人食管肿瘤干细胞的分选,并对其生物学特性进行鉴定。方法:对人食管癌标本癌细胞及食管癌细胞株TE-1、Eca109进行培养,应用流式细胞仪检测p75NTR在人食管癌细胞(esophageal cancer cells,ECCs)中的表达,应用磁珠分选(MACS)法进行p75NTR阳性细胞与阴性细胞的分选,观察p75NTR阳性细胞的增殖、分化及软琼脂克隆形成能力,并进行裸鼠接种以观察其致瘤能力;应用化疗药物作用于ECCs后检测其中p75NTR阳性细胞与阴性细胞存活率,以评价p75NTR阳性细胞对化疗药物的耐受性。结果:8个食管肿瘤细胞系(株)中,除SHEC-1、SHEC-5未检测到p75NTR阳性细胞外,其余6个细胞系(株)SHEC-4、SHEC-6、SHEC-7、SHEC-8、Eca109、TE-1中均检测到p75NTR阳性细胞,阳性细胞比例分别为2.71%、0.32%、3.35%、1.13%、2.15%、0.45%。与阴性及未分选细胞相比,MACS分选后的p75NTR阳性细胞具有较强的增殖能力,具有分化产生其他表型细胞的能力,在软琼脂中具有较强的克隆形成能力(P<0.01);行裸鼠接种时,p75NTR阳性细胞表现出较强的致瘤性,其中SHEC-7细胞只需2×103个即可致瘤,其致瘤能力是未分选细胞的50倍。化疗药物分别作用于p75NTR阳性细胞与阴性细胞48h后,p75NTR阳性细胞的存活比例明显高于阴性细胞(P<0.05)。结论:人食管肿瘤细胞中p75NTR阳性细胞具有自我更新、分化、增殖能力,对化疗药物具有较强的耐受性,并具有较强的致瘤能力,具有肿瘤干细胞的特性。

p75NTR介导神经细胞凋亡研究进展

在神经发育过程中,神经营养因子通过其低亲和力受体p75NTR与高亲和力受体Trk的介导,在神经元的存活、分化与髓鞘形成中发挥着重要的作用;与存活、生长这些“正性”信号相反,p75NTR也介导受损后及新生神经元凋亡这一“负性”信号。一直以来,p75NTR是如何介导这些截然相反的功能仍不清楚,尤其是何时引起凋亡,其机制如何更是所知甚少。近来,随着s-p75NTR、proNGF、sortilin复合受体等的发现,其中的一些机制开始有所明朗。本文就p75NTR介导神经元凋亡的研究进展做一综述。

p75NTR在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨p75NTR在胃癌组织中的表达及临床意义。方法选择2015年1月—2016年1月在解放军白求恩国际和平医院行手术切除的胃癌60例,将其胃癌组织标本作为研究对象,根据患者淋巴结是否转移及病灶浸润深度进行分组。统计比较淋巴结转移阴性组、淋巴结转移阳性组以及病灶浸润肌层组、病灶浸润全层组p75NTR检测情况,并对淋巴结转移阴性组和淋巴结转移阳性组治疗后生活质量进行比较。结果淋巴结转移阴性组p75NTR检出阳性率显著高于淋巴结转移阳性组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。病灶浸润肌层组p75NTR检出阳性率显著高于病灶浸润全层组,两组比较差异亦具有统计学意义(P<0.05)。治疗后淋巴结转移阴性组日常生活能力评分、躯体功能评分、心理功能评分及社会功能评分均显著高于淋巴结转移阳性组,两组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 p75NTR水平检测可提示胃癌组织淋巴结转移情况以及病灶浸润深度,p75NTR水平检测可作为预测胃癌患者预后情况的依据。

急性高眼压模型中p75^(NTR)抑制剂对视网膜神经节细胞作用的研究

目的验证通过抑制p75^(NTR)(p75 neurotrophin receptor)可降低急性高眼压(acute ocular hypertension,AOH)对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的损伤作用。方法应用大鼠急性高眼压模型,玻璃体腔注射p75^(NTR)抑制剂(TAT-Pep5),按建模后1、3、5 d取材,分为正常对照组、假手术组、急性高眼压组、急性高眼压+TAT-Pep5组。采用免疫荧光技术、Western blotting等方法检测急性高眼压模型中相关蛋白的表达变化。TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况。结果急性高眼压模型视网膜Müller细胞上proNGF表达增加。注射p75^(NTR)抑制剂TAT-Pep5后急性高眼压视网膜上cleavedcaspase 3蛋白量减少,并且RGCs凋亡数目减少。结论视网膜神经节细胞损伤可引起proNGF表达增加,选择性阻断Müller细胞上的p75^(NTR)或干预其信号传导通路,可以减少急性高眼压模型中RGCs凋亡。

消异方对子宫内膜异位症模型大鼠异位内膜P75NTR的影响

目的:观察消异方对子宫内膜异位症大鼠异位内膜P75NTR的影响,探讨消异方治疗子宫内膜异位症的机制。方法:采用自体手术移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,随机分为模型组、米非司酮组、散结镇痛胶囊组、消异方低、中、高剂量组。造模成功各组给药4W,免疫组化方法检测大鼠异位子宫内膜组织P75NTR的表达情况。结果:模型组异位内膜中P75的表达水平明显高于米菲司酮组、散结镇痛胶囊组和中药消异方各剂量组(P<0.05)。结论:消异方能降低大鼠子宫内膜P75NTR的含量,以达到治疗子宫内膜异位症所引起的慢性盆腔疼痛的作用。