NTS与TES基因对EEC凋亡调控作用的研究

NTS参与产前代谢和神经系统的早期建立,TES是构成细胞间连接的一部分。该研究主要探究NTS及TES对山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)凋亡和凋亡相关蛋白(P38 MAPK和caspase-8)的调节作用。通过构建NTS和TES过表达载体并将其转染至EEC,用流式细胞凋亡检测、Real-time PCR和Western Blot等试验进行检测。结果表明:过表达NTS和TES都对EEC凋亡具有显著抑制作用(P<0.05),对细胞凋亡相关蛋白Caspase-8和p38的调控作用相同,增加p38的表达(P<0.05),而抑制Caspase-8的表达(P<0.01);NTS和TES在EEC中存在负反馈调节作用,在mRNA和蛋白水平NTS过表达显著抑制TES的表达(P<0.01),而TES过表达对NTS mRNA表达水平无显著影响(P>0.05),但可以显著抑制NTS蛋白水平的表达(P<0.05)。

NT5DC2是三阴性乳腺癌潜在的肿瘤标志物

目的本研究利用生物信息学分析NT5DC2基因在三阴性乳腺癌中的作用,探究三阴性乳腺癌的潜在肿瘤标志物。方法从TCGA数据库中获取乳腺癌患者的mRNA表达数据及对应的临床数据,从GEO数据库中获取三阴性乳腺癌患者的单细胞测序数据,并利用R语言对NT5DC2进行表达、机器学习、生存、免疫浸润、GSEA基因富集、单细胞测序数据等分析。结果三阴性乳腺癌组织的NT5DC2表达水平较正常组织及非三阴性乳腺癌组织的显著上调,且高表达NT5DC2水平在三阴性乳腺癌患者中显示出较差的总生存期。NT5DC2基因在三阴性乳腺癌患者中有较高的诊断价值。NT5DC2的表达水平与多个免疫细胞的浸润呈负相关,并与多个免疫相关功能及通路呈负相关。此外,高表达NT5DC2水平在三阴性乳腺癌中提示着较高的肿瘤纯度。最后,NT5DC2在三阴性乳腺癌上皮细胞中表达明显高表达,而在免疫细胞中几乎不表达,可以考虑NT5DC2通过抑制免疫细胞从而促进三阴性乳腺癌的进展。结论NT5DC2基因可能是三阴性乳腺癌的诊断及预后肿瘤标志物,并可能通过抑制免疫细胞从而促进三阴性乳腺癌的进展。

硒都黑猪NT5C1A基因组织表达特征及遗传多态性分析

本实验旨在探究猪NT5C1A基因组织表达特征、遗传多态性及其与胴体和肉质性状的关系,为猪肉质性状的遗传改良提供新的分子标记。利用荧光定量PCR检测了NT5C1A基因在16个组织中的表达特征。采用PCR产物直接测序技术在硒都黑猪群体中对NT5C1A基因的SNPs位点进行筛选鉴定,并利用SAS 8.0软件中的混合线性模型分析SNPs位点与猪胴体和肉质性状的相关性。结果显示:NT5C1A基因在腰大肌表达量最高;在硒都黑猪中存在3个SNPs位点,分别为rs81390049 C>T、rs81390048 A>G和rs339707155C>T突变。性状关联分析表明,3个SNPs位点均与猪胴体或肉质性状显著相关。这3个SNPs位点紧密连锁,形成3种单倍型,并且与猪胴体和肉质性状显著关联。综上,NT5C1A基因3个SNPs位点可作为猪肉质性状遗传改良的分子标记。

妊娠高血压综合征与线粒体基因nt3243位点突变

目的 :明确线粒体基因 nt32 4 3位点 A→ G突变是否是一般人群妊高征发生的原因。方法 :采用聚合酶链反应及限制性片段长度多态性分析技术 ,对 30例妊高征患者和 30例正常妊娠孕妇的线粒体基因 nt32 4 3位点 A→ G突变情况进行检测。结果 :在妊高征患者和正常妊娠孕妇中均未检测到线粒体基因 nt32 4 3位点 A→ G突变。结论 :线粒体基因nt32 4 3位点

烟草Nt14-3-3基因的克隆及生物信息学和表达模式分析

为明确烟草中Nt14-3-3基因家族的功能,采用同源克隆的方法,在烟草品种K326中克隆到1个14-3-3蛋白基因Nt14-3-3,并进行了生物信息学分析。运用qRT-PCR技术,对该基因非生物胁迫处理烟草幼苗后的表达特性进行了分析。结果显示,该基因序列全长783 bp,编码260个氨基酸残基。Nt14-3-3蛋白是由9个α螺旋组成的球状蛋白,含有32个磷酸化位点。组织表达分析发现,该基因在烟草根、茎、叶、花中均有表达,在根中的表达量最高。Nt14-3-3基因受低钾、高盐、干旱、脱落酸(ABA)、H_2O_2处理的诱导,表明烟草Nt14-3-3基因参与了烟草的非生物胁迫应答反应。

可分泌性GLP-1重组慢病毒的构建

目的:为了探讨使用基因治疗在体内分泌表达胰高血糖素样肽-1(GLP-1)方法治疗糖尿病的可行性,构建可分泌表达GLP-1的重组慢病毒。方法:1.将已构建成功的NT4-GLP-1融合基因插入慢病毒包装质粒pLenti6V5D-TOPO中,构建pLenti6V5D-TOPO/NT4-GLP-1重组慢病毒包装质粒。2.用慢病毒包装辅助质粒plp1、plp2、plp/VSVG,及重组慢病毒包装质粒pLenti6V5D-TOPO/NT4-GLP-1,四质粒磷酸钙共沉淀法转染80%融合的293细胞系,包装慢病毒。3.通过免疫组化法染色确定重组慢病毒效应。结果:重组质粒经BamHⅠ和XhoⅠ联合酶切,10g/L琼脂糖凝胶电泳可见在342bp处有一目的片段。该值与NT4-GLP-1融合基因片段的大小一致,说明NT4-GLP-1融合基因已经成功重组于慢病毒包装质粒pLenti6V5D-TOPO内。免疫组化结果显示,实验组细胞内出现大量棕黄色颗粒,阳性细胞达到70%以上,对照组中没有阳性细胞,所以说明NT4-GLP-1重组慢病毒在细胞中可以正确地分泌表达GLP-1。结论:NT4-GLP-1重组慢病毒包装质粒构建正确,病毒包装成功。