PCR法同步检测女性生殖道感染标本中特异性NUC-DNA

我们采用ＰＣＲ技术，对１９９７年１２月至１９９８年４月间我院妇科和妇保科门诊拟诊为生殖道感染的年龄２０６２岁的１３０例妇女宫颈分泌物同步扩增３种特异性ＮＧ－ＤＮＡ、ＵＵ－ＤＮＡ、ＣＴ－ＤＮＡ，简称ＮＵＣ。其结果女性生殖道感染ＮＵＣ－ＤＮＡ总阳性率为３５４％（４６／１３０）；其中ＮＧ－ＤＮＡ阳性率为３８％（５／１３０）、ＵＵ－ＤＮＡ阳性率为２００％（２６／１３０）、ＣＴ－ＤＮＡ阳性率为１５４％（２０／１３０）；ＮＵＣ感染阳性患者中ＵＵ＋ＣＴ双重混合感染１例，ＮＧ＋ＵＵ＋ＣＴ３重混合感染２例，５例淋球菌感染患者中３重混合感染２例。结果表明，对女性生殖道感染特别是对未婚或已婚未育的生殖道感染患者常规检测ＮＵＣ是对性病诊断、防治、妇女保健及优生工作有重要的现实意义。

西安地区不同时期女性生殖道感染标本中NUC-DNA检测研究

本文用NUC DNA检测对近年来本院妇科和妇保科门诊拟诊为女生殖道感染者 ,年龄 4 6 2岁 ,共 6 0 0例 ,采用阴道分泌物同步扩增特异性NUC DNA、NUC淋菌、解脲支原体、沙眼衣原体、其结果NG DNA阳性率为 18 3% (110 / 6 0 0 ) ,UU DNA阳性率为 2 8 8% ,(173/ 6 0 0 ) ,CT DNA阳性率为 10 5 % (6 3/ 6 0 0 ) ,NUC总阳性率为 45 5 % (2 73/ 6 0 0 )。患者按不同时间分 2组 ,其结果后一组较前一组NG、UU、NG +UU、NUC总阳性率明显升高 ,均有高度显著性差异 (P≤ 0 0 0 5 )。结果提示 :西安地区近年女性生殖道感染有上升的趋势。

西安地区不孕症夫妇患者标本中NUC-DNA定量结果分析

目的通过不孕症夫妇标本中NUC-DNA定量结果分析,了解其患者集中的拷贝数和平均值并为临床药物治疗提供依据。方法采用FQ-PCR技术检测656份女性不孕症患者宫颈分泌物和789份男性不孕症患者精液标本中NUC-DNA。结果656份女性不孕症患者宫颈分泌物标本中CT-DNA阳性率为1.99%(12/603);UU-DNA阳性率为50.15%(329/656);NG-DNA阳性率为0.51%(3/591);789份男性不孕症患者精液中CT-DNA阳性率为1.10%(8/728);UU-DNA阳性率为13.56%(107/789);NG-DNA阳性率为0.52%(3/578)。结论西安地区女性不孕症患者宫颈分泌物中UU阳性率较男性高,男女CT、NG阳性率很低,逐渐下降趋势。了解不孕症夫妇标本中NUC-DNA定量结果对不孕症夫妇NUC感染的临床治疗有指导意义。

西安地区女性生殖道感染患者宫颈分泌物中NUC-DNA定量结果分析

目的通过女性生殖道感染患者宫颈分泌物中NUC-DNA定量结果分析,了解其患者集中的拷贝数和平均值并为临床药物治疗提供依据。方法采用FQ-PCR技术检测1373份女性生殖道感染患者宫颈分泌物中NUC-DNA。结果CT-DNA阳性率为6.38%(62/972);UU-DNA阳性率为49.53%(680/1373);NG-DNA阳性率为4.15%(9/217)。CT、UU、NG的平均拷贝数分别为9.83×106IU、6.96×105IU、6.83×106IU。结论西安地区女性生殖道感染患者宫颈分泌物中UU阳性率较高,呈逐年增高的趋势,CT、NG阳性率较低,呈逐渐下降趋势;采用实时FQ-PCR技术检测女性生殖道感染患者宫颈分泌物中NUC-DNA,了解其定量结果对临床治疗和优生优育有指导作用。

金黄色葡萄球菌nuc基因特异性核酸探针的制备及应用

目的 建立核酸探针检测实验动物金黄色葡萄球菌的方法。方法 将重组质粒pGEM NUC中金黄色葡萄球菌nuc基因特异性片段酶切回收 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验探针 ,对细菌菌株及临床样品进行了检测。结果 核酸探针与金黄色葡萄球菌DNA呈杂交阳性 ,而与表皮葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌等其他细菌DNA呈杂交阴性 ,斑点杂交检测的灵敏度为 1pg基因组DNA。用斑点杂交试验和PCR对 32 2份SPF小鼠的临床样品进行了检测 ,检出率为 3 1% (10 /32 2 ) ,符合率为 10 0 % ,与细菌学检查的结果相一致。结论 建立的DNA探针检测金黄色葡萄球菌方法具有高度的特异性和敏感性 ,且较快速 ,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的监测。

恒温隔绝式聚合酶链式反应检测食品中金黄色葡萄球菌

建立一种恒温隔绝式聚合酶链式反应(insulated isothermal polymerase chain reaction,iiPCR)检测食品中金黄色葡萄球菌的方法。根据nuc基因设计特异性引物、探针,并探索针对食品样品快速提取金黄色葡萄球菌模板DNA的方法;通过优化引物、探针及模板的用量,对iiPCR的特异性、灵敏度、稳定性进行评价,并利用该方法和传统PCR方法对人工污染样品和实际采集食品样品中的金黄色葡萄球菌进行检测和比较。结果表明:水浴法因操作简便、耗时短、仪器要求不高,适合快速提取模板DNA;建立的iiPCR具有特异性强、灵敏度高、稳定性好的特点,且与其他菌无交叉反应;对人工污染猪肉样品和牛奶样品中的金黄色葡萄球菌,iiPCR方法可在培养至第6小时完成检测,检出限为10^(3) CFU/mL和10^(2) CFU/mL,传统PCR方法8 h后完成检测,检出限为10^(5) CFU/mL;针对实际采集的食物样品,验证实验表明iiPCR方法在培养至第6小时的检出结果与传统PCR在培养至第12小时以及传统培养方法培养至第16小时的检出结果一致。证明建立的iiPCR方法能够更快速准确检测食品中金黄色葡萄球菌。

中国北方沿海竿虾虎鱼(Luciogobius guttatus)隐存多样性与群体历史动态

竿虾虎鱼(Luciogobius guttatus)隶属于拟虾虎鱼亚科(Gobionellinae),已知分布于中国沿海、朝鲜半岛和日本的岩基砾石质潮间带。日本学者发现竿虾虎鱼在日本沿海存在三个谱系,但在我国,针对竿虾虎鱼的研究仅限于形态测量和野外调查记录。基于线粒体DNA和核基因序列标记,本研究从系统发育和群体遗传两个角度,揭示竿虾虎鱼在我国北方沿海的隐存多样性与群体历史。结果表明,与日本分布的竿虾虎鱼对比,我国北方沿海分布的竿虾虎鱼存在以崂山为潜在屏障的偏南、偏北两个谱系,分别对应于日本沿海的谱系A和谱系C,缺少谱系B。本研究推测,末次冰期对竿虾虎鱼的有效种群扩张和群体的分化及扩散起到关键作用,且不同谱系对冰期气候变化的反应并不一致。本研究初步查明了中国北方沿海竿虾虎鱼的隐存多样性现状,为我国竿虾虎鱼的保护提供了分子依据。

基于颜色判定的DNA环介导恒温扩增法快速检测金黄色葡萄球菌

目的建立基于颜色判定的DNA环介导恒温核酸扩增法(loop-mediated isothermal amplification of DNA,LAMP)快速检测金黄色葡萄球菌(SAU)技术。方法利用LAMP法针对SAU特异基因nuc基因设计7套引物,通过对7套引物扩增效率进行比较得到最佳引物组合来快速检测SAU,采用两种结果判断方法在50 min内完成反应。结果 LAMP方法检测核酸的最低浓度为7.16 pg/μl,灵敏度为PCR法的10倍(PCR法为71.6 pg/μl),同时采用22种同源或相似菌种进行特异性检测,结果表明具有良好的特异性。结论 LAMP方法检测过程简单,实验装置简便,反应结果肉眼可视化辨别,灵敏度高,特异性强,特别适合基层防疫与检疫部门对SAU的快速检测。