mRNA成熟调控因子NUDT21对K562细胞转录本选择性剪接的影响

目的:研究mRNA前体3′端剪接调控因子NUDT21对白血病K562细胞转录本选择性剪接的影响。方法:以白血病K562细胞为研究对象,通过慢病毒敲减Nudix水解酶21(Nudix hydrolase 21,NUDT21)后,应用转录组测序RNA-Seq方法明确干扰前、后转录本的表达水平。生物信息学方法分析差异表达基因及可变剪接的变化,并用qPCR验证。结果:NUDT21敲减后K562细胞基因差异表达表现:上调5196条,下调3917条;转录本差异表达表现:上调22200条,下调19728条。通过GO和KEGG分析,NUDT21敲减后表达显著差异的转录本主要与细胞粘附分化、造血细胞系及自身免疫等过程相关。差异显著的选择性剪接共有436个,主要涉及细胞增殖、代谢等多个生物学过程的调控。ERBB2、MAPK激酶MKNK2、G蛋白偶联受体GRK6、真核细胞翻译延伸因子EEF1B2、细胞周期蛋白CCNL2、有丝分裂检查点蛋白BUB3等出现m RNA前体3′端的剪接改变。其中ERBB2mRNA变体1的表达减少,变体4的表达增多。结论:NUDT21通过包括mRNA前体3′端可变剪接在内的多种调控方式从较高层面影响细胞的生物学功能。

过表达核苷二磷酸X水解酶21(NUDT21)通过阻断P53/CDK2/Rb通路抑制HCT-116结肠癌细胞的增殖

目的探讨过表达核苷二磷酸X水解酶21(NUDT21)对HCT-116结肠癌细胞增殖的影响及可能的机制。方法Gibson组装法构建NUDT21过表达质粒。克隆形成实验、CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot法检测P53、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)的蛋白水平,以及第780位丝氨酸磷酸化的视网膜母细胞瘤蛋白(p-Rb-Ser780)和p-Rb-Ser608的蛋白水平。结果测序结果提示NUDT21过表达载体构建成功,HCT-116细胞转染NUDT21过表达质粒后,其mRNA和蛋白水平表达量明显升高。过表达NUDT21抑制结肠癌HCT-116细胞增殖,细胞周期阻滞于G0/G1期;过表达NUDT21后,CDK2、p-Rb-Ser608与p-Rb-Ser780蛋白表达量降低,P53蛋白水平增高。结论过表达NUDT21通过阻断P53/CDK2/Rb信号通路抑制结肠癌HCT-116细胞的增殖。