核糖体自噬对脂多糖诱导树突细胞凋亡的影响

目的探讨脂多糖(LPS)刺激下NUFIP-1介导核糖体自噬在树突细胞(DCs)凋亡中的作用及意义。方法将培养的树突细胞系DC2.4分为空白对照组及LPS刺激6、12、24、48、72 h组(n=5),LPS各亚组加入1μg/mL LPS培养相应时间。采用Western blot检测各组细胞NUFIP-1及自噬相关蛋白p62和LC3B表达水平,激光共聚焦显微镜检测NUFIP-1在细胞中的表达与定位及其分别与Lyso-tracker、LC3B共定位情况。将载有沉默空载体NS及沉默慢病毒载体NUFIP-1 siRNA感染DC2.4(n=3),以1μg/mL LPS刺激24 h,应用流式细胞分析术检测细胞凋亡情况,并采用Western blot检测凋亡相关蛋白包括胱天蛋白酶(cleaved-caspase-3)和Bcl-2表达水平。多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),采用LSD-t法进一步进行组间两两比较。以P<0.05为差异有统计学意义。结果Western blot结果提示,LPS刺激不同时间(6、12、24、48、72 h)后DC2.4中NUFIP-1蛋白表达水平呈现先升高后下降趋势,其中LPS 24 h组NUFIP-1表达水平显著高于空白对照组[空白对照组:(0.6786±0.0820);LPS 24 h组:(1.4830±0.1170),P<0.01]。同时,LPS 24 h组p62表达水平显著低于空白对照组[空白对照组:(0.9087±0.1235);LPS 24 h组:(0.3113±0.5571),P<0.01]。LPS 24 h组LC3B-I向LC3B-Ⅱ的转化显著高于空白对照组[空白对照组:(0.5542±0.1248);LPS 24 h组:(2.5310±0.3119),P<0.01]。激光共聚焦显微镜观察显示,NUFIP-1主要定位于细胞核及核周,LPS刺激后其荧光强度于6 h至24 h呈时间依赖性增强,而刺激48、72 h明显减弱。同时,NUFIP-1与Lyso-tracker及LC3B的共定位较空白对照组显著增强。采用慢病毒感染技术感染NUFIP-1 siRNA可显著下调DC2.4 NUFIP-1表达水平,与空白对照组及空载体组比较分析,差异有统计学意义[空白对照组:(0.6627±0.1707);空载体组:(0.6966±0.1107);siRNA组:(0.1428±0.0296),P<0.05]。流式细胞分析术显示,NUFIP-1 siRNA感染组在LPS刺激后较空白对照LPS 24 h组及空载体LPS 24 h组DC2.4凋亡率显著升高[空白对照LPS 24 h组:(47.91%±1.006%);空载体LPS 24 h组:(70.26%±1.011%);siRNA LPS 24 h组:(80.23%±2.094%),P<0.01]。Western blot分析进一步证实,NUFIP-1 siRNA感染组相较空白对照组及空载体组在LPS刺激下DC2.4凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3表达显著增强[空白对照LPS 24 h组:(0.4748±0.0876);空载体LPS 24 h组:(0.2849±0.0418);siRNA LPS 24 h组:(0.9733±0.0525),P<0.01],抗凋亡蛋白Bcl-2表达则明显下调[空白对照LPS 24 h组:(0.7810±0.0490);空载体LPS 24 h组:(0.8292±0.0729);siRNA LPS 24 h组:(0.3957±0.0838),P<0.05]。结论LPS刺激后DC2.4中NUFIP-1介导核糖体自噬明显活化,且对DC2.4凋亡具有显著保护效应。

最佳尿量阈值指导急性胰腺炎患者的早期液体治疗

目的探讨急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者发生急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的尿量阈值,指导早期液体治疗。方法提取美国重症监护医学信息数据库Ⅳ(medical information mart for intensive careⅣ,MIMIC-Ⅳ)中AP患者的临床资料,计算24 h尿率[24 hour urine output·kg^(-1)·24 hour^(-1),24-UR mL/(kg·h)]和48 h尿率[48 hour urine output·kg^(-1)·48 hour^(-1),48-UR mL/(kg·h)],根据患者7 d内是否发生急性肾损伤(AKI within 7 days,7-AKI)分为7-AKI组和非7-AKI组,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,评估24-UR和48-UR对AP患者7-AKI发生的预测价值,根据ROC曲线得出的最佳截断值分别对24-UR与48-UR分组,采用逻辑回归分析7-AKI的危险因素,绘制Kaplan-Meier(KM)生存曲线分析24-UR和48-UR对AP患者住院病死率的影响。结果共纳入713例AP患者,ROC曲线分析结果显示,24-UR预测AP患者7-AKI的ROC曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)为0.76,依据最大约登指数计算出的24-UR截断值为0.795 mL/(kg·h),48-UR的AUC为0.78,48-UR截断值为0.975 mL/(kg·h)。逻辑回归分析结果显示,与24-UR>0.795 mL/(kg·h)相比,24-UR≤0.795 mL/(kg·h)的是7-AKI的独立危险因素(OR:4.22,95%CI:1.5~11.85,P=0.006),同样,与48-UR>0.975 mL/(kg·h)相比,48-UR≤0.975 mL/(kg·h)的是7-AKI的独立危险因素(OR:3.75,95%CI:1.45~9.72,P=0.007);KM生存曲线显示高24-UR组住院生存率高于低24-UR组。结论24-UR可用于指导AP患者早期液体治疗。