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长链非编码RNA NUTM2A-AS1靶向微小RNA-129-5p调控氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究
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作者 李晓宇 张永咏 +1 位作者 秦娟 杨忠信 《实用临床医药杂志》 CAS 2024年第3期45-50,共6页
目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NUTM2A-AS1对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)在DMEM培养基中培养,采用100μg/mL oxLDL处理的HUVEC纳入oxLDL组,常规培养的细胞纳... 目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NUTM2A-AS1对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)在DMEM培养基中培养,采用100μg/mL oxLDL处理的HUVEC纳入oxLDL组,常规培养的细胞纳入Con组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体及阴性对照、miR-129-5p模拟物及阴性对照转染至HUVEC后采用100μg/mL oxLDL处理后的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1组、oxLDL+si-NC组、oxLDL+miR-129-5p组、oxLDL+miR-NC组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体与微小RNA(miR)-129-5p抑制剂或阴性对照共转染至HUVEC后采用100μg/mL的oxLDL处理的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-129-5p组、oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-NC组。采用试剂盒测量细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验及RNA下拉实验检测NUTM2A-AS1与miR-129-5p的靶向关系。结果 与Con组比较,oxLDL组lncRNA NUTM2A-AS1表达水平升高,miR-129-5p表达水平降低,MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性降低,血管内皮细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达或过表达miR-129-5p后,MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA NUTM2A-AS1敲低介导的oxLDL条件下血管内皮细胞的损伤抑制可以被miR-129-5p下调逆转。lncRNA NUTM2A-AS1靶向调控miR-129-5p。结论 干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达通过靶向上调miR-129-5p抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤。 展开更多
关键词 长链非编码rna nutm2a-AS1 微小rna-129-5p 氧化低密度脂蛋白 血管内皮细胞 损伤 氧化应激 凋亡
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术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4以及长链非编码核糖核酸SBF2反义RNA1与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤的关系
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作者 姚俊波 贾波 +2 位作者 刘加元 邹一鸣 邓思文 《实用临床医药杂志》 CAS 2024年第10期29-34,共6页
目的探讨术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)以及长链非编码核糖核酸(LncRNA)SBF2反义RNA1(SBF2-AS1)与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤(AKI)的关系。方法选择2020年1月—2022年12月本院收治的109例肾结石患者为研究对象。... 目的探讨术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)以及长链非编码核糖核酸(LncRNA)SBF2反义RNA1(SBF2-AS1)与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤(AKI)的关系。方法选择2020年1月—2022年12月本院收治的109例肾结石患者为研究对象。术前检测患者血清VSIG4水平以及LncRNA SBF2-AS1表达,术后记录AKI发生情况。采用多因素Logistic回归模型分析肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析VSIG4、LncRNA SBF2-AS1预测肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的价值。结果本研究中,术后发生AKI者16例。AKI组血清VSIG4水平低于非AKI组,LncRNA SBF2-AS1表达高于非AKI组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,术前高尿酸水平、术前高LncRNA SBF2-AS1表达、较长的手术时间、术中低血压是肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的危险因素(P<0.05),术前高VSIG4水平是保护因素(P<0.05)。术前血清VSIG4、LncRNA SBF2-AS1水平预测肾结石患者经皮肾镜术后发生AKI的曲线下面积分别为0.854、0.705,二者联合预测的曲线下面积为0.948,大于各指标单独预测(Z=1.995、2.958,P<0.05)。结论肾结石患者术前血清VSIG4水平降低、LncRNA SBF2-AS1表达增高与经皮肾镜取石术后AKI的发生有关,联合检测术前VSIG4、LncRNA SBF2-AS1可预测术后AKI的发生风险。 展开更多
关键词 肾结石 经皮肾镜取石术 急性肾损伤 V-set和免疫球蛋白结构域4 长链非编码核糖核酸 SBF2反义rna 1
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LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT在糖尿病肾病患者中的表达及与肾功能的相关性研究 被引量:1
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作者 何德娇 凌娜 +3 位作者 李正翔 乔玲 张淼淼 夏露 《疑难病杂志》 CAS 2024年第7期809-813,共5页
目的探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性。方法选取于2021年11月—2023年12月在武汉大学... 目的探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性。方法选取于2021年11月—2023年12月在武汉大学人民医院肾内科收治的DN患者106例为DN组,并根据24 h尿蛋白定量(24 h Upro)水平分为正常蛋白尿亚组43例(<30 mg)、微量蛋白尿亚组39例(30~<300 mg)、大量蛋白尿亚组24例(≥300 mg),另选取同期医院单纯糖尿病患者106例作对照组,检测患者血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平;Pearson法分析LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT与肾功能指标的相关性;Logistic分析影响DN患者肾功能损伤的因素。结果DN组血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平低于对照组(t=11.471、10.257,P均<0.001)。血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT比较,正常尿蛋白亚组>微量尿蛋白亚组>大量尿蛋白亚组(F=58.720、117.722,P均<0.001),BUN、SCr、UA水平比较,正常尿蛋白亚组<微量尿蛋白亚组<大量尿蛋白亚组,差异均有统计学意义(F=122.493、595.589、53.178,P均<0.001);LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT分别与BUN、SCr、UA呈负相关(r=-0.487、-0.498、-0.521,-0.527、-0.515、-0.534,P均<0.001);Logistic回归分析显示,糖尿病病程长及高BUN、SCr、UA水平是影响DN患者肾功能损伤的危险因素[OR(95%CI)=1.672(1.128~2.479)、2.839(1.534~5.253)、2.754(1.512~5.017)、2.693(1.464~4.954)],高LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT是保护因素[OR(95%CI)=0.875(0.798~0.959)、0.898(0.832~0.969)]。结论血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平与DN患者肾功能有关,可能是评估DN患者肾功能的潜在指标。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 长链非编码rna锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1 长链非编码rna性别决定相关基因簇2重叠转录本 肾功能 相关性
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腺病毒介导的cox-2反义RNA对食管癌细胞株生长的影响 被引量:7
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作者 吴清明 李胜保 +3 位作者 刘重贞 王小虎 谢国建 于皆平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第4期285-289,共5页
目的 :构建表达人环氧化酶 2 (cyclooxygenase 2 ,cox 2 )反义RNA的腺病毒载体 ,研究其对人食管癌细胞生长的影响。方法 :把人cox 2基因的cDNA片段反向克隆于穿梭质粒 pHCMVSP1A的CMV启动子之下 ,获得 pAd AShcox 2 ,通过脂质体与pJM1... 目的 :构建表达人环氧化酶 2 (cyclooxygenase 2 ,cox 2 )反义RNA的腺病毒载体 ,研究其对人食管癌细胞生长的影响。方法 :把人cox 2基因的cDNA片段反向克隆于穿梭质粒 pHCMVSP1A的CMV启动子之下 ,获得 pAd AShcox 2 ,通过脂质体与pJM17共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生编码cox 2反义RNA的重组腺病毒———Ad AShcox 2。PCR鉴定为阳性克隆并大量扩增 ,转染食管癌细胞EC970 6 ,用生长细胞计数 ,3 H TdR掺入及免疫细胞化学的方法 ,研究对食管癌细胞生长、cox 2表达、DNA合成的影响。结果 :成功构建编码cox 2反义RNA的重组腺病毒Ad AShcox 2 ,病毒感染EC970 6后 ,cox 2表达降低 ,3 H TdR掺入量减少 ,与对照组比较P <0 .0 0 1;同时发现食管癌细胞的生长受抑制。结论 :减少cox 2的表达可能是治疗食管癌的一种新途经。 展开更多
关键词 腺病毒 环氧化酶-2 反义rna 食管癌
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腺病毒介导的cox-2反义RNA对食管癌细胞株DNA和蛋白质合成的影响 被引量:7
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作者 李胜保 吴清明 +2 位作者 王强 王小虎 谢国建 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第5期517-521,共5页
目的:构建表达人cox-2反义RNA的腺病毒载体,研究其对人食管癌细胞株DNA和蛋白质合成的影响.方法:把人cox-2的cDNA片段反向克隆于穿梭质粒pHCMVSP1A的CMV启动子之下,获得pAd-AShcox-2,通过脂质体与pJM17共转染293细胞,经同源重组产生编码... 目的:构建表达人cox-2反义RNA的腺病毒载体,研究其对人食管癌细胞株DNA和蛋白质合成的影响.方法:把人cox-2的cDNA片段反向克隆于穿梭质粒pHCMVSP1A的CMV启动子之下,获得pAd-AShcox-2,通过脂质体与pJM17共转染293细胞,经同源重组产生编码cox-2反义RNA的重组腺病毒--Ad-AShcox-2.经PCR的方法鉴定为阳性克隆并大量扩增、纯化,转染食管癌细胞EC9706,采用生长细胞计数,免疫细胞化学、3H-TdR、3H-Leucine掺入法,研究对食管癌细胞生长、DNA及蛋白质合成的影响.结果:成功构建并扩增、纯化得到编码cox-2反义RNA的重组腺病毒Ad-AShcox-2,滴度达0.86×1012PFU/ml;Ad-AShcox-2感染肿瘤细胞后,cox-2表达水平明显降低,3H-TdR、3H-Leucine掺入量明显减少,与对照组在48h、72h、96h比较有显著性差异(q48h=16.36及16.36,q72h=39.07及19.90,q96h=54.80及30.33;P<0.001);同时发现食管癌细胞的生长明显受抑制.结论:表达cox-2反义RNA重组腺病毒感染人食管癌细胞后可降低cox-2表达水平,使DNA合成降低、蛋白质合成减少,且抑制食管癌细胞生长、增生,提示抑制cox-2的表达可能是治疗食管癌的一种新途经. 展开更多
关键词 腺病毒 COX-2 反义rna 食管癌 DNA合成 蛋白质合成
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环氧合酶-2反义RNA在不同时间点对人食管癌细胞系生长的影响 被引量:4
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作者 李胜保 吴清明 +2 位作者 王小虎 谢国建 于皆平 《胃肠病学》 2002年第5期286-288,共3页
背景:环氧合酶(COX)-2在人食管癌细胞系EC9706中高度表达,COX-2反义RNA能抑剂EC9706细胞的生长增殖。目的:探讨COX-2反义RNA在不同时间点对EC9706细胞生长的影响。方法:培养293细胞,扩增、纯化编码COX-2反义RNA的重组腺病毒Ad-AShcox... 背景:环氧合酶(COX)-2在人食管癌细胞系EC9706中高度表达,COX-2反义RNA能抑剂EC9706细胞的生长增殖。目的:探讨COX-2反义RNA在不同时间点对EC9706细胞生长的影响。方法:培养293细胞,扩增、纯化编码COX-2反义RNA的重组腺病毒Ad-AShcox-2,转染EC9706细胞,在不同时间点进行活细胞计数和3H-胸腺嘧啶核苷(TdR)掺入量测定。结果:扩增、纯化获得编码COX-2反义RNA的重组腺病毒Ad-AShcox-2,滴度为1.2×10^(12)PFU/ml。Ad-AShcox-2转染EC9706细胞后,在24h、48h、72h和96h时对细胞生长的抑制率分别为8.60%、24.33%、50.21%和75.26%。Ad-AShcox-2组EC9706细胞的3H-TdR掺入量从24h起开始减少,72~96h时达最低,与对照组相比有显著差异(P<0.001)。结论:COX-2反义RNA重组腺病毒感染人食管癌细胞后,从24h起开始对癌细胞产生抑制作用,72~96h时寸抑制作用最为明显。 展开更多
关键词 环氧合酶-2 反义rna 食管癌 基因治疗 腺病毒
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腺病毒介导BTEB2反义RNA对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用 被引量:2
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作者 李德 何国祥 +1 位作者 唐波 唐兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期388-391,共4页
目的 构建携带反义锌指转录因子 2 (basictranscriptionelementbindingprotein 2 ,BTEB2 )基因的重组腺病毒载体并研究BTEB2反义RNA对平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecell,VSMC)增殖的影响。方法 从培养的大鼠VSMC中提取总RNA ,通过... 目的 构建携带反义锌指转录因子 2 (basictranscriptionelementbindingprotein 2 ,BTEB2 )基因的重组腺病毒载体并研究BTEB2反义RNA对平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecell,VSMC)增殖的影响。方法 从培养的大鼠VSMC中提取总RNA ,通过RT PCR制备BTEB2cDNA ,将其反向克隆至腺病毒载体 ,构建携带反义BTEB2基因的重组腺病毒Ad .ASBTEB2 ;用Ad .ASBTEB2转染VSMC ,通过RT -PCR检测BTEB2反义RNA在VSMC中的表达 ;经免疫印迹法分析BTEB2反义RNA对BTEB2蛋白质表达的抑制作用 ;通过MTT比色法和流式细胞仪分别检测BTEB2反义RNA对VSMC增殖及细胞周期的影响。结果 构建的重组腺病毒载体经鉴定正确 ,其滴度为 5× 10 9/ml ;VSMC被重组腺病毒感染后 ,可检测到BTEB2反义RNA的表达 ;Ad .ASBTEB2转染可明显抑制VSMC的BTEB2蛋白表达及血清诱导的VSMC增殖 ,使VSMC出现明显的G0 /G1期阻滞。结论 成功构建了携带反义BTEB2基因的重组腺病毒载体 ;重组腺病可在VSMC中表达BTEB2反义RNA ; 展开更多
关键词 BTEB2 反义rna 腺病毒载体 血管平滑肌细胞
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腺相关病毒载体介导的PLB基因反义RNA对大鼠心肌细胞肌浆网Ca^(2+)-ATPase活性和[Ca^(2+)]i的作用 被引量:2
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作者 李江 胡申江 +6 位作者 赵晓燕 汪国忠 郑霞 姚宇玫 陈乃云 孙坚 朱朝晖 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期39-42,共4页
目的:探讨腺相关病毒载体介导的磷酸受纳蛋白(PLB)反义RNA对肌浆网Ca2+-ATPase活性以及细胞内钙浓度([Ca2+]i)的作用。方法:构建PLB反义RNA的重组腺相关病毒载体(rAAV-asPLB)和携带报告基因LacZ的重组腺相关病毒载体(rAAV-LacZ)。分别... 目的:探讨腺相关病毒载体介导的磷酸受纳蛋白(PLB)反义RNA对肌浆网Ca2+-ATPase活性以及细胞内钙浓度([Ca2+]i)的作用。方法:构建PLB反义RNA的重组腺相关病毒载体(rAAV-asPLB)和携带报告基因LacZ的重组腺相关病毒载体(rAAV-LacZ)。分别转染培养的大鼠心肌细胞,测定PLBmRNA和蛋白质表达,检测肌浆网Ca2+-ATPase活性和[Ca2+]i。结果:RT-PCR和Westernblotting显示,感染rAAV-asPLB的心肌细胞的PLBmRNA和蛋白质表达低于正常对照和感染rAAV-LacZ组;而Ca2+-ATPase活性大于正常对照和感染rAAV-LacZ组。激光共聚焦显微镜检测显示,静息状态时,rAAV-asPLB感染组[Ca2+]i降低;异丙肾上腺素刺激后,各组[Ca2+]i均升高,但是rAAV-asPLB感染组[Ca2+]i变化幅度大。结论:腺相关病毒介导的PLB反义RNA对大鼠心肌细胞PLB表达具有抑制作用,增强Ca2+-ATPase活性,降低静息状态的[Ca2+]i,增加异丙肾上腺素刺激后[Ca2+]i的变化幅度。 展开更多
关键词 磷酸受纳蛋白 腺病毒科 rna 反义 Ca(2+)转运ATP酶 心肌
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NUTM2A-AS1调控MAPK信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响
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作者 郭晓丹 易善永 +1 位作者 李艳艳 邢国臣 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2024年第7期625-629,共5页
目的探讨NUTM2A反义RNA 1(NUTM2A-AS1)通过调控有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR检测NUTM2A-AS1在正常人肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞中的表达。将A549细... 目的探讨NUTM2A反义RNA 1(NUTM2A-AS1)通过调控有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR检测NUTM2A-AS1在正常人肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞中的表达。将A549细胞分为Control组(空白对照)、si-NC组(阴性对照)、si-NUTM2A-AS1组(干扰NUTM2A-AS1表达)和si-NUTM2A-AS1+MAPK激动剂组(干扰NUTM2A-AS1表达联合50 nmol/L MAPK激动剂p79350)。细胞计数法(CCK-8法)、划痕实验和Transwell实验检测A549细胞的增殖、迁移和侵袭情况。Western blot检测MAPK信号通路相关因子p-ERK和p-MEK的表达。结果与BEAS-2B细胞相比,NUTM2A-AS1在NSCLC细胞中高表达(P<0.05)。与si-NC组相比,si-NUTM2A-AS1组A549细胞活力和迁移侵袭能力明显减弱,p-ERK和p-MEK水平降低(P<0.05);而与si-NUTM2A-AS1组比较,NUTM2A-AS1干扰+MAPK激动剂组A549细胞增殖活力和迁移侵袭能力增强,p-ERK和p-MEK水平升高(P<0.05)。结论NUTM2A-AS1通过激活MAPK信号通路促进NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭,可能提供一种新的NSCLC治疗靶点。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 nutm2a反义rna 1 增殖 侵袭 迁移 有丝分裂原活化蛋白激酶信号通路
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cdk2反义RNA对乳腺癌细胞增殖及致瘤性的抑制作用  被引量:4
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作者 桑建利 边昕 王永潮 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期546-551,共6页
为了研究 cdk2对乳腺癌细胞生长及cyclinA, cyclinB1和cdk1(cdc2)mRNA表达水平的影响,利用真核表达载体pXJ41-neo构建了表达cdk2反义RNA的重组载体,并用此载体转染了人乳腺癌细胞... 为了研究 cdk2对乳腺癌细胞生长及cyclinA, cyclinB1和cdk1(cdc2)mRNA表达水平的影响,利用真核表达载体pXJ41-neo构建了表达cdk2反义RNA的重组载体,并用此载体转染了人乳腺癌细胞系Bcap37,获得了cdk2表达受到抑制的细胞模型Bcap37-CDK2AS,然后将Bcap37-CDK2AS细胞的生长能力及cyclinA, cyclinB1和 cdk1 mRNA的水平与转入空载体的对照细胞进行了对比分析.结果显示cdk2表达受到抑制时,细胞生长速率下降,根据测定出的细胞生长曲线,细胞培养至第7天时,细胞生长抑制率为64%.在流式细胞术的分析结果中,G1期细胞占的百分比从39%增加到47%,S期细胞由51%下降到39%.棵鼠接种的实验表明,Bcap37-CDK2AS的致瘤性明显减弱.在对cyclinA, cyclinB1和cdk1 mRNA的分析中发现, Bcap37-CDK2AS中这3种基因的mRNA水平均有不同程度的下降,依据这些结果可以推测,cdk2反义RNA可使乳腺癌细胞生长及致瘤性受到抑制,并且cdk2表达的抑制将影响cyclinA,cyclinB和cdk1的表达水平. 展开更多
关键词 cdk2反义rna 乳腺癌 细胞增殖 抑制作用 致瘤性
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长链非编码RNA HOXA簇反义RNA2在重度子痫前期患者胎盘组织中的表达及其作用 被引量:3
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作者 盛莹 钟黎黎 +2 位作者 杨春芬 郭江虹 阳双健 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2021年第2期171-176,共6页
目的长链非编码RNA HOXA簇反义RNA2(HOXA-AS2)在子痫前期患者胎盘组织中的表达水平及其对子痫前期病理机制的影响,目前还尚不清楚。文中旨在探讨重度子痫前期(SPE)患者胎盘组织中HOXA-AS2的表达水平及其对滋养细胞上皮-间质转化(EMT)的... 目的长链非编码RNA HOXA簇反义RNA2(HOXA-AS2)在子痫前期患者胎盘组织中的表达水平及其对子痫前期病理机制的影响,目前还尚不清楚。文中旨在探讨重度子痫前期(SPE)患者胎盘组织中HOXA-AS2的表达水平及其对滋养细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法选取2017年2月至2019年4月在南华大学附属第一医院妇产科42例住院行剖宫产分娩的SPE患者。根据发病孕龄不同,将孕龄≤34孕周的SPE孕妇纳入早发型SPE组(n=19),将孕龄>34孕周的SPE孕妇纳入晚发型SPE组(n=23)。同时,选择同期行剖宫产分娩的30例正常妊娠晚期孕妇作为对照,其中14例因宫颈机能不全、胎膜早破、前置胎盘等病因而终止妊娠者作为早发型对照组,16例因胎儿窘迫、胎位异常、脐带绕颈等而终止妊娠者作为晚发型对照组。采用qRT-PCR检测各组胎盘组织中HOXA-AS2表达水平。将HOXA-AS2过表达质粒(pcDNA3.1-HOXA-AS2)及其空载质粒(Vector)转染至滋养细胞HTR-8/SVneo中,设置空白对照组(不做任何处理)、空载质粒组(转染空载质粒)和过表达组(转染pcDNA3.1-HOXA-AS2质粒)。qRT-PCR检测细胞中HOXA-AS2表达水平,CCK-8检测细胞增殖活性,Transwell检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测EMT及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果与早发型SPE组胎盘组织中HOXA-AS2表达水平比较,早发型对照组、晚发型SPE组及晚发型对照组明显增高(P<0.001)。过表达组细胞中HOXA-AS2表达水平(41.28±4.01)显著高于空白对照组(1.00±0.03)、空载质粒组(1.04±0.04),差异有统计学意义(P<0.01)。过表达组HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移能力较空白对照组、空载质粒组显著增强(P<0.05),Vimentin、N-cadherin、β-catenin、Snail1蛋白表达水平显著增加(P<0.05),而E-cadherin和p-GSK3β等蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论HOXA-AS2在早发型SPE胎盘组织中低表达,HOXA-AS2过表达可增强HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移能力,促进细胞EMT过程,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路激活有关。 展开更多
关键词 HOXA簇反义rna2 子痫前期 滋养细胞 上皮-间质转化
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HOX转录反义RNA与EZH2分子在肿瘤中的研究进展 被引量:3
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作者 郑娟 周梁 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期795-800,共6页
长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)通过影响表观遗传修饰在多种肿瘤的发生发展中起到重要作用,HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)是其中研究较为深入的一种,其在多种肿瘤中的作用已明确。很多lncRNA包括HOT... 长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)通过影响表观遗传修饰在多种肿瘤的发生发展中起到重要作用,HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)是其中研究较为深入的一种,其在多种肿瘤中的作用已明确。很多lncRNA包括HOTAIR可与多梳蛋白抑制复合物2(polycomb repress complex2,PRC2)结合,组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶EZH2是PRC2中起催化作用的关键亚基,其介导的组蛋白H3甲基化作用与多种肿瘤的发生发展密切相关,同时HOTAIR与EZH2的相互作用关系已在多种肿瘤中被研究证实。本文对HOTAIR及EZH2在不同肿瘤中的作用及二者的相互关系进行综述,并探索二者在肿瘤中的研究应用前景。 展开更多
关键词 HOX转录反义rna EZH2 肿瘤
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LncRNA LBX2-AS1调节miR-873-5p/G6PD轴对胃癌细胞增殖迁移和侵袭的影响
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作者 王甜甜 温媛 +3 位作者 郭影 叶美红 李振 师振 《河北医学》 CAS 2024年第9期1488-1495,共8页
目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)瓢虫同源盒2反义RNA1(LBX2-AS1)调节微小RNA-873-5p(miR-873-5p)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)轴对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:以SGC7901细胞为研究对象,将其随机分为Control组、sh-NC组、s... 目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)瓢虫同源盒2反义RNA1(LBX2-AS1)调节微小RNA-873-5p(miR-873-5p)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)轴对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:以SGC7901细胞为研究对象,将其随机分为Control组、sh-NC组、sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组、sh-LBX2-AS1+miR-873-5p inhibitor组;qRT-PCR法检测LncRNA LBX2-AS1、miR-873-5p、G6PD的表达;MTT法和平板克隆实验检测SGC7901细胞增殖;划痕实验检测SGC7901细胞迁移;Transwell实验检测SGC7901细胞的侵袭;Western blot检测SGC7901细胞中MMP-2、PCNA、MMP-9、G6PD蛋白表达;荧光素酶报告基因实验检测LncRNA LBX2-AS1与miR-873-5p,miR-873-5p与G6PD之间的相互作用;小鼠荷瘤实验验证敲除LncRNALBX2-AS1对CC肿瘤生长及G6PD表达的影响。结果:sh-LBX2-AS1组SGC7901细胞中A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、LncRNA LBX2-AS1、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达低于sh-NC组、Control组,miR-873-5p表达高于sh-NC组、Control组(P<0.05);与sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组相比,sh-LBX2-AS+miR-873-5p inhibitor组miR-873-5p表达降低,A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.05)。LncRNA LBX2-AS1靶向负调控miR-873-5p,miR-873-5p靶向负调控G6PD。实验组移植瘤质量、体积、Ki-67阳性率、G6PD阳性率低于对照组(P<0.05)。结论:敲除LncRNA LBX2-AS1可能抑制GC细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能是调节miR-873-5p/G6PD轴实现的。 展开更多
关键词 长链非编码rna 瓢虫同源盒2反义rna1 微小rna-873-5p 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD) 胃癌 增殖 迁移 侵袭
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咪达唑仑通过调控LncRNA NR2F2-AS1对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响
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作者 周宇 曹钦钰 刘蕾 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期1257-1260,共4页
目的 探讨咪达唑仑对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响及其可能作用机制。方法 体外培养人肾癌细胞786-O,随机分组:咪达唑仑0、20、40、60μmol/L组、si-NC组、si-核受体亚家族2组F成员反义RNA(NR2F2-AS)1组、咪达唑仑+pcDNA组、咪... 目的 探讨咪达唑仑对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响及其可能作用机制。方法 体外培养人肾癌细胞786-O,随机分组:咪达唑仑0、20、40、60μmol/L组、si-NC组、si-核受体亚家族2组F成员反义RNA(NR2F2-AS)1组、咪达唑仑+pcDNA组、咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组;CCK-8法、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡及迁移;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA NR2F2-AS1表达量;Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关蛋白(Bax)表达量。结果 与咪达唑仑0μmol/L组比较,咪达唑仑20、40、60μmol/L组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显升高,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显降低,长链非编码(Lnc)RNA NR2F2-AS1表达量明显降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);转染si-NR2F2-AS1可明显抑制细胞增殖及迁移,并可明显提高细胞凋亡率(P<0.05);与咪达唑仑+pcDNA组比较,咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显降低,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论 咪达唑仑可通过抑制LncRNA NR2F2-AS1表达而减弱肾癌细胞增殖及迁移能力,并可诱导肾癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 肾癌 咪达唑仑 Lncrna核受体亚家族2组F成员反义rna(NR2F2-AS)1 细胞增殖 凋亡 迁移
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人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及克隆鉴定 被引量:1
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作者 金美芳 刘可人 +3 位作者 周嘉梁 郭向红 潘浩 吴士良 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2005年第2期100-103,106,共5页
目的:研究反义封闭ppGalNAc-T2基因表达对胃癌细胞GC7901细胞增殖以及肿瘤细胞生物学行为的影响,构建反义表达载体并转染胃癌细胞GC7901。方法:在对几种肿瘤细胞的ppGalNAc-T2基因的表达水平分析后,以高表达ppGalNAc-T2的人胃癌细胞GC7... 目的:研究反义封闭ppGalNAc-T2基因表达对胃癌细胞GC7901细胞增殖以及肿瘤细胞生物学行为的影响,构建反义表达载体并转染胃癌细胞GC7901。方法:在对几种肿瘤细胞的ppGalNAc-T2基因的表达水平分析后,以高表达ppGalNAc-T2的人胃癌细胞GC7901的总RNA为模板,利用RTPCR方法扩增两段不同长度ppGalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体并转染胃癌细胞GC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞GC7901细胞ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆。通过荧光显微镜、RT-PCR技术手段检测封闭反义ppGalNAc-T2基因RNA表达。结果:ppGalNAc-T2反义表达质粒载体pEGFP-FDT2和pEGFPFX-T2经限制性酶切及部分序列分析证明基因已正确插入载体中,荧光显微镜及RTPCR显示转染成功。结论:成功构建了ppGalNAc-T2反义表达质粒载体,反义封闭ppGalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞GC7901ppGalNAc-T2的含量明显降低,为进一步研究ppGalNAc-T2奠定了基础。 展开更多
关键词 反义rna表达质粒 ppGalNAc-T2 半乳糖转移酶 克隆鉴定 乙酰氨基 肿瘤细胞生物学行为 RT-PCR方法 反义表达载体 荧光显微镜 多肽 基因表达 质粒载体 人胃癌细胞 限制性酶切 细胞增殖 rna 基因片段 细胞克隆 技术手段 序列分析
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鼠白细胞介素-2受体α、β链基因反义RNA真核表达质粒的构建 被引量:1
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作者 何承伟 梁念慈 +3 位作者 朱振宇 何晓顺 黄洁夫 马涧泉 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第2期113-116,共4页
【目的】构建鼠IL 2Rα与β链基因的反义RNA真核表达质粒 ,为反义RNA基因治疗细胞免疫相关疾病作准备。【方法】用限制性内切酶从克隆载体上切下鼠IL 2Rα与β链cDNA及鼠IL 2启动子 ,克隆入真核表达质粒 pcDNA3的多克隆位点上 ,用酶切或... 【目的】构建鼠IL 2Rα与β链基因的反义RNA真核表达质粒 ,为反义RNA基因治疗细胞免疫相关疾病作准备。【方法】用限制性内切酶从克隆载体上切下鼠IL 2Rα与β链cDNA及鼠IL 2启动子 ,克隆入真核表达质粒 pcDNA3的多克隆位点上 ,用酶切或PCR法鉴定正反连接。【结果】得到 4个反向连接的重组质粒 :pcAnti mIL 2Rα ,pcAnti mIL 2Rβ,pcAnti mIL 2Rαβ及pciAnti mIL 2Rαβ。前三者由CMV强启动子指导鼠IL 2R基因反义RNA的表达 ,后者由CMV启动子与鼠IL 2靶向可诱导型启动子组成的融合启动子指导反义RNA的表达。【结论】成功构建了 4个不同类型的鼠IL 2R基因反义RNA真核表达质粒。 展开更多
关键词 白细胞介素2 受体 反义rna 真核表达质粒
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体外导入IL-2R反义RNA表达质粒对小鼠脾细胞活化增殖的影响
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作者 何承伟 梁念慈 +3 位作者 朱振宇 何晓顺 黄洁夫 马涧泉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期139-143,共5页
目的 观察导入白细胞介素 2受体 (IL 2R)反义RNA真核表达质粒对体外培养的小鼠脾细胞活化增殖的影响及其机制的探讨。方法 用粘附辅助脂质体法把IL 2R反义RNA真核表达质粒转染脾细胞 ,用丝裂原刺激脾细胞活化增殖 ,MTT法检测细胞生长... 目的 观察导入白细胞介素 2受体 (IL 2R)反义RNA真核表达质粒对体外培养的小鼠脾细胞活化增殖的影响及其机制的探讨。方法 用粘附辅助脂质体法把IL 2R反义RNA真核表达质粒转染脾细胞 ,用丝裂原刺激脾细胞活化增殖 ,MTT法检测细胞生长情况。狭线杂交法检测IL 2RmRNA的表达水平 ,流式细胞仪检测IL 2R的蛋白表达水平。结果 转染各重组质粒后 ,脾细胞的生长增殖受到明显抑制 ,且 pcAnti mIL 2Rαβ与 pciAnti mIL 2Rαβ组抑制率较 pcAnti mIL 2Rα及pcAnti mIL 2Rβ组的大 ,pcAnti mIL 2Rα组抑制率较pcAnti mIL 2Rβ的大。转染各重组质粒对NIH3T3细胞生长增殖无影响。转染各重组质粒后IL 2RmRNA及蛋白表达水平明显降低。结论 IL 2R反义RNA能有效抑制体外培养的小鼠脾细胞的生长 ,IL 2Rαβ融合基因反义RNA较α、β单基因反义RNA的抑制率高 ,IL 2Rα反义RNA较 β反义RNA抑制率高。初步推断 ,IL 2R反义RNA抑制细胞生长的作用是特异的 ,只针对功能性表达IL 2R的细胞。反义RNA封闭IL 展开更多
关键词 白细胞介素2 受体 rna 反义 脾细胞 增殖
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用bcl-2反义mRNA和dsRNA抑制SP_2/O生长的比较研究
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作者 唐恩洁 任碧轩 +5 位作者 冯莉 杜冰 王朝莉 巫幸福 杨健 李仁 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2005年第1期52-55,共4页
目的 本研究旨在比较靶向bcl- 2基因的反义mRNA和dsRNA对SP2 O细胞生长的抑制作用。方法 采用MTT法,免疫荧光和免疫细胞化学技术,克隆形成试验及分光光度计测定细胞总蛋白含量等方法,分析比较了经体外转录获得的bcl- 2反义mRNA利Lds... 目的 本研究旨在比较靶向bcl- 2基因的反义mRNA和dsRNA对SP2 O细胞生长的抑制作用。方法 采用MTT法,免疫荧光和免疫细胞化学技术,克隆形成试验及分光光度计测定细胞总蛋白含量等方法,分析比较了经体外转录获得的bcl- 2反义mRNA利LdsRNA抑制SP2 O细胞生长、bcl- 2特异性蛋白和总蛋白表达及其克隆原性的作用。结果 检测结果证实bcl- 2反义mRNA和dsRNA对上述指标均有抑制作用,两者比较dsRNA的抑制作用更强,持续时间也较长,作为对照的bcl- 2正义RNA对上述指标无显著增强作用。提示LdsRNA对bcl- 2高表达的肿瘤细胞有更强的抑制和杀伤作用,因此有可能用于这些肿瘤的临床治疗。 展开更多
关键词 BCL-2 反义 rna 抑制作用 肿瘤 细胞生长 靶向 克隆 细胞总蛋白 体外转录
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EGFR反义RNA的转染对人类鼻咽癌CNE-2细胞EGFR的表达下调及恶性表型的抑制(英文)
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作者 邓凡 王瑜 +5 位作者 曾方银 邹志鹏 白晓春 陆地 柯志勇 罗深秋 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第9期877-881,共5页
目的利用反义RNA 抑制靶基因表达的策略,下调EGFR的表达而探讨对人类低分化鼻咽癌CNE-2细胞的恶性表型的抑制性效应。方法将人EGFR的N-端1.35kb片段反向构建入逆转录病毒表达载体pLXSN中,并用脂质体介导转染人鼻咽癌CNE-2细胞,G418筛选... 目的利用反义RNA 抑制靶基因表达的策略,下调EGFR的表达而探讨对人类低分化鼻咽癌CNE-2细胞的恶性表型的抑制性效应。方法将人EGFR的N-端1.35kb片段反向构建入逆转录病毒表达载体pLXSN中,并用脂质体介导转染人鼻咽癌CNE-2细胞,G418筛选并分离阳性克隆,将两个EGFR 反义cDNA转染的克隆细胞命名为CNE-2/AS4 和CNE-2/AS8,而空载体转染的细胞命名为CNE-2/pLXSN。125I-EGF配体结合分析细胞膜上EGFR的表达,台盼蓝染色法测定细胞生长的改变,并用软琼脂集落形成实验检测细胞转化,最后,将筛选的各组阳性克隆细胞分别注射入裸鼠皮下,不同时间观察肿瘤生长的抑制改变及肿瘤的转移状况。结果配体结合实验结果显示,两个选择的克隆CNE-2/AS4 和CNE-2/AS8细胞表面EGFR的数量分别较未转染细胞CNE-2下降18%、45%,表明EGFR反义RNA的表达下调了细胞膜上EGFR的表达;同时,EGFR反义RNA表达的CNE-2细胞生长速率和软琼脂生长能力也较对照组细胞明显降低。注射入裸鼠皮下后,EGFR反义RNA表达的阳性克隆细胞表现出肿瘤生长减慢,淋巴结和肺转移能力也明显降低。结论这些实验结果提示EGFR 反义cDNA转染的CNE-2细胞能下调EGFR的过量表达并部分抑制鼻咽癌的恶性表型,这为进一步阐明EGFR在鼻咽癌的发生。 展开更多
关键词 鼻咽癌 CNE-2细胞 EGFR 反义rna 基因表达 表皮生长因子受体
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逆转录病毒载体介导的bcl-2反义RNA促进胃癌MGC-803细胞凋亡
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作者 曹国栋 王申五 +2 位作者 武莎莎 马丽萍 潘秀英 《北京医科大学学报》 CSCD 1999年第2期187-187,共1页
bcl-2是Tsujimoto在Ⅱ型B细胞淋巴瘤中发现的一种基因,其过度表达能抑制撤退生长因子、射线、热休克、化疗药物、病毒及促凋亡基因等多种因素诱导的细胞凋亡。bcl-2蛋白高表达赋予肿瘤细胞对多种化疗药物的抗性,... bcl-2是Tsujimoto在Ⅱ型B细胞淋巴瘤中发现的一种基因,其过度表达能抑制撤退生长因子、射线、热休克、化疗药物、病毒及促凋亡基因等多种因素诱导的细胞凋亡。bcl-2蛋白高表达赋予肿瘤细胞对多种化疗药物的抗性,导致化疗失败或复发。逆转bcl-2的表达可能提高化疗效果。我们将bcl-2的编码序列反向插入逆转录病毒表达载体中并转导实体瘤胃癌细胞株MGC~803,观察bcl-2反义序列对实体瘤肿瘤细胞的作用。1方法 重组体的构建、包装及转导:bcl-2 cDNA全长 1.9 kb(由王洛权博士提供),插入逆转录病毒表达载体pLXSN中,PCR法鉴定bcl-2的插入方向。 展开更多
关键词 胃肿瘤 MGC-803 细胞凋亡 BCL-2 反义rna
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