PF-4708671和NVP-BEZ235联合用药协同抑制MDA-MB-436和A549细胞增殖

目的研究p70核糖体S6激酶β-1(S6K1)抑制剂PF-4708671激活蛋白激酶B(AKT)的分子机制,以及其联合磷脂酰肌醇-3-激酶/哺乳动物西罗莫司(雷帕毒素)靶蛋白抑制剂NVP-BEZ235对肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法 PF-4708671单独处理人乳腺癌MDA-MB-436和肺癌A549细胞0,1,3,6,12和24 h或与西罗莫司联合处理24 h后,Western蛋白印迹法检测p-S6及p-AKT表达水平;敲低肿瘤细胞中S6K1基因,并用PF-4708671处理野生型和突变型细胞,Western蛋白印迹法检测S6K1及p-AKT473表达水平;PF-4708671和NVP-BEZ235单用及联用于肿瘤细胞,Western蛋白印迹法检测p-S6及p-AKT473的表达水平,同时分别采用平板克隆和CCK8法检测肿瘤细胞增殖和存活。结果 PF-4708671处理肿瘤细胞不同时间后,在抑制S6K1活性的同时增强AKT活性(P<0.01);西罗莫司和PF-4708671都能抑制S6K1活性(P<0.01)并激活AKT,并在联用时进一步增强AKT活性;敲低S6K1基因导致AKT活性增强;PF-4708671处理敲低S6K1基因的突变型细胞,相对于野生型细胞,对AKT活性的激活程度显著减弱(P<0.01);PF-4708671和NVP-BEZ235联用能抑制AKT活性(P<0.01),同时显著降低肿瘤细胞的克隆形成率和增殖活性(P<0.01)。结论 PF-4708671通过抑制S6K1活性反馈激活AKT,这可能是导致其对肿瘤细胞增殖抑制作用减弱的原因之一;PF-4708671和NVP-BEZ235联用对肿瘤细胞生长和增殖的抑制作用明显增强。

NVP-HEMA-KH570共聚水凝胶对含水量影响因素的探究

以N-乙烯基吡咯烷酮(NVP)、甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)以及γ-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(KH570)为聚合单体,N,N'-亚甲基双丙烯酰胺(NMBA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,采用本体聚合的方法制备硅氧烷水凝胶接触镜材料,并讨论了不同单体配比、温度等影响因素对角膜接触镜材料含水量的影响.

露蜂房蛋白抑制大鼠支气管平滑肌细胞体外增殖的可能机制

目的观察露蜂房蛋白[NVP(1)]对大鼠支气管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法用原代细胞培养、MTT法、流式细胞术和免疫印迹法检测细胞增殖。结果6.4×10-3g/L的NVP(1)明显抑制支气管平滑肌细胞增殖,并且阻断在细胞周期的G1期(对照组G1期为64.6%,NVP(1)处理组为90.5%)。NVP(1)能增强细胞周期蛋白激酶抑制剂(P21)蛋白的表达,降低细胞周期蛋白激酶(cdk2)蛋白的表达。结论NVP(1)阻断支气管平滑肌细胞增殖于细胞周期的G1期。

IGF信号轴在卵巢癌干细胞样细胞增殖状态转换及预防卵巢癌复发中的作用

目的:探究胰岛素样生长因子(IGF)信号轴在促进卵巢癌干细胞样细胞增殖和抗凋亡中的作用,探讨基于IGF信号轴的IGF-1R抑制剂的靶向治疗和寻求降低卵巢癌化疗后复发的可能途径。方法:采用CD117+CD44+A2780卵巢癌细胞株,使用免疫细胞化学的方法检测IGF信号轴中IGF-1、IGF-2和IGF-1R在CD117+CD44+A2780细胞中的表达;利用MTT法检测IGF-1对CD117+CD44+A2780细胞的促增殖活性,配制IGF-1的质量浓度分别为10、25、40、55 ng·ml-1,另设空白对照,从中筛选出加入外源IGF-1的适宜质量浓度用于后续实验中;再将实验分为3组,即IGF-1刺激组、NVP抑制组和空白组。通过流式细胞术检测3组细胞在药物处理48 h后的细胞周期分布和凋亡率情况。结果:IGF信号轴组件IGF-1、IGF-2和IGF-1R均表达在CD117+CD44+A2780细胞的细胞膜上和细胞质中;MTT检测发现当外源IGF-1质量浓度为40 ng·ml-1时对CD117+CD44+A2780细胞的促分裂增殖作用最明显;IGF-1刺激组较空白组增殖明显活跃,凋亡率降低(P<0.05);NVP抑制组较空白组增殖明显减少,凋亡率增高(P<0.05)。结论:IGF信号轴与卵巢癌化疗后的复发密切相关,IGF-1在卵巢癌干细胞样细胞转换增殖状态和对抗凋亡中发挥着重要作用;NVP阻断IGF-1R的作用可有效抑制卵巢癌干细胞样细胞从休眠状态启动分裂增殖;IGF信号轴组件可作为卵巢癌治疗及化疗后预防复发的靶点。

1型胰岛素样生长因子受体在髓母细胞瘤细胞增殖中的作用

目的研究1型胰岛素样生长因子受体（IGF-1R）在髓母细胞瘤中的表达及其对细胞增殖的作用。方法荧光定量PCR检测髓母细胞瘤肿瘤标本IGF-1R表达，CCK-8法测定IGF-1R特异性阻断剂NVP—ADW742对髓母细胞瘤Doay细胞增殖抑制作用，并检测其对细胞凋亡的影响，Western blot免疫印迹法检测了AKT磷酸化蛋白表达变化。结果髓母细胞瘤肿瘤标本中的IGF-1RmRNA的相对含量明显高于低级别星形胶质瘤；NVP-ADW742能通过诱导细胞凋亡抑制Doay细胞的增殖，NVP-ADW742主要是通过下调AKT磷酸化蛋白表达而起作用。结论IGF-1R在髓母细胞瘤的细胞增殖中起着重要作用。