绵羊NYD-SP27基因在BHK-21细胞中的稳定表达及其特征鉴定

旨在构建稳定表达绵羊NYD-SP27基因的BHK-21细胞株,对NYD-SP27基因的表达特征进行分析,为进一步研究NYD-SP27基因功能奠定基础。本研究克隆绵羊NYD-SP27基因,并将其插入到真核表达载体pDsRed1-C1中,利用猪捷申病毒2A肽(P2A)将NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白连接以实现共表达,将重组质粒pDsRed-P2A-Flag-NYDSP转染至BHK-21细胞中,经G418筛选获得稳定转基因细胞株,利用RT-PCR、间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot对NYD-SP27基因的表达进行鉴定。结果表明,NYD-SP27基因稳定整合至宿主细胞基因组;NYD-SP27蛋白能够在BHK-21细胞中正常表达,分子大小约为63ku;在NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白翻译过程中,P2A成功自我剪切。本研究成功构建了绵羊NYD-SP27基因的真核表达载体,建立了稳定表达绵羊NYD-SP27基因的BHK-21细胞系。

绵羊NYD-SP27基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定

构建并筛选针对干扰绵羊NYD-SP27基因的shRNA慢病毒载体。使用RNAi Target Sequence Selector软件设计并合成针对绵羊NYD-SP27基因的4条shRNA表达序列(shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4)及1条阴性对照序列(NC),分别将其连接到载体pLentiLox3.7(PLL3.7)中,得到4个shRNA干扰载体NYDSP27-shRNA及1条阴性对照载体NC-shRNA,同时将构建好的干扰载体及辅助质粒瞬时共转染至HEK-293FT细胞中,收集病毒液纯化后感染SP27-21细胞,48h后用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NYD-SP27相对表达量,将干扰效果最好的载体用于进一步的研究中。结果表明,构建了重组慢病毒干扰载体,并成功包装成干扰慢病毒NYDSP27-shRNA-LV以及用来感染BHK-SP27-21细胞,48h后用实时定量PCR筛选出高效干扰绵羊NYD-SP27的片段NYDSP27-shRNA-1。为进一步研究NYD-SP27基因表达下调对绵羊精子发育的影响奠定了基础。

新疆哈萨克羊NYD-SP27基因的克隆及序列分析

本研究通过新疆哈萨克羊NYD-SP27基因的克隆及序列分析,为研究绵羊NYD-SP27表达调控机制奠定基础。根据Genbank中公布的人类的NYD-SP27基因序列设计引物,本研究以新疆哈萨克羊的睾丸组织的总DNA为模板,采用RT-PCR扩增方法对绵羊NYD-SP27基因序列进行研究。结果显示:哈萨克羊NYD-SP27基因全长为1901 bp,其中只含有1617 bp组成的开放阅读框(ORF),共编码538个氨基酸;相对分子质量61995.66,理论PI值为6.16,正电荷残基数(Arg+Lys)为61,负电荷残基数(Asp+Glu)为67;分子式C2798H4319N737O819S19;体外半衰期为30 h,不稳定系数46.96(不稳定);总平均吸水性-0.403。结论:哈萨克羊NYD-SP27基因属于PLCζ家族;同时将所得序列已提交到Gene Bank(登录号:KX905090)。

绵羊NYD-SP27基因的原核表达及生物信息学分析

本研究旨在对绵羊NYD-SP 27基因进行克隆和原核表达,并对其表达的蛋白进行生物信息学分析。根据GenBank中绵羊NYD-SP 27基因序列(登录号:KX905090)设计1对特异性引物,通过PCR方法扩增目的基因片段,构建pET-22b(+)-NYDSP27重组质粒并转化E.coli DH5α感受态细胞,提质粒进行双酶切鉴定,将鉴定正确的pET-22b(+)-NYDSP27重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,对融合蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定,并利用生物信息学方法对NYD-SP 27基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,试验成功扩增出大小为1617 bp的NYD-SP 27基因片段,并经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切获得大小为5400和1617 bp的两条片段,表明成功构建了pET-22b(+)-NYDSP27重组质粒,诱导表达重组蛋白大小约60 ku,主要以包涵体的形式存在。NYD-SP27蛋白分子式为C 2798 H 4319 N 737 O 819 S 19,原子总数为6892,理论等电点(pI)为6.16,为酸性蛋白,不稳定系数为46.96,属于不稳定蛋白,总平均亲水性为-0.403。该蛋白无跨膜结构,无信号肽,含有45个潜在的磷酸化位点和24个抗原表位;NYD-SP27蛋白二级结构中的α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲分别占26.21%、3.90%、18.03%和51.86%。本试验结果可为深入研究绵羊NYD-SP27蛋白的作用机理提供理论依据。

绵羊NYD-SP27基因对卵母细胞体外发育的影响

为探究绵羊精子提取物NYD-SP27影响绵羊早期胚胎体外发育的分子机理,研究其是否可以作为一种新型的卵母细胞激活物质,为进一步揭示哺乳动物早期胚胎发育的分子机制提供理论基础。分别将pEGFP-N1-NYD-SP27重组质粒,pEGFP-N1显微注射到MⅡ绵羊卵母细胞中,在显微镜下观察绵羊卵母细胞体外发育的情况,统计发育率。结果显示,注射pEGFP-N1-NYD-SP27组出现卵裂情况并可继续发育到桑葚胚,然而注射pEGFP-N1组发育停滞。表明NYD-SP27基因可以促使绵羊卵母细胞在体外发育。

棉花独脚金内酯D27基因表达与功能分析

为探究D27基因在棉花纤维及植株发育过程中的生物学功能,本研究通过生物信息学方法鉴定得到棉属中18个D27基因成员,分析其理化性质、结构及进化关系,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术探究了海岛棉纤维中6个GbD27基因的表达特异性,通过同源重组的方法获得了6个陆地棉GhD27基因,构建GhD27基因的病毒诱导的基因沉默(VIGS)载体并转化至棉花,使用qRT-PCR技术检测其沉默效率及独脚金内酯(SLs)处理下的表达模式,并借助酶联免疫吸附(ELISA)技术测定了沉默植株的内源独脚金内酯含量。结果显示,棉花D27基因家族的开放阅读框(ORF)长度为726~816 bp,编码的D27蛋白含241~271个氨基酸;D27蛋白主要由α-螺旋与无规卷曲构成;进化分析结果显示D27基因高度同源。海岛棉材料新海21的GbD27基因在0~35 d的棉纤维中均存在表达,可能对棉纤维发育存在重要调节作用。陆地棉材料新农大棉4号的GhD27基因在叶片和根部均得到有效沉默,表明已获得GhD27基因沉默植株。在陆地棉GhD27基因的沉默植株中,GhD27基因对独脚金内酯处理均有不同程度的响应,内源性独脚金内酯含量与GhD27基因的表达水平有一定关联。本研究为进一步了解棉花D27基因的分子生物学功能奠定了基础。

miR-23a/27a/24基因簇g.65307469G>A突变对大白猪产仔数和启动子活性的影响

[目的]本文旨在研究大白猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点多态性与产仔数性状的关系及潜在机制,为母猪繁殖性状的分子育种提供新的潜在遗传标记。[方法]利用混池测序技术筛选猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点,直接测序法对大白猪群体(n=345)miR-23a/27a/24基因簇突变位点进行基因分型,计算遗传多样性;用线性模型对突变位点多态性与产仔数性状进行关联性分析;构建不同等位基因类型启动子载体,转染猪卵巢颗粒细胞,通过检测荧光素酶活性分析突变对启动子活性的影响;用生物信息学方法预测不同等位基因类型启动子潜在结合的差异转录因子,用荧光素酶活性分析差异转录因子对不同等位基因类型启动子活性的影响。[结果]在猪miR-23a/27a/24基因簇启动子-648 nt(Chr.2,65307469 nt)处发现1个新的G/A突变,命名为g.65307469G>A。在大白猪群体中发现3种基因型(GG、GA和AA),其中GG为优势基因型(89.57%),G等位基因为优势等位基因(94.64%)。关联性分析发现,GA基因型母猪的总产仔数(TNB)比GG基因型母猪每胎高0.56头(P<0.05)。荧光素酶活性分析结果显示G等位基因类型启动子活性显著高于A等位基因类型(P<0.05)。在不同等位基因类型启动子间发现1个潜在结合的差异转录因子死亡相关蛋白1(THAP1),成功构建猪THAP1基因过表达载体,共转试验结果显示转录因子THAP1对不同等位基因类型启动子活性均无显著影响(P>0.05)。[结论]miR-23a、miR-27a和miR-24是大白猪产仔数性状的候选基因,g.65307469G>A突变抑制miR-23a/27a/24基因簇的启动子活性,但与转录因子THAP1无关。

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22调控微小RNA-27b-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)22调控微小RNA(miR)-27b-3p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法收集52例OSCC患者的癌组织及癌旁组织标本,体外培养人正常口腔角质细胞HOK和3种人OSCC细胞(CAL-27、SCC-25和HSC-3),实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测癌组织、癌旁组织、HOK细胞和3种OSCC细胞中SNHG22、miR-27b-3p表达情况。对SCC-25细胞进行转染并将其分为Ctrl组(未进行转染)、si-SNHG22组、si-NC组、miR-27b-3p inhibitor组、inhibitor-NC组、si-SNHG22+inhibitor-NC组和si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组,检测各组SCC-25细胞增殖情况[细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测增殖率、流式细胞术检测增殖指数(PI)];Transwell实验检测各组SCC-25细胞侵袭情况;划痕愈合实验检测各组SCC-25细胞迁移情况;双荧光素酶实验验证SNHG22与miR-27b-3p的靶向作用关系。结果与癌旁组织比较,OSCC癌组织中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低(P<0.05);与HOK细胞比较,CAL-27、SCC-25和HSC-3细胞中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低,且SCC-25细胞中SNHG22与miR-27b-3p的表达与HOK细胞差异最大(P<0.05)。与Ctrl组比较,si-SNHG22组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著减少(P<0.05),miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05);与si-SNHG22组比较,si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05)。双荧光素酶实验显示SNHG22与miR-27b-3p存在靶向作用关系。结论SNHG22在OSSC中高表达,miR-27b-3p在OSSC中低表达,SNHG22可能通过海绵化miR-27b-3p促进SCC-25细胞增殖、侵袭和迁移,SNHG22/miR-27b-3p轴可能是OSCC一个新的诊断和治疗靶点。

马氏珠母贝TNFR27基因克隆与功能初探

为了探究肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)基因在马氏珠母贝中的免疫应答机制,本实验采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了马氏珠母贝TNFR27(PmTNFR27)基因cDNA全长并进行生物信息学分析,运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了马氏珠母贝在脂多糖(LPS)、聚肌胞苷酸[Poly(I:C)]及镉胁迫后,PmTNFR27 mRNA在其不同组织中的表达模式。结果显示,PmTNFR27 cDNA全长为1524 bp,5′UTR长为186 bp,3′UTR长为248 bp,包含28 bp的poly(A)尾巴,开放阅读框(ORF)为1062 bp,编码353个氨基酸;结构域预测表明PmTNFR27具有一个典型的CRD结构域和一个跨膜蛋白结构域,符合肿瘤坏死因子受体超家族特征;多序列比对结果显示,贝类种间的相似性不高,但功能结构域位置较保守。系统进化树结果显示,马氏珠母贝与其他贝类聚为一支。qRT-PCR结果显示,PmTNFR27 mRNA在马氏珠母贝各组织中均有表达,在鳃中相对表达量最高。LPS刺激后,PmTNFR27基因在鰓中的相对表达量于3 h显著上升并达到最高值,于72 h降到最低值,最高值约为最低值的9.67倍;Poly(I:C)刺激后,PmTNFR27基因在鰓中的相对表达量在6、12 h显著上升并达到最高值,至96 h时降到最低值,最高值约为最低值的13.16倍。镉胁迫后,3 h相对表达量达到最高,24、48 h相对表达量显著下降。研究表明,PmTNFR27可能参与了马氏珠母贝的免疫应答反应。本研究可为进一步探究TNFR在贝类中的生物学功能提供重要的理论基础和参考价值。

甜瓜果形基因CmSUN25-26-27a的鉴定和分子标记

【目的】挖掘甜瓜果形相关基因,为甜瓜果实形状的遗传改良提供理论基础。【方法】通过全基因组鉴定,系统发育分析,结合表达量与果形的关联分析来鉴定参与甜瓜果形调控的CmSUN基因,并利用候选基因在自然群体中的序列变异开发相关分子标记。【结果】通过全基因组鉴定及系统发育分析,鉴定到甜瓜CmSUN家族的CmSUN25-26-27a基因。该基因在开花当天的雌花中有显著的表达,并且在不同果形甜瓜中的表达量与果形指数(fruit shape index,FSI)呈正相关关系;对200份自然群体的序列分析发现,CmSUN25-26-27a基因编码区存在一个SNP-Single Nucleotide Polymorphism(A/G),导致了编码氨基酸的非同义突变,含有CmSUN25-26-27a^(A)等位基因的厚皮甜瓜的FSI显著高于含CmSUN25-26-27a^(G)等位基因的厚皮种质。该SNP位点将厚皮甜瓜按果形大致分为FSI>1.5(A)和FSI<1.5(G)两种类型。根据该SNP位点设计了用于区分甜瓜果形的dCAPS标记。【结论】CmSUN25-26-27a同源基因广泛参与葫芦科作物的果形调控,该基因在甜瓜中的表达量及序列变异与甜瓜FSI具有显著相关性。

牛支原体重组融合膜蛋白基因M27-498原核表达载体的构建

为构建牛支原体融合膜蛋白原核表达载体,使用SOE-PCR技术融合M27、M498基因并扩增融合基因M27-498,利用基因克隆技术构建pMD19-T-M27-498双基因克隆载体,通过亚克隆技术将融合基因M27-498克隆至表达载体pColdⅠ,构建pColdⅠ-M27-498原核表达载体。结果:SOE-PCR产物的电泳条带约1167 bp,与融合基因M27-498片段相符;经PCR、双酶切、测序鉴定,重组质粒pMD19-T-M27-498、pColdⅠ-M27-498的DNA均包含融合基因M27-498。结论:pColdⅠ-M27-498原核表达载体构建成功,可为牛支原体亚单位疫苗的研发奠定基础。

绵羊NYD-SP27基因真核表达载体的构建及表达

为了构建绵羊NYD-SP27基因重组真核表达载体,进一步研究该基因的功能,试验根据GenBank中公布的绵羊NYD-SP27基因序列设计引物,克隆绵羊NYD-SP27基因,将其连接至真核表达载体pmcherry-n1中,在目的基因和红色荧光蛋白之间通过猪捷申病毒2A肽（P2A）连接以实现共表达,将重组质粒pmcherry-Flag-NYDSP-P2A转染至HEK-293FT细胞中,48 h后通过荧光显微镜可观察红色荧光,构建NYD-SP27真核表达载体成功。结果表明：重组质粒pmcherry-Flag-NYDSPP2A在HEK-293FT细胞中得以表达;P2A在NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白翻译过程中已起到自我剪切的作用。

NYD-SP27基因对绵羊精子质量及精子中cAMP信号通路的影响

为了研究睾丸发育特异性蛋白-27基因(testis development specific protein gene 27,NYD-SP27)基因对绵羊精子活率、畸形率及精子内cAMP信号通路中酶类表达量影响,分别将NYD-SP27基因的过表达载体、干扰载体质粒注射到绵羊的睾丸中,通过电刺激采精法采集绵羊精液,对绵羊精子进行染色,检测其活率、畸形率,并通过ELISA方法检测精子中cAMP信号通路中相关酶类的表达量。结果显示:与对照组相比,过表达组精子活率变化不明显,而干扰组有较明显的升高,精子畸形率差异不明显;与过表达组、干扰组绵羊精子中环磷酸腺苷酸的表达量差异极显著(P<0.01);与过表达组绵羊精子中PKA的表达量差异不显著(P>0.05),而干扰组显著升高(P<0.05)。综上所述,干扰NYD-SP27基因对精子中环磷酸腺苷酸和PKA的表达具有调控作用,并对绵羊精子活率具有一定的提高效果。本研究为进一步研究NYD-SP27基因调控绵羊精子发生及获能的分子机制奠定基础。

白细胞介素-27、腺苷脱氢酶、基因检测、结核杆菌培养对结核性胸腔积液的诊断意义研究

目的研究白细胞介素-27(IL-27)、腺苷脱氢酶(ADA)、基因检测以及结核杆菌(MTB)培养用于结核性胸腔积液(TPE)诊断中的意义。方法选取本院收治的TPE患者总共90例为TPE组,另选取同时间段内本院收治的非TPE患者总共98例为非TPE组,两组均开展IL-27、ADA、基因检测和MTB培养,比较两组胸水IL-27、ADA水平和Genexpert MTB/MIF、MTB培养阳性率差异,并观察IL-27、ADA、Genexpert MTB/MIF、MTB培养单项或者联合检测对TPE的检出率。结果TPE组胸水内的IL-27、ADA水平和Genexpert MTB/MIF、MTB培养阳性率均高于非TPE组(P<0.05)。联合IL-27、ADA、Genexpert MTB/MIF、MTB培养对TPE的检出率高于单项检测(P<0.05)。结论IL-27、ADA、基因检测以及MTB培养能协助临床鉴别诊断TPE,且联合几项检测方法能提升对TPE的检出率,值得推广应用到临床。

GPR27基因在卵巢癌组织中的表达及其与肿瘤免疫浸润及患者预后的相关性

目的应用生物信息学方法探讨GPR27基因在卵巢癌组织中的表达,并分析其与肿瘤免疫浸润及患者预后的关系。方法在人类蛋白质图谱数据库(human protein atlas,HPA)、基因表达谱交互分析数据库(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA)中检索GPR27在卵巢癌中的表达情况;收集2011年1月至2016年12月在山西白求恩医院治疗的卵巢癌患者150例及因子宫平滑肌瘤进行全子宫+双侧附件切除的患者23例,采用免疫组化SP法检测GPR27蛋白的表达,比较GPR27基因在卵巢癌组织与正常卵巢组织中的表达差异,并分析GPR27蛋白表达与卵巢癌患者临床病理特征之间的关系;通过χ^(2)检验、COX风险回归分析筛选影响卵巢癌患者总生存期的独立危险因素,并采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。在Kaplan-Meier plotter,GEPIA在线数据库中检索GPR27对卵巢癌患者生存期的影响。Coexpedia数据库筛选GPR27基因的共表达基因,并将其在WebGestalt中进行富集分析,了解其可能涉及的分子通路;在肿瘤免疫评估资源数据库(tumor immune estimation resource,TIMER)中分析GPR27基因在卵巢癌组织中的表达与肿瘤微环境中的6种免疫细胞的相互关系。结果GPR27基因在卵巢癌组织中呈现高表达,与正常卵巢组织中表达差异具有统计学意义(P<0.05),且GPR27的表达水平与卵巢癌FIGO分期、残留病灶是否达R0、有无腹水相关(P<0.05)。进一步COX风险回归模型分析显示,GPR27高表达是卵巢癌总生存的独立危险因素(P<0.05)。GPR27基因的共表达基因有PROK2、EIF4E3、NFE2L3、A1CF和FUT6,并富集于多种细胞基本生物学功能的通路上。利用TIMER分析得出GPR27基因与卵巢癌中中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞的浸润情况呈显著负相关(P<0.05)。结论GPR27基因在卵巢癌组织中高表达,其可能通过破坏肿瘤微环境中免疫细胞的浸润影响患者预后。

海岛棉β-胡萝卜素异构酶GbD27-6基因克隆及表达分析

【目的】研究GbD27-6基因在海岛棉分枝和侧枝生长中的影响作用,为分析GbD27基因在胞内运输作用及在纤维发育中参与表皮细胞突起研究提供参考。【方法】以海岛棉Pimas-7在15 d的纤维材料为模板,克隆独脚金内酯(SLs)合成通路中的关键基因GbD27-6,利用生物信息学分析网站分析该基因,并利用qRT-PCR技术分析其基因表达量的差异性。【结果】GbD27-6基因全长816 bp,编码271个氨基酸,蛋白分子式为C_(1335)H_(2134)N_(350)O_(389)S_(24),分子质量大约为30.08118 kDa,等电点为8.40,属于DUF4033超家族蛋白成员,且为不稳定疏水性蛋白。GbD27-6基因定位在细胞膜,GbD27-6基因在海岛棉花瓣、苞叶、花药中均有表达,其中在苞叶中表达量最高,在花瓣中表达量最低;而在不同发育时期的纤维中均有不同程度的表达,其中在纤维发育20 d的表达量最高,在10 d时表达量最低。【结论】GbD27-6基因在纤维中存在差异表达。

IL-27基因多态性与子痫前期发病风险的相关性研究

目的 探讨白细胞介素-27(IL-27)基因多态性与子痫前期(PE)发病风险的相关性。方法 选取2019年1月至2020年10月该院收治的80例PE孕妇作为PE组,另选取同期160例健康孕妇作为对照组,并与PE组进行倾向性评分匹配。比较两组孕妇基线资料及辅助检查指标、血清IL-27水平及IL-27基因多态性,分析IL-27基因多态性与PE发病风险的相关性。结果 倾向性评分匹配前,PE组年龄、体重指数(BMI)与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。经倾向性评分匹配后,两组孕妇共有46对匹配成功,匹配后两组孕妇基线资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。单因素分析结果显示,PE组血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)、sFlt-1/胎盘生长因子(PLGF)、IL-27水平、IL-27基因rs153109位点AA基因型频率高于对照组,PLGF水平、AG基因型频率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,高sFlt-1/PLGF(OR=1.036,95%CI:1.012~1.062)、高IL-27水平(OR=1.005,95%CI:1.002~1.007)是PE发生的独立危险因素(P<0.05),IL-27基因rs153109位点AA基因型频率升高(OR=11.109,95%CI:1.182~104.456)是导致PE发生的危险因素(P<0.05)。结论 IL-27水平及其基因多态性与PE发病风险显著相关,IL-27 rs153109位点突变可作为PE遗传易感性的指标。

粟酒裂殖酵母SPAC27E2.11c基因缺失对有丝分裂期微管动力学的影响

SPAC27E2.11c基因编码的是一种尚未被正式命名的粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)特异性蛋白,该蛋白定位于线粒体质膜外侧.采用活细胞成像技术,研究粟酒裂殖酵母SPAC27E2.11c基因缺失后有丝分裂不同时期微管动力学的变化情况.结果表明:SPAC27E2.11c基因缺失导致间期含5根微管束的细胞比例增加,含3根微管束的细胞比例减少,并出现含2根微管束的细胞;间期微管束长度增加,收缩速率降低,且微管束在细胞壁停留时间延长;前期“棒状”纺锤体形成减少并出现单极纺锤体;中期纺锤体伸长速率降低,伸长时间延长,提示纺锤体组装检查点被激活;后期纺锤体“拱型”断裂减少,“直线型”断裂增加,“S型”断裂消失.SPAC27E2.11c基因缺失还导致染色体不完全分离向细胞两极及染色体分离后细胞不分裂的异常情况.以上结果表明SPAC27E2.11c基因缺失导致间期微管动力学失衡,分裂期纺锤体形成和断裂缺陷及染色体分离缺陷.

关于不同HLA-B27基因亚型强直性脊柱炎患者合并心血管疾病风险的探讨

目的比较不同HLA-B27基因亚型强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者合并心血管疾病风险,进而为临床的个体化精准预防和治疗提供依据。方法选取204例HLA-B27基因阳性AS患者(其中HLA-B2704型99例,HLA-B2705型90例,HLA-B2702型4例,杂合子型11例),以及97例健康体检者,利用Kruskal-Wallis H差异性分析不同基因亚型和健康组间超敏C反应蛋白(hs-CRP)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、脂蛋白a(Lp(a))、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、同型半胱氨酸(Hcy)差异有无统计学意义。同时将所有HLA-B27基因阳性患者作为总体阳性组与健康对照组进行统计学分析,比较以上血清学指标差异有无统计学意义。结果与健康对照组相比,总体阳性组hs-CRP、Hcy、ApoB水平明显较高,ApoA1h和HDL-C水平明显较低,差异有统计学意义(P<0.05);与健康对照组相比,HLA-B2704阳性组hs-CRP、ApoB、Hcy水平明显较高,ApoA1、HDL-C水平明显较低;HLA-B2705阳性组hs-CRP、ApoA1、ApoB、Hcy水平明显较高,LDL-C水平明显较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HLA-B2704阳性组相比,HLA-B2705阳性组ApoA1、HDL-C水平明显较高,ApoB、LDL-C、Hcy水平明显较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论从血液相关指标的对比中可以得出,HLA-B27阳性AS患者患心血管疾病的风险明显增高,其中HLA-B2704亚型患者较其他亚型有更高的心血管疾病风险。

热休克蛋白27对水泡性口炎病毒体外增殖的调控作用

本研究旨在探究热休克蛋白27(heat shock protein 27, HSP27)对水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)体外增殖及VSV感染介导的维甲酸诱导基因I样受体家族(retinoid acid-inducible gene-I-like receptor, RLR)信号通路的作用及机制。利用实时荧光定量PCR、免疫印迹、免疫共沉淀、病毒滴度测定及免疫荧光等方法,首先检测VSV感染对HSP27 mRNA和蛋白表达的影响,进而验证过表达和干扰HSP27对VSV增殖的影响,进一步探究HSP27对VSV感染介导的RLR信号通路的影响,最后分析HSP27与RLR信号通路靶分子的相互作用及共定位情况。结果表明,VSV感染可促使HSP27基因转录和蛋白表达上调,稳定过表达和瞬时过表达HSP27均能显著抑制VSV的体外增殖;干扰宿主细胞中HSP27表达可促进VSV增殖。HSP27能够增强VSV及维甲酸诱导基因I蛋白(retinoic acid-inducible gene I protein, RIG-I)介导的IFN-β的产生及RIG-I的蛋白表达,而且HSP27与RIG-I相互作用并共定位于细胞质中。本研究揭示了HSP27靶向RIG-I上调其表达,增强RLR信号通路的转导,进而负调控VSV体外增殖,为深入揭示宿主因子HSP27在病毒感染中的作用机制奠定基础。