新基因NYGGF4在肥胖患儿脂肪组织中的表达验证及生物信息学分析

目的验证新基因NYGGF4在肥胖患儿脂肪组织中的表达,初步探讨NYGGF4的生物信息学特征。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术验证肥胖与健康儿童脂肪组织中NYGGF4基因的表达差异,应用DNA Star、Blast、ProtParam、SOPMA、TargetP、TMHMM、ProtScale、SOSUI、InterproScan和SMART等软件或数据库分析NYGGF4的核苷酸基本特征、蛋白质理化性质、二级结构、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、可溶性、结构域及亚细胞定位等。采用SPSS 11.0软件进行统计学分析。结果NYGGF4基因是一个未知的新基因,差异高表达于肥胖患儿脂肪组织中,生物信息学分析该基因cDNA全长1 527 bp,开放阅读框(ORF)长753 bp,编码250个氨基酸,预测相对分子质量28 271,定位在胞质,蛋白序列分析显示无跨膜螺旋结构,为一非分泌、可溶的亲水性蛋白,蛋白结构域分析提示NYGGF4的N端有一较短的亲脂性靶向序列、C端有一PTB结构域。结论NYGGF4基因是一差异高表达于肥胖患儿脂肪组织中的新基因,可能是胞质内一个信号转导分子,在肥胖的发生发展过程中发挥重要功能,有进一步研究的价值。

NYGGF4小鼠同源基因mRNA在遗传性ob／ob肥胖小鼠体内的表达

目的观察NYGGF4小鼠同源基因在遗传性ob/ob肥胖小鼠(以下简称ob/ob小鼠)与正常C57/BL6J小鼠脂肪组织中的差异表达,分析NYGGF4小鼠同源基因在ob/ob小鼠体内的多组织表达特征,探讨NYGGF4小鼠同源基因与肥胖之间的关系。方法雄性10周龄ob/ob小鼠、正常小鼠(对照组)各12只,以乌拉坦(0.4g/kg)深度麻醉后取腹膜后脂肪、肝、脑、骨骼肌、心肌、结肠、肾、小肠、肺、胸腺、脾等组织,采用RT-PCR技术检测NYGGF4小鼠同源基因的mRNA表达水平,比较NYGGF4小鼠同源基因在ob/ob小鼠与正常对照小鼠腹膜后脂肪组织中的差异表达及在ob/ob小鼠各组织中的表达。结果1.ob/ob小鼠体质量[(38.94±1.97)g]显著高于对照组小鼠[(18.47±0.66)g](P<0.001);2.NYGGF4小鼠同源基因在ob/ob小鼠腹膜后脂肪组织中的表达水平[(89.18±8.31)%]显著高于对照组小鼠[(56.84±9.54)%](P<0.001);3.NYGGF4小鼠同源基因在肝脏、脑、腹膜后脂肪、骨骼肌、心肌、结肠、肾脏等组织中均有表达,从高至低依次为肝脏>脑>腹膜后脂肪>骨骼肌>心肌>结肠>肾脏,虽在小肠、肺、胸腺、脾等组织中未检测到阳性信号,但总体上呈现多组织表达特征。结论NYGGF4小鼠同源基因可能参与肥胖发生的病理生理机制,并在肝脏、脑、腹膜后脂肪、骨骼肌等胰岛素作用的靶组织中表达水平相对较高。

NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体的影响

目的观察NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体的影响。方法构建NYGGF4基因表达载体,转染3T3-L1前体脂肪细胞,G418筛选表达NYGGF4细胞株后,用RT-PCR及western blot技术验证,建立NYGGF4稳定过表达细胞株。用透射电镜观察NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体形态的影响,实时荧光定量PCR检测NYGGF4基因过表达及对照空载脂肪细胞中核转录因子PGC1α、NRF1、mtTFA mRNA含量。结果 RT-PCR及western blot均提示NYGGF4稳定过表达细胞株建立成功。NYGGF4基因过表达可以导致脂肪细胞线粒体形态异常,显著上调脂肪细胞PGC1αmRNA表达,对NRF1、mtTFA mRNA水平无明显影响。结论 NYGGF4基因过表达可以导致脂肪细胞线粒体损伤。

Sema4D基因沉默对骨髓间充质干细胞成骨及成脂肪分化相关基因表达的影响

为了探讨Sema4D基因对绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞(BMMSCs)成骨及成脂肪分化能力的影响,设计3条Sema4D基因的siRNAs,分别通过显微观察和蛋白质免疫印迹(Western blot)鉴定其对BMMSCs生长形态以及对Sema4D蛋白表达的影响.进一步利用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot检测Sema4D基因沉默对成骨指标抗碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)和成脂肪分化指标脂蛋白酶(LPL)、脂肪细胞结合蛋白2(AP-2)、瘦素(Leptin)表达的影响以及对骨保护素和可溶性细胞核因子-κB受体活化因子及配基(OPG/RANKL/RANK)系统的影响.结果显示Sema4D基因沉默后,绝经后骨质疏松患者BMMSCs中ALP、BGP、CollagenⅠ的表达水平明显升高,LPL、AP-2、Leptin的表达水平也明显升高;OPG的表达水平明显升高,而RANKL和RANK的表达水平明显下降.由上述结果可知,Sema4D基因可以抑制BMMSCs成骨分化和成脂肪分化相关基因的表达,可能通过下调OPG/RANKL/RANK系统相关基因的表达来实现.

Leptin对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达的调控

目的:观察leptin对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达的调节作用。方法:体外培养人前体脂肪细胞,在诱导人前体脂肪细胞分化成熟的基础上,应用100ng/ml人重组leptin分别干预成熟脂肪细胞6、24h,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测成熟脂肪细胞中NYGGF4基因mRNA的表达水平。结果:100ng/ml leptin干预人成熟脂肪细胞6h后,NYGGF4基因mRNA的相对表达量为0.000476±0.000178,显著低于对照组0.00114±0.000275,P<0.05;干预24h NYGGF4基因mRNA的相对表达量为0.000835±0.000211,也显著低于对照组0.001419±0.000193,P<0.05。结论:leptin能显著下调成熟脂肪细胞中NYGGF4基因的表达。

KLF4基因沉默大鼠肝星状细胞中Smad 2、3、7 mRNA及蛋白表达观察

目的观察Kruppel样因子4(KLF4)基因沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6中Smad 2、3、7 mRNA及蛋白表达的影响。方法设计并构建针对大鼠KLF4基因的3个干扰质粒(p GPU6-1、p GPU6-2、p GPU6-3),将质粒转染HSC-T6细胞,检测KLF4 mRNA及蛋白,筛选出沉默效果最好的重组质粒用于后续实验。将HSC-T6细胞分为A、B、C、D组,A组常规培养细胞;B组在培养液中加入TGF-β_1 50 ng/m L;C组转染重组质粒p GPU6-3;D组转染干扰质粒p GPU6-3 24 h后,再加入TGF-β_1 50 ng/m L。采用real-time PCR法检测各组细胞中的Smad2、Smad3、Smad7mRNA。采用Western blotting法检测各组细胞中的Smad2、Smad3、Smad7蛋白和磷酸化Smad2、3(p-Smad2、3)蛋白。结果 B、D组细胞中Smad2、Smad3、Smad7 mRNA相对表达量高于A组,C组细胞中Smad7 mRNA相对表达量高于A组(P均<0.05)。C组、D组细胞中p-Smad2、p-Smad3蛋白相对表达量低于A组,Smad7蛋白相对表达量高于A组(P均<0.05)。B组细胞中Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7蛋白相对表达量均高于A组(P均<0.05)。结论 KLF4基因沉默后,HSC-T6细胞(包括被TGF-β_1激活的HSC-T6)中p-Smad2、p-Smad3蛋白表达下调,Smad7 mRNA及蛋白表达上调;抑制KLF4基因表达可能有抗纤维化作用,作用机制与抑制TGF-β_1/Smad信号通路激活有关。

沉默Wnt4基因抑制大鼠肾间质纤维化

目的探讨沉默Wnt4基因对肾间质纤维化的影响,为慢性肾病的治疗提供理论依据。方法 128只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阴性对照组和Wnt4基因沉默组,每组32只。构建Wnt4 siRNA慢病毒载体体内转染沉默组的大鼠,于转染后第3、7、10、14天分为四个亚组,每组8只大鼠。通过H&E染色病理检查、RT-PCR技术检测肾间质改变及β-连环蛋白、Wnt4、α-SMA表达情况。结果 H&E染色病理检查结果表明:假手术组四个时间点未见肾间质改变;UUO组、阴性沉默组及沉默组造模后3 d出现肾间质水肿、少量肾间质纤维化,10、14 d肾间质弥漫性巨噬细胞、淋巴细胞浸润,呈加重趋势;阴性沉默组基因与UUO组相同;沉默组四个时间点均出现不同程度肾间质纤维化,14 d肾间质纤维化程度低于阴性沉默组及UUO组(P<0.05);Wnt4基因沉默后UUO组mRNA表达量的相关性分析显示,Wnt4与β-catenin mRNA表达量具有显著相关性(r=0.886,P<0.001)。Wnt4与α-SMA mRNA表达量具有显著相关性(r=0.930,P<0.001)。Wnt4基因沉默后沉默组mRNA表达量的相关性分析显示,Wnt4与β-catenin mRNA表达量无显著相关性(r=0.204,P=0.263)。Wnt4与α-SMA mRNA表达量具有显著相关性(r=0.753,P<0.001)。结论沉默Wnt4基因在肾间质纤维化大鼠中可明显抑制肾间质纤维化,可能对其有治疗作用。

T细胞因子3基因沉默对小鼠睾丸胚胎癌细胞Oct4表达的影响

目的:探讨T细胞因子3(TCF3)基因沉默对小鼠睾丸胚胎癌F9细胞干性基因Oct4表达的影响,阐明TCF3对F9细胞中Oct4表达调控的作用机制。方法:采用RNAi技术将TCF3基因沉默作为TCF3干涉组,同时设立空白对照组和阴性对照组。采用RT-PCR和Western blotting方法观察各组细胞TCF3和Oct4mRNA和蛋白表达水平,细胞免疫荧光法观察F9细胞中Oct4的表达。结果:Oct4在F9细胞核中高度表达。与空白对照和阴性对照组比较,TCF3干涉组TCF3mRNA和蛋白表达水平显著下调,差异有统计学意义(P<0.01);Oct4mRNA和蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);而空白对照组与阴性对照组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TCF3基因干涉可以促进F9细胞中Oct4的转录和蛋白表达,提示TCF3可以负向调控F9细胞中Oct4的表达,是Oct4的抑制因子之一。

沉默S100A4基因对乳腺癌上皮间质转换的影响

目的观察沉默人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞中钙结合蛋白S100A4基因对上皮间质转换(EMT)的影响。方法采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和荧光实时定量(RT-PCR)检测S100A4在人乳腺癌组织中的表达情况。用RNA干扰技术将针对S100A4和非特异性阴性对照序列的siRNA转染至人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,采用RT-PCR和Western blot方法检测EMT相关分子(E-cadherin, N-cadherin、Snail和Slug)的表达在沉默组和对照组中的表达水平。结果成功建立S100A4基因沉默的人乳腺癌MCF-7和MAD-231细胞模型;二者细胞中N-cadherin、Snail和Slug表达水平降低,而Ecadherin表达水平上调。结论 S100A4通过调节EMT过程,促进乳腺癌的侵袭和迁移,其可能成为乳腺癌治疗新的靶标分子。

白菜雄性不育相关基因BcMF3和BcMF4的A9启动子的基因沉默植物表达载体的构建

以白菜(Brassica campestris ssp.chinensis,syn.B.rapa ssp.chinensis)雄性不育相关基因BcMF3和BcMF4为沉默对象,利用绒毡层组织特异性的A9启动子,构建了反义RNA、RNA干涉和双价反义RNA植物表达载体。结果表明,经过一系列分子操作,获得了A9启动子和目的基因片段,并利用它们构建了5个基因沉默植物表达载体,可用于基因功能验证。

白细胞介素1受体相关激酶4基因沉默抑制人成骨样细胞相关基因的表达

背景:造成假体周围骨溶解的完整分子机制目前尚未完全清楚。假体周围骨溶解、吸收是人工关节松动的典型病理生理过程。白细胞介素1通过MAPK信号通路影响骨吸收进程。目的:实验通过观察siRNA沉默白细胞介素1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase-4,IRAK-4)基因表达对人成骨样细胞株MG63的MAPK信号转导通路的影响,为防治人工关节置换后假体周围骨溶解提供实验基础。方法:以Lipofectamine 2000为载体将IRAK-4-siRNA转染入MG63细胞。实验分为3组,空白组不加入任何转染试剂;对照组以scrambled siRNA序列进行转染;沉默组以特异性IRAK-4-siRNA序列进行转染。Western blot检测靶细胞细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38MAPK基因的表达。结果与结论:与对照组相比,靶基因沉默组的IRAK-4 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。MG63细胞IRAK-4表达下调后,与空白组和对照组相比,c-Jun氨基末端激酶1/2P46、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2、磷酸化p38MAPK表达下调分别为62%,64%,68%(P<0.05)。结果证实,siRNA沉默IRAK-4基因抑制人成骨样细胞株MG63细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38MAPK基因的表达。

Oct4和Nanog基因沉默对胰腺癌干细胞耐药性的影响

目的观察通过RNA干扰同时沉默Oct4和Nanog基因对胰腺癌干细胞(PCSCs)化疗药物耐药性的影响,探索提高胰腺癌化疗效果的新方法。方法通过流式细胞仪从人胰腺癌细胞系PANC-1中分离出CD44+CD24+ESA+的PCSCs,体外建株,通过构建特异性慢病毒shRNA-Oct4/Nanog载体同时沉默PCSCs的Oct4和Nanog基因,分选出基因沉默的PCSCs(PCSCs-shOct4+shNanog),通过CCK8细胞活性检测法观察其对化疗药物吉西他滨敏感性的变化,Real-Time RT-PCR和Western blotting检测耐药相关基因ABCG2的表达。结果 CD44+CD24+ESA+的PCSCs高度表达Oct4和Nanog基因,在体外表现为对吉西他滨的耐药性增强。Oct4和Nanog基因同时被沉默后PCSCs干性特征出现抑制,ABCG2表达下降,耐药性降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Oct4和Nanog基因在保持PCSCs肿瘤干性特性方面发挥重要作用,沉默二者表达后PCSCs的耐药性受到抑制。

DPC4RNAi慢病毒载体的构建及其基因沉默效应

目的 :构建DPC4基因RNA干扰慢病毒载体及其基因沉默效应。方法 :针对DPC4基因序列,利用网站设计程序按照RNA干扰序列设计原则,设计多个RNA干扰靶点序列,根据设计经验和设计软件进行评估测定,选择最佳的动力学参数靶点进入后续实验流程;生工生物合成含干扰序列的双链DNA oligo,其两端含酶切位点粘端,直接连入酶切后的RNA干扰载体上。将连接好的产物转入制备好的细菌感受态细胞,对长出的克隆进行酶切鉴定,挑选出阳性克隆测序,进行测序比对后,鉴定阳性克隆即为构建成功的目的基因RNA干扰慢病毒载体。结果:经过Western blot方法检测和测序证实,成功构建了DPC4 shRNA慢病毒载体LVshSmad4,并成功制备了DPC4shRNA慢病毒,3株病毒感染细胞后均具有有效的基因沉默,其中SH1序列最为显著。结论 :DPC4基因RNA干扰靶点的成功设计和RNA干扰靶点慢病毒载体制备,而且具有显著的基因沉默效果。

IRAK-4基因沉默对人成骨样细胞凋亡的影响

【目的】研究siRNA沉默白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)基因对人成骨样细胞株MG63凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。【方法】以Lipofectamine 2000为载体将IRAK-4-siRNA转染入MG63细胞(CON组:不加入任何转染试剂;SC组:以scrambled siRNA序列进行转染;KD组:以特异性IRAK-4-siRNA序列进行转染),应用流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡水平,western blotting检测Bcl-2、Bax基因的表达。【结果】与对照组相比,靶基因沉默组(KD组)细胞的IRAK-4 mRNA及蛋白表达水平显著降低;转染48h后,KD组细胞增殖变缓,凋亡增加,Bcl-2蛋白的表达明显下调且Bcl-2/BaxSC>Bcl-2/BaxKD;Spearman等级相关分析显示MG63细胞凋亡比例与Bcl-2/Bax的比值间有显著的相关性。【结论】siRNA沉默IRAK-4基因能够诱导人成骨样细胞株MG63凋亡,且靶细胞凋亡水平与Bcl-2、Bax基因表达水平的比值相关。

脂质体RNAiMAX介导siRNA转染沉默星形胶质细胞AQP4基因

目的明确脂质体RNAiMAX(lipofectamine RNAiMAX)是否可以介导小干扰RNA(siRNA)转染入原代培养星形胶质细胞并实现水通道蛋白4(AQP4)基因沉默。方法利用原代培养的Wistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞,通过倒置荧光显微镜和Tecan酶标仪,观察lipofectamine RNAiMAX是否能介导Cy3标记的siRNA转染入细胞内,以及RNAiMAX浓度和siRNA浓度对转染效率的影响;利用Real-time PCR方法检测AQP4 siRNA转染的基因沉默效果。结果倒置荧光显微镜和Tecan酶标仪检测发现,随着siRNA和RNAiMAX浓度的增加,转染细胞荧光强度随之增加(n=6);Real-time PCR检测结果显示,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA以及6ml/L RNAiMAX和60nmol/L AQP4 siRNA转染星形胶质细胞24h、48h、72h时,AQP4 mRNA水平均降低80%以上(n=6)。结论 Lipofectamine RNAiMAX可以介导siRNA转染入原代培养星形胶质细胞中并实现AQP4基因的沉默,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA即可达到理想的沉默效果。

CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭和转移影响的实验研究

目的探讨CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭及转移的影响及可能机制。方法设计合成CXCR4特异性短发夹状RNA(shRNA)插入p Silencer载体,转染人高转移性黑色素瘤细胞株MV3、RT-PCR和Western blot法检测shRNA对靶基因CXCR4表达的影响。利用Transwell小室模型检测细胞体外侵袭能力,MTT法检测细胞体外增殖能力。通过裸鼠尾静脉瘤细胞注射,将转染后的细胞接种至裸鼠皮下,构建黑色素瘤转移模型,观察肿瘤生长情况。结果 CXCR4-shRNA能有效下调CXCR4基因的表达,降低黑色素瘤细胞增殖、体外侵袭及转移能力。RT-PCR及细胞免疫荧光显示,转染CXCR4-shRNA的黑色素瘤瘤MV3细胞系MMP-2表达下调;免疫组化结果显示,实验组裸鼠黑色素瘤瘤体及转移灶组织MMP-2的表达低于对照组。结论 shRNA介导的CXCR4基因沉默在体外实验能够显著抑制黑色素瘤细胞的生长和增殖活性,减弱体外侵袭能力,且体外产生抑瘤效应,明显降低肝、脑器官转移能力和定向肺转移能力。其机制可能与SDF-1/CXCR4信号途径阻断,进而抑制MMP-2的表达有关。

沉默TLR4基因下调NF-κB表达抑制脑胶质瘤细胞增殖

目的探讨Toll样受体(TLR)4调控脑胶质瘤细胞增殖作用。方法构建沉默TLR4基因的shRNA质粒,脂质体法转染人脑胶质瘤U-87MG细胞;流式细胞术检测细胞转染率;实时荧光定量-聚合酶链反应(PCR)检测转染细胞中TLR4、核因子(NF)-κB及细胞周期蛋白(Cyclin)D1基因表达;嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞;流式细胞术检测转染细胞周期及EdU表达。结果TLR4-sh2转染率最高。U-87MG细胞转染TLR4-sh2及阴性对照质粒48 h后,嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞分别命名为U-87MG-Sh及U-87MG-NC细胞,转染率分别为(95.05±0.17)%及(94.75±0.72)%。U-87MG-Sh细胞中TLR4、NF-κB及CyclinD1基因及Edu表达水平显著低于U-87MG-NC及U-87MG细胞中的表达水平(P<0.01)。U-87MG-Sh细胞中G0/1期细胞显著高于U-87MG-NC及U-87MG细胞(P<0.01),而细胞增殖指数显著降低(P<0.01)。结论抑制TLR4基因可以下调下游靶基因NF-κB表达,从而导致CyclinD1基因表达水平降低,抑制脑胶质瘤细胞增殖。

慢病毒介导ABCC4基因沉默A549细胞株的建立

目的ABCC4是一种多药耐药相关蛋白，其在肿瘤中的具体功能尚未研究清楚。为了探讨ABCC4在肿瘤细胞中的功能，本文通过慢病毒载体介导ABCC4 shRNA感染A549细胞，建立ABCC4基因沉默细胞株。方法通过慢病毒介导将ABCC4shRNA序列转入A549细胞，构建ABCC4 RNAi细胞株，然后在荧光显微镜下观察GFP在细胞中的表达情况，采用real—time PCR方法检测ABCC4基因在细胞中的表达水平。结果85％以上的转染细胞有荧光表达。real-time PCR结果显示应用RNAi技术成功使细胞系A549中ABCC4基因的表达受到抑制。结论利用慢病毒载体成功构建ABCC4基因沉默细胞。

S100A4基因沉默抑制晚期糖基化终产物诱导内皮细胞钙化的作用

目的通过干扰人脐静脉内皮细胞(HUVEC)S100A4基因表达,探讨其对晚期糖基化终产物(AGE)诱导HUVEC钙化的影响。方法用重组病毒转染体外培养的HUVEC抑制S100A4的表达。用AGE刺激转感染后的HUVEC,建立糖尿病细胞模型。通过检测细胞内钙离子水平,Western blotting测定基质Gla蛋白(MGP)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、碱性磷酸酶(ALP)的表达水平,以及茜素红染色评估HUVEC钙化水平。结果在AGE的刺激下HUVEC内钙离子浓度显著升高。沉默S100A4基因后,可以反转AGE诱导的MGP高表达,以及BMP2、ALP的低表达(均P<0.01);且茜素红染色面积明显降低。结论用重组病毒沉默S100A4基因可以降低AGE诱导的HUVEC钙化水平。S100A4基因可能成为治疗糖尿病血管钙化的一个潜在的靶点。

基因沉默肽基精氨酸脱亚胺酶4的表达对胶原诱导关节炎小鼠肺间质病变的影响

目的:研究基因沉默肽基精氨酸脱亚胺酶4(peptidyl arginine deaminase 4,PAD4)的表达对胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠肺间质病变的治疗作用及可能机制。方法:DBA/1小鼠建立CIA模型,尾静脉注射PAD4-siRNA表达载体制备的病毒液,每周1次,共8次。处死小鼠,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肺中PAD4 mRNA的表达水平;免疫组织化学法检测PAD4蛋白的表达;取脾组织进行细胞培养,流式细胞术检测Tfh细胞和Tfr细胞比例的变化;HE染色观察肺病理学的改变。结果:(1)与空白组比较,模型组小鼠肺组织PAD4 mRNA的表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05),PAD4-siRNA治疗后CIA小鼠肺组织中PAD4 mRNA的表达水平较模型组和阴性对照组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);(2)空白组小鼠肺组织红色荧光较少,而模型组和阴性对照组小鼠肺组织的炎细胞浸润区和气管周围可见较多的红色荧光,PAD4-siRNA治疗后3组的红色荧光明显减少;(3)与空白组比较,模型组脾细胞中Tfh细胞比例升高,差异有统计学意义(P<0.05),PAD4-siRNA治疗后CIA小鼠脾细胞中Tfh细胞比例较模型组和阴性对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与空白组比较,模型组小鼠脾细胞中Tfr细胞比例略有降低,但差异无统计学意义,PAD4-siRNA治疗后小鼠脾细胞中Tfr细胞比例升高,但只有PAD4-siRNA2组与模型组和阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);(4)模型组脾细胞中Tfh/Tfr值升高,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05);PAD4-siRNA治疗后3组Tfh/Tfr值均下降,差异有统计学意义(P<0.05);(5)与空白组比较,模型组小鼠肺组织的肺泡壁增厚,炎性细胞浸润增加,PAD4-siRNA治疗后CIA小鼠的肺组织破坏及炎性浸润减少,纤维化程度减轻。结论:基因沉默PAD4的表达可以降低Tfh细胞的比例,升高Tfr细胞的比例,逆转Tfh/Tfr值,减轻肺组织的间质病变程度和炎症浸润程度。