选择性Na^+/H^+交换抑制剂对犬供心保护效果研究

目的研究选择性Na+/H+交换抑制剂HOE-642对心脏移植犬供心的保护效果。方法选择32只雄性成年犬,分为实验组和对照组(每组16只,供、受各8只)。实验组:用St.ThomasⅡ液灌注停搏,快速取下供心,4℃保护液冷浸浴保存4 h后行心脏移植术。其中,供心在取下前10 min和受体再灌注前10 min分别经静脉给以HOE-642(2 mg/kg)。对照组:方法同实验组,不同的是供心在取下前10 min和受体再灌注前10 min分别经静脉给予0.9%氯化钠溶液(2 mg/kg)。采用标准原位法行心脏移植术。移植完毕,开放升主动脉,辅助循环60min,停机后观察60 min。结果每组各1例主动脉开放后因主动脉吻合口漏血,失血性休克死亡,剔除出实验;其余动物均成功脱离体外循环。随着主动脉开放时间的延长,实验组左心室峰发展压、左心室压力变化速率高于对照组;左心室舒张末压低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组心肌含水量低于对照组,差异有统计学意义(73.46%±4.80%vs.81.65%±5.40%,P<0.05)。实验组心肌细胞亚细胞结构的保存优于对照组。结论 HOE-642能有效改善心肌保护液对犬供心的保护作用,机制可能与其抑制心肌细胞Ca2+超载有关。

4-[4-(2,3,4-三甲氧基苄基)哌嗪-1-基甲基]苯甲酰胍类化合物的合成及其Na^+/H^+交换器1抑制活性

为了寻找对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用的药物,以苯甲酰胍为母核,在其苯环的4位引入4-(2,3,4-三甲氧基苄基)哌嗪-1-甲基,3位引入不同的取代苯甲酰胺基,设计并合成了12个未见文献报道的目标化合物.其结构经MS,IR,1H NMR和元素分析确证.体外血小板肿胀模型(PSA)试验结果表明,大部分目标化合物显示出较好的Na+/H+交换器1(NHE1)抑制作用,其中化合物7g和7l抑制NHE1的IC50值分别为3.72和3.53nmol·L-1,是卡立泊来德(IC50=12.1nmol·L-1)的3.2和3.4倍.

新型抗流感病毒神经氨酸酶抑制剂的研究进展概论

流感病毒神经氨酸酶抑制剂(Influenza virus neuraminidase inhibitors,NAI)是近年来开发的一类抗流感病毒药物中重要的组成,具有对各亚型流感病毒广谱、有效、低耐药、良好耐受性等优点,成为当前抗击人感染高致病性禽流感和新型A型HxNx流感病毒最主要的一类药物。扎那米韦、奥司米韦和帕拉米韦3个抑制剂能抑制多种A、B型流感病毒的NA活性,前两者早已上市。针对口服生物利用度不高,研发了帕拉米韦氯化钠注射液也已进入Ⅲ期临床。本文报道了国内外扎那米韦、奥司米韦和帕拉米韦3个抑制剂的研发历程、理化性质、作用机制、药效学、药动学、临床实验研究,并对国内外生产企业的研发动态进行了概述。

中国毛虾流感病毒神经氨酸酶抑制活性肽的研究

以中国毛虾为原料,以抑制流感病毒神经氨酸酶(NA)活性为初筛指标,通过控制酶切位点制备了具有抑制NA活性的酶解液.利用凝胶层析和高效液相色谱等技术分离纯化出高活性的抑制肽,其IC50值为96.1μmol/L.经串联质谱测定该抑制肽序列为EISYIHAEAYRRGELK,紫外光谱分析结果证明该抑制肽能与NA结合.基于反向对接,应用SYBYL软件模拟抑制肽与NA活性区域结合,确定了抑制肽与NA的结合位点.细胞毒性实验测得该抑制肽对细胞的最大无毒浓度(TC0)为1.26 mg/mL.在红细胞凝集实验中,随着抑制肽浓度增大,病毒的凝集价显著降低,证明抑制肽的抗病毒作用具有多靶点.

神经氨酸酶抑制剂研究进展

流感是由流感病毒引起的呼吸道传染病。对人类的健康危害极大。神经氨酸酶(NA)在流感病繁殖过程起重要作用,通过抑制NA可阻止流感的蔓延,从此神经氨酸酶成了抗流感病毒药物理想的进攻靶点,基于神经氨酸酶与底物的酶促活性结构合理设计的神经氨酸酶药物相继上市,该文对扎那米韦,奥斯米伟及帕拉米韦高活性衍生物的研究做了综述。

帕拉米韦合成工艺改进研究

帕拉米韦系合成的一种环戊烷类抗流感病毒药物,属新型流感病毒NA抑制剂,在文献研究的基础上,对帕拉米韦的合成工艺进行了优化和改进,主要包括制备(1S,2S,3S,4R)-3-[(1S)-1-氨基-2-乙基丁基]-4-[叔丁氧羰基氨基]-2-羟基-环戊烷羧酸甲酯及帕拉米韦等步骤。本研究选用红铝甲苯溶液代替传统工艺方法中的贵金属催化加氢和氢化铝锂还原的条件,优化了反应方案;在进行甲酯化时,采用连续化反应,可以短时有效的在稳定pH下反应,抑制了BOC的脱除,减少了再次上氨基保护的步骤。采用改进和优化后的新工艺,产率提高,成本降低,环境友好,符合绿色现代化生产要求,为大规模工业化生产提供客观理论依据与实验论据。

支持向量机用于胍类化合物Na/H交换抑制活性的模式识别

将Vapnik提出的支持向量机(support vector machine,简称SVM)算法用于化合物活性的模式识别研究。SVM算法是特别适合于用有限已知样本训练建模,进而预报未知样本属性的模式识别新算法,将其用于N-(3-氧-3,4-双氢-2氢-苯并[1,4]噁嗪-6-羰基)胍类化合物的Na/H交换抑制活性类别的识别研究,用留一法考察了SVM模型的预报能力,并与Fisher判别矢量法和最近邻(KNN)法的分类预报结果进行比较,结果表明:SVM算法的预报结果优于Fisher法和KNN法的结果。因此,SVM算法可望应用于药物的构效关系研究领域。

人工改造甜瓜钾离子通道基因△KAT2/MIRK转拟南芥的生理特性分析

K＋通道是介导植物K＋吸收转运的主要途径之一。甜瓜K＋通道MIRK对外源Na＋敏感,生物信息学分析其敏感位点可能位于孔区外（即S5-P-S6）。为了验证MIRK受Na＋抑制位点,本研究将拟南芥中不受Na＋抑制的同源K＋通道基因KAT2孔道区替换到MIRK序列上,生成人工改造甜瓜K＋通道基因△KAT2/MIRK。电生理实验结果显示△KAT2/MIRK仍保持了MIRK介导K＋的属性,但其内向电流则不受外源Na＋的抑制。将MIRK和△KAT2/MIRK分别转化到拟南芥K＋通道KAT1突变体kat1中,抗性筛选和PCR检测结果表明成功获得p35S：：MIRK-kat1和p35S：：△KAT2/MIRK-kat1转基因植株。分别用50、100 mmol/L的Na Cl溶液处理转基因拟南芥和kat1突变体,发现MIRK及△KAT2/MIRK在kat1中的过表达可以介导K＋内流,并参与植株对盐胁迫的响应。

辽宁某铜铅锌硫化矿石电位调控优先浮选试验

辽宁某铜铅锌多金属硫化矿石中的有用矿物嵌布关系复杂,嵌布粒度粗细不均。采用1次磨矿、电位调控优先浮选工艺对铜、铅、锌的选矿工艺条件进行了试验研究。结果表明,在电位约-35mV、pH=9.1情况下,以SN-9#+苯胺黑药为捕收剂、Na2SiO3+ZnSO4+CMC为铅锌及脉石矿物的抑制剂优先选铜,接着在电位为-225.6mV、pH=11.4情况下,仍以SN-9#+苯胺黑药为捕收剂浮选铅,最后以硫酸铜为活化剂、乙基黄药为捕收剂选锌,最终获得了铜品位为23.68%、回收率为85.61的铜精矿,铅品位为51.26%、回收率为70.68%的铅精矿,锌品位为52.13%、回收率为82.13%的锌精矿。

人工改造甜瓜钾离子通道基因ΔAT2/MIRK转拟南芥的生理特性分析

K^+通道是介导植物K^+吸收转运的主要途径之一。甜瓜K^+通道MIRK对外源Na^+敏感,生物信息学分析其敏感位点可能位于孔区外(即S5-P-S6)。为了验证MIRK受Na^+抑制位点,本研究将拟南芥中不受Na^+抑制的同源K^+通道基因KAT2孔道区替换到MIRK序列上,生成人工改造甜瓜K^+通道基因ΔAT2/MIRK。电生理实验结果显示ΔAT2/MIRK仍保持了MIRK介导K^+的属性,但其内向电流则不受外源Na^+的抑制。将MIRK和ΔAT2/MIRK分别转化到拟南芥K^+通道KAT1突变体kat1中,抗性筛选和PCR检测结果表明成功获得p35S::MIRK-kat1和p35S::ΔAT2/MIRK-kat1转基因植株。分别用50、100mmol/L的NaCl溶液处理转基因拟南芥和kat1突变体,发现MIRK及ΔAT2/MIRK在kat1中的过表达可以介导K^+内流,并参与植株对盐胁迫的响应。

KB-R7943对高脂饮食大鼠心肌离体缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的探讨选择性Na+/Ca2+交换体反向转运抑制剂KB-R7943对高脂饮食大鼠心肌离体缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法大鼠心脏给予完全缺血30 min,之后再灌注120 min。其中正常饮食喂养大鼠12只为对照组(C组),高胆固醇饮食喂养大鼠48只。缺血后高胆固醇饮食大鼠做如下处理:12只不干预(高胆固醇对照组,HC组);12只给予KB-R7943(KB组);12只给予KB-R7943和ATP敏感性钾通道阻滞剂格列本脲(KB+G组);12只仅给予格列本脲(G组)。通过血流动力学指标评价心脏功能,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色测量心肌梗死范围,电镜下观察心肌超微结构及TUNEL染色评价心肌细胞凋亡程度。结果高脂喂养后,大鼠血清TC、LDLC、HDL-C均升高。与HC组比较,其余各组HR均加快(P均<0.05);与HC组再灌注5、30、120 min比较,KB组左室发展压、等容收缩期左室压力上升的最大速率、等容舒张期左心室压力下降的最大速率均升高(P均<0.05)。各组再灌注30 min内的各指标无统计学差异。C组心肌梗死程度明显低于HC组,KB组梗死程度最轻(P均<0.05)。与C组比较,HC组TUNEL阳性心肌细胞所占百分比均高(P均<0.05),KB组明显低于HC、KB+G组、G组(P均<0.05)。HC组、KB+G组及G组心肌纤维排列紊乱,Z线扭曲,肌带长短不一。肌细胞核形状不规则,核心内异染色质凝聚,核膜局部模糊。KB组少数肌丝灶性溶解,线粒体肿胀轻微,少许肌浆网扩张。结论高胆固醇血症可增加缺血心肌的损伤程度,但不影响心脏收缩功能;KB-R7943通过ATP敏感性钾通阻滞剂减少高脂饮食大鼠缺血心肌坏死及细胞凋亡,从而减轻缺血再灌注损伤。

新型抗流感病毒强效神经氨酸酶抑制剂帕拉米韦研究进展

神经氨酸酶(NA)抑制剂是近年来开发的一类抗流感病毒药物,具有对各亚型流感病毒广谱的有效性、低耐药性、良好的患者耐受性等优点,成为当前抗击人感染高致病性禽流感和新型甲型HxNy流感病毒最主要的一类药物。帕拉米韦作为一种新型NA抑制剂,可以抑制多种甲型、乙型流感病毒的NA活性,已进入Ⅲ期临床阶段,针对口服生物利用度不高研发了帕拉米韦氯化钠注射液。国家食品药品监督管理总局和药品审评中心,为应对上海、江苏、浙江等地新发的人感染H7N9禽流感疫情,第一时间批准中国自主研发的新药帕拉米韦注射液上市。本文介绍了国内外帕拉米韦的研发历程、理化性质、抑制NA作用机制、药效学研究、体外抗流感病毒作用、体内抗流感病毒作用、药动学研究、临床实验研究并概述了国内生产企业等研发动态。

3种蛋白酶抑制剂对鹿茸促细胞增殖活性的保护作用

目的:确定对鹿茸样品活性有保护作用的蛋白酶抑制剂种类及作用浓度。方法:选择金属蛋白酶抑制剂EDTA-2Na、胰蛋白酶抑制剂(Approtinin)和胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin),以MTT法检测其对NRK-49F细胞增殖活性和对鹿茸促细胞增殖活性的影响以及对鹿茸样品33℃放置不同时间的保护作用。用Bradford法测鹿茸样品蛋白含量并调整到作用浓度400μg/mL。结果:当EDTA-2Na、Approtinin和Pepstatin浓度分别小于200、50、400μg/mL时对细胞增殖活性没有影响。EDTA-2Na浓度为6.25和12.5μg/mL时对鹿茸促增殖活性有加强作用,但对于鹿茸样品高温下放置没有明显的保护作用。12.5μg/mL的Approtinin对鹿茸促增殖活性有促进作用,并且对鹿茸样品高温放置有明显的保护作用,6.25μg/mL时效果最佳(P<0.05)。12.5μg/mL的Pepstatin表现出对鹿茸促增殖活性的加强作用,并表现出对鹿茸样品高温放置的保护作用,但数据无统计学差异。结论:3种蛋白酶抑制剂中胰蛋白酶抑制剂对鹿茸促细胞增殖活性有较好的保护作用。

辽宁省2014年-2016年季节性A(H3N2)流感病毒耐药基因分析

目的分析辽宁省2014年-2016年甲型H3N2亚型流感毒株基质蛋白2(matrix protein2,M2)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因特点,掌握辽宁省内流感流行株对烷胺类药物以及神经氨酸酶抑制剂类药物的耐药情况,为流感的临床治疗及预防控制提供依据。方法选取甲型H3N2亚型流感毒株51株,提取核酸后对M2基因和NA基因进行PCR扩增,测序后对耐药位点进行分析。结果所选毒株均发生了M2基因的S31N耐药位点突变,M2基因的其余耐药位点和NA基因的全部耐药位点未发现耐药突变。结论辽宁省2014年-2016年流行的甲型H3N2型流感毒株普遍对烷胺类药物耐药,对神经氨酸酶抑制剂类药物敏感。奥司他韦、扎那米韦等NA抑制剂类药物依然是近年来甲型H3N2流感防治的敏感药物。