Na^+-牛磺酸转运体基因在急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织的表达及意义

目的通过研究α-异硫氰酸萘酯(ANIT)所致的急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织Na+-牛磺酸转运体基因(ntcp)表达的变化,以进一步探讨急性肝内胆汁淤积发生的分子机制。方法选用40只幼年雄性SD大鼠为实验对象,随机分为正常对照组(8只)、中毒组(32只)。中毒组幼鼠按100mg/kg一次性灌服ANIT诱导急性肝内胆汁淤积病变。观察各组在灌服ANIT后24、48、72和96h血清总胆红素(TB)、丙氨酸转氨酶(ALT)的浓度,同时用RT-PCR测定肝组织中ntcp-mRNA的表达,并在光学显微镜下观察肝脏的形态学改变。实验结果采用SPSS软件包分析。结果灌服ANIT后,中毒组大鼠血清ALT、TB逐渐升高,24h增加明显,48h达高峰,72h逐渐下降,96h已显著下降,差异有统计学意义(P﹤0.05)。中毒组大鼠肝组织ntcp-mRNA表达水平低于正常对照组,48h表达最低,72h逐渐恢复,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论ANIT所致的急性肝内胆汁淤积使肝脏功能受损,导致血清酶学改变。急性胆汁淤积肝组织基底膜ntcp基因转录水平明显下降为机体的一种负反馈机制,可减轻胆汁淤积程度,保护肝细胞。

Na^+-K^+-2Cl^-共转运体不同亚型在大鼠胃黏膜的差异性分布及表达

目的研究Na+-K+-2Cl-共转运体(Na+-K+-2Cl-co-transporter,NKCC)的两种亚型在胃不同部位黏膜层的差异性分布及表达的意义。方法用免疫荧光组织化学法和实时定量PCR技术检测NKCC不同亚型NKCC1与NKCC2在正常大鼠胃不同部位(胃底、胃体和胃窦)黏膜组织的分布和表达。结果①免疫荧光组织化学显示:NKCC1多分布于胃底、胃窦黏膜底部及胃体黏膜中下部,细胞膜表达最多;而NKCC2则多分布于胃体、胃窦黏膜全层及胃底黏膜上1/3部,细胞质、细胞膜均有表达。②实时定量PCR显示:NKCC1的mRNA在正常大鼠胃体表达最高,NKCC2的mRNA则在胃窦表达最高。结论正常大鼠NKCC1与NKCC2在不同部位胃黏膜上皮细胞的分布及表达含量不同,NKCC1多分布在黏膜底部或中下部,NKCC2多分布于黏膜顶部或全层。

人外周血单个核细胞与肝细胞Na^+-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)基因的表达

目的检测人外周血单个核细胞(PBMC)与肝细胞Na+-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)基因的表达情况,探讨HBV感染PBMC的可能途径,研究乙型肝炎病毒(HBV)感染PBMC机制。方法用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞,用TRIzol提取人外周血单个核细胞与肝细胞总RNA,经逆转录合成cDNA。设计合成一对针对NTCPmRNA的特异性引物,对人外周血单个核细胞及肝细胞的cDNA进行PCR扩增,扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定,以检测NTCP基因在两种细胞的表达情况。结果 RT-PCR电泳显示,用NTCP基因特异性引物对肝细胞cDNA扩增,扩增产物大小在200~300bp之间,与NTCP基因理论值(246bp)相符,即肝细胞NTCP基因表达阳性;人外周血单个核细胞的cDNA扩增后进行电泳鉴定,未出现特异性条带,即NTCP基因表达阴性。结论人外周血单个核细胞不表达NTCP基因,提示其表面的HBV受体可能并非NTCP,或HBV循非受体途径进入PBMC,关于HBV感染PBMC的具体机制尚需进一步研究。

HBV受体Na^+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)研究新进展

Na+-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)是第10个溶质转运蛋白(SLC10)家族成员之一,在胆汁酸的肠肝循环过程中发挥重要作用。NTCP的表达受细胞因子、细胞内胆汁酸浓度、激素水平等因素的影响;NTCP基因的单核苷酸多态性(SNP)与种族有关。现已确定NTCP是HBV的功能性受体,这一发现为抗乙肝新药的研发提供了新的靶点和策略,也改变了HBV领域的研究方向和模式。

异烟肼对小鼠肝细胞膜转运体Mrp2,Bsep,P-gp和Ntcp表达的影响

目的考察异烟肼(isoniazid)对小鼠肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2,Mrp2),胆盐输出泵(bile salt export pump,Bsep),P-糖蛋白(P-glycoproteins,P-gp)和Na+-牛磺酸钠共转运体(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,Ntcp)表达的影响,为从转运体水平阐释异烟肼药物性肝损伤(drug-induced liver injury,DILI)机制奠定基础。方法分别给予小鼠高、中、低剂量异烟肼(120,60,30 mg·kg-1·d-1,ig)1、2、3个月后,眼球采血,通过血清生化指标和肝组织病理学评价异烟肼的肝损伤程度;采用Western Blotting技术检测肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白2、胆盐输出泵、P-糖蛋白和Na+-牛磺酸钠共转运体的表达变化。结果用高、中、低剂量异烟肼干预小鼠后,其转运体多药耐药相关蛋白2、胆盐输出泵、P-糖蛋白和Na+-牛磺酸钠共转运体的表达均发生了变化,且在高、中剂量下呈现显著性差异(P<0.05)。此外,本实验还发现异烟肼干预小鼠的血清生化指标和组织病理学的变化明显滞后于转运体的显著变化。结论异烟肼肝毒性可能与肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白2、胆盐输出泵、P-糖蛋白和Na+-牛磺酸钠共转运体介导的内、外源性物质的过度蓄积有关。

海藻甘草配伍后水提取物对大鼠肝细胞膜Ntcp的影响

目的初步考察中药"十八反"中反药对甘草海藻不同配伍组对大鼠肝脏转运蛋白Na+-牛磺胆酸共转运多肽(Ntcp)的影响。方法 Wistar大鼠48只,随机分为6组,分别灌胃给予甘草单煎液、海藻单煎液和甘草海藻不同比例配伍(1∶1、1∶3、3∶1)合煎液及生理盐水14 d,各组给药剂量按生药量计算均为6 g·kg-1。通过免疫印迹方法考察大鼠肝细胞膜上Ntcp表达的变化,测定大鼠血清生化指标并观察大鼠肝脏组织病理学变化情况。结果各组大鼠灌胃14 d后,与正常组相比,海藻单煎液组Ntcp表达明显上升,其值是正常组的150%(P<0.01);甘草单煎液对Ntcp的表达亦有轻微上调的趋势(P>0.05);甘草海藻1∶1组Ntcp的表达量较正常组下降了35%(P<0.05);甘草海藻1∶3和3∶1配伍组对大鼠肝脏Ntcp的表达影响均不明显(P>0.05)。结论海藻单煎液可显著提高大鼠肝脏Ntcp的表达,甘草单煎液也能使Ntcp的表达有所升高,但当两者配伍后会发生相互拮抗,使Ntcp的表达量下降。

海藻多糖对利福平和异烟肼诱导的大鼠肝损伤保护作用

目的考察海藻多糖(SP)对异烟肼(INH)与利福平(RIF)合用所致氧化型肝损伤的保护作用以及对肝脏转运体Na+-牛磺胆酸共转运多肽(Ntcp)的调控作用。方法 Wistar雄性大鼠24只,随机分为正常组、INH-RIF组和SP组,每组8只。INH-RIF组:灌胃INH和RIF各100 mg/(kg·d);SP组:灌胃SP 720 mg/(kg·d),3 h后灌胃INH和RIF各100 mg/(kg·d)。在给药21 d后,处死大鼠,通过血清生化指标、肝脏病理、氧化指标及Ntcp蛋白表达对各组大鼠进行评价对比。结果与INH-RIF组相比,SP组明显降低血清天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶和总胆汁酸(P<0.05或P<0.01),缓解肝脏的病变;能降低丙二醛含量,增加肝脏谷胱甘肽含量,对Ntcp的表达具有明显的上调作用(P<0.05或P<0.01)。结论 SP能明显改善INH与RIF诱导的肝脏氧化损伤,且能增加肝脏转运体Ntcp的表达,缓解肝脏病变。

大黄-黄芩配伍应用对脑损伤早期癫痫易感性的影响

目的：研究大黄-黄芩配伍应用对小鼠脑损伤早期癫痫易感性的影响,探讨该药对抗脑损伤后癫痫的机制。方法：将SPF级C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组,模型组,大黄-黄芩药对低（1 g·kg^-1）,高剂量组（4 g·kg^-1）及阳性组（2.6 g·kg^-1丙戊酸钠）。除空白组外,其余各组采用自由落体法建立小鼠封闭性颅脑损伤模型,于脑损伤后给予相应药物灌胃治疗,连续7 d。于末次给药后给予戊四氮（pentylenetetrazole,PTZ）亚惊厥剂量刺激,通过行为学观察各组小鼠的癫痫发作潜伏期及平均发作强度,脑电图（electroencephalogram,EEG）分析小鼠的脑部放电图谱,统计0-20 Hz的放电总和;免疫组化法（immunohistochemistry,IHC）计数海马CA1,CA3区胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的阳性细胞数;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测神经元Na^＋-K^＋-2Cl^-共转运体-1（NKCC1）的蛋白表达水平。结果：与空白组比较,模型组的小鼠癫痫发作潜伏期明显缩短,脑部异常高频放电明显增多,海马CA1,CA3区的GFAP阳性细胞计数显著增加（P〈0.05）,且神经元NKCC1的表达也较高（P〈0.05）;与模型组比较,药对低、高剂量均可延长癫痫发作的潜伏期,减少脑部异常放电,降低海马区GFAP阳性细胞数以及神经元NKCC1蛋白的表达,且药对高剂量组与模型组比较具有显著性差异（P〈0.05）。结论：大黄-黄芩配伍应用可降低脑损伤早期癫痫的易感性,作用机制可能与星形胶质细胞的调控作用有关。

甘草酸单铵保护利福平致大鼠肝损伤的机制初探

目的:本文基于肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2,Mrp2)和Na+-牛磺酸钠共转运体(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,Ntcp),初步探究甘草酸单铵(monoammonium glycyrrhizinate,MAG)对利福平(rifampicin,RIF)致大鼠肝损伤的保护作用及机制。方法:Wistar雄性大鼠随机分为3组:对照组(control组):灌胃等容量的生理盐水;RIF肝损伤组(RIF组):灌胃RIF60 mg·kg-1·d-1;MAG治疗组(MAG+RIF组):灌胃MAG45 mg·kg-1·d-13 h后灌胃RIF60 mg·kg-1·d-1。给药第7,14,21天时,各组分别随机取5只大鼠分离血清测定生化指标;取肝组织做病理切片,观察肝脏组织病理学变化并进行肝组织学活动指数(HAI)评分;采用Western blotting法检测肝组织Mrp2和Ntcp蛋白表达量。结果:与对照组相比,RIF组给药7,14,21 d时,其部分血清生化指标呈明显上升趋势,肝脏病理学HAI分值显著增加(P<0.01);MAG+RIF组血清生化指标与对照组之间无显著差异,与RIF组相比其HAI评分显著降低(P<0.05)。给药7,14,21 d时,RIF组较对照组Mrp2的表达均显著升高(P<0.05),而MAG+RIF组Mrp2的表达均显著低于RIF组(P<0.05)。给药期间,各组Ntcp的表达均无显著差异(P>0.05)。结论:利福平肝损伤机制可能与其上调Mrp2有关,MAG可保护利福平诱导的肝损伤,且其保肝作用可能与其下调Mrp2有关。

人外周血单个核细胞与肝细胞HBV受体蛋白的表达

目的检测乙型肝炎病毒(HBV)受体蛋白在人外周血单个核细胞(PBMC)与肝细胞的表达情况,探讨HBV进入PBMC的可能途径,以期了解HBV感染PBMC的可能机制。方法用淋巴细胞分离液分离人PBMC。用RIPA提取人PBMC和肝细胞(肝脏肿瘤癌旁组织)总蛋白,采用Western blot以检测HBV受体蛋白在两种细胞的表达情况。结果 Western blot检测肝细胞HBV受体蛋白阳性,与hNTCP抗体反应条带位于(35~40)×103之间,与预期一致;人PBMC蛋白无此反应条带,即hNTCP检测阴性。结论 PBMC不表达肝细胞表面的HBV受体蛋白,病毒可能循非受体途径进入PBMC,或PBMC表面的HBV受体与肝细胞表面的HBV蛋白受体蛋白不同。关于HBV感染PBMC的具体机制尚需进一步研究。

甘草酸单铵对异烟肼致大鼠肝损伤的保护作用及其机制

目的:考察甘草酸单铵(MAG)对异烟肼(INH)诱导的大鼠肝损伤的保护作用及其对肝脏转运体Na+-牛磺胆酸共转运多肽(Na+-taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)及多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2,Mrp2)的调节作用。方法:Wistar雄性大鼠45只,随机分为9组,即对照组,异烟肼肝损伤组(INH组),甘草酸单铵治疗组(MAG组),以上每组又各分为干预7,14,21 d组。INH组大鼠灌胃INH60 mg·kg-1·d-1;MAG组大鼠灌胃MAG45 mg·kg-1·d-1 3 h后灌胃INH。干预结束后,处死大鼠,通过血清生化指标、肝脏病理及Ntcp、Mrp2蛋白表达对各组大鼠进行评价对比。结果:血清生化指标与肝脏病理结果显示,INH诱导的大鼠肝损伤具有时间依赖性,而MAG对INH诱导的大鼠肝损伤具有保护作用,且存在时间依赖性;与INH组相比,MAG干预21 d对肝脏转运体Ntcp及Mrp2表达具有明显下调作用(P<0.05)。结论:MAG对INH诱导的肝损伤的保护作用可能与下调肝细胞膜转运体Ntcp与Mrp2的表达有关。

果糖诱导盐敏感性高血压的肾脏机制(英文)

从过去一个世纪以来,果糖的进食量急剧增加,并且与糖尿病、肥胖、肾衰、高血压等的发生密切相关。目前越来越多的证据证明过量的果糖饮食会引起盐敏感性高血压,其发生机制十分复杂,但是肾脏可能在其中扮演着重要的角色。本文主要阐述了果糖诱导盐敏感性高血压的肾相关机制,包括肾素原受体依赖的肾内肾素-血管紧张素系统的活化,肾内Na^+转运体钠氢交换子3 (sodium/hydrogen exchanger 3, NHE3)和Na-K-2Cl共转运体(Na/K/2Cl cotransporter, NKCC2)的活化,肾内尿酸产生的增加,肾内一氧化氮合成的降低,以及肾内活性氧产生的增加,并以此为理论依据提出潜在的治疗盐敏感性高血压的靶点或策略。