Na-K-2Cl联合转运子1在小鼠耳蜗侧壁组织中的表达及意义

目的观察Na-K-2Cl联合转运子1(NKCC1)在小鼠耳蜗组织中的表达及分布,并探讨其与耳蜗听觉功能的关系。方法选用健康正常CBA/CaJ小鼠为实验组,NKCC1-/-(突变纯合子,全基因敲除)小鼠为对照组,利用听性脑干反应检测两组动物的听觉功能,取各组小鼠的耳蜗行冰冻切片,同时采用免疫组织化学技术和免疫荧光组织化学法检测Na-K-2Cl联合转运子1在实验组与对照组小鼠的耳蜗中的表达和分布。结果实验组小鼠的ABR反应阈值为18±3.50dBSPL、对照组小鼠在100dBSPL刺激时无反应。NKCC1阳性反应呈棕黄色,主要分布于实验组小鼠耳蜗血管纹边缘细胞和螺旋韧带下部,在耳蜗血管纹边缘细胞和螺旋韧带下部的纤维细胞、纹上区也有适度表达,而在对照组未见阳性表达。图像分析显示,两组灰度值差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论在正常小鼠耳蜗,Na-K-2Cl联合转运子1主要在血管纹边缘细胞及螺旋韧带下部分布表达,并与耳蜗听觉生理功能密切相关。

C57BL/6J小鼠耳蜗血管纹Na-K-2Cl联合转运子-1的年龄相关性变化

目的观察不同周龄C57BL/6J(C57)小鼠听力及血管纹Na-K-2Cl联合转运子-1(Na-K-2Cl co-transporter-1,NKCC1)表达的情况。方法应用听性脑干反应(auditory brainstemresponse,ABR)分别检测4、8、16、32、48、64周龄组C57小鼠的听力;采用免疫组织化学染色法观察其血管纹NKCC1表达的变化。结果C57小鼠随年龄增大出现听力下降,自16周龄时ABR阈值出现显著性增高(P<0.05);血管纹NKCC1表达也出现年龄相关性减少,其灰度值自16周龄时显著增高(P<0.01)。结论C57小鼠血管纹NKCC1蛋白表达随年龄增长而减少,可能与年龄相关性听力损失具有一定相关性。

Na-K-2Cl共同转运蛋白(NKCC2)基因研究进展

Na-K-2Cl共同转运体在维持肾小管髓袢升支粗段对NaCl的重吸收、机体容量控制方面起重要作用,NKCC2基因突变可使其编码的蛋白质结构、功能改变,使体内血压调节的稳态发生变化。

小鼠耳蜗Na-K-2Cl联合转运子-1的定位及其缺失后的耳蜗组织学改变

目的探讨耳蜗钾循环途径中Na-K-2Cl联合转运子-1(Na-K-2Clcotransporter-1,NKCC1)在小鼠耳蜗的分布及NKCC1基因敲除后耳蜗组织学的改变。方法选用10只C57BL/6J小鼠((NCKK1+/+)和5只NKCC1基因敲除小鼠(NKCC1-/-),应用听性脑干反应(auditorybrainstemresponse,ABR)分别检测NCKK1+/+小鼠和NKCC1-/-小鼠的听功能,采用免疫组织化学及甲苯胺蓝染色的方法观察NKCC1在NCKK1+/+小鼠耳蜗的定位及NKCC1-/-小鼠耳蜗组织学的变化。结果NCKK1+/+小鼠ABR平均阈值为31±5.36dBSPL,而NKCC1-/-小鼠听力完全丧失。NKCC1在NCKK1+/+型小鼠耳蜗主要分布在血管纹上皮(边缘细胞)和螺旋韧带下部纤维细胞,在纹上区和螺旋缘处的纤维细胞中也有适度表达;NKCC1-/-小鼠耳蜗前庭膜塌陷,中阶完全消失,内毛细胞、外毛细胞、支持细胞减少,Corti隧道消失。结论NKCC1在耳蜗的定位与耳蜗钾循环密切相关,NKCC1缺失会导致耳蜗正常结构的破坏,继而影响耳蜗生理功能。

Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白在L6骨骼肌细胞调节性体积增加中的作用(英文)

在许多类型的哺乳动物细胞中,细胞体积对介导胰岛素发挥其生理功能起关键作用.细胞体积调节机制在胰岛素的主要靶组织骨骼肌中尤为重要.为了解该组织中细胞体积调节的机制,对Na+K+2Cl-共转运蛋白在大鼠L6骨骼肌细胞中的表达及其在调节性体积增加中的作用进行了研究.应用免疫印迹法,在L6肌管细胞中检测到分子量为170kD的钠钾氯共转运蛋白.K+(86Rb+)输入实验结果表明,54%的86Rb+是通过钠钾氯共转运蛋白输入细胞的,而其余86Rb+的输入是通过钠钾三磷酸腺苷酶和其他未知转运蛋白实现的.当L6细胞被置于高渗透压溶液(420mosmolL)中,导致细胞体积减少40%,同时钠钾氯共转运蛋白的活性迅速增加(高达2倍).细胞体积在60min内恢复至正常,但在钠钾氯共转运蛋白抑制剂bumetanide存在时,这种调节性体积增加的过程被阻断.这些结果表明,L6肌管细胞表达具有生理活性的钠钾氯共转运蛋白;此转运蛋白被高渗透压诱导造成的细胞体积缩小激活的现象表明,它是细胞调节性体积增加(RVI)机制中的关键元素,在L6骨骼肌细胞体积的调节中起重要作用.

微小RNA-K1-5p调控G1/S期相关基因的表达影响内皮细胞周期

目的探讨卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)相关疱疹病毒(KSHV)编码的微小RNAs(miR),如miR-K1-5p,对KS细胞周期的调控作用及其机制。方法该研究进行于2020年1—12月,人脐静脉内皮细胞购自美国ScienCell。生物信息学软件预测miR-K1-5p的靶基因。双萤光素酶试验验证miR-K1-5p的靶基因[细胞周期素依赖性激酶抑制剂4(CDKN4)]。将miR-K1-5p模拟物转染后,行蛋白质印迹法(Western blotting)和q-PCR检测,分析G1/S期相关基因CDKN4、细胞周期蛋白A/细胞周期素依赖性激酶2(Cyclin A/CDK2)、细胞周期蛋白D2/细胞周期素依赖性激酶4(Cyclin D2/CDK4)的表达。碘化丙啶(PI)染色检测miR-K1-5p对内皮细胞(HUVECs)周期的影响。结果miR-K1-5p靶向CDKN4(miR-K1-5p mimics+CDKN4-WT组、mimics NC+CDKN4-WT组、miR-K1-5p mimics+CDKN4-MUT组、mimics NC+CDKN4-MUT组萤光素酶活性分别为0.42±0.05、0.81±0.04、0.82±0.03、0.80±0.05),负性调控CDKN4的表达(P<0.001),正性调控Cyclin A/CDK2和CyclinD2/CDK4的表达(P<0.05)。此外,miR-K1-5p可以加速细胞周期进程,促进G1/S期转换[S+G2期/G1+S+G2期:mimics组(23.37±0.29)%比mimics NC组(15.00±0.75)%,G1期:mimics组(76.63±0.28)%比mimics NC组(85.00±0.76)%,S期:mimics组(15.34±0.36)%比mimics NC(8.45±0.20)%,G2期:mimics组(8.02±0.17)%比mimics NC组(6.55±0.80)%]。结论miR-K1-5p调控G1/S期相关基因的表达影响内皮细胞周期。

Na^+-K^+-2Cl^-共转运体不同亚型在大鼠胃黏膜的差异性分布及表达

目的研究Na+-K+-2Cl-共转运体(Na+-K+-2Cl-co-transporter,NKCC)的两种亚型在胃不同部位黏膜层的差异性分布及表达的意义。方法用免疫荧光组织化学法和实时定量PCR技术检测NKCC不同亚型NKCC1与NKCC2在正常大鼠胃不同部位(胃底、胃体和胃窦)黏膜组织的分布和表达。结果①免疫荧光组织化学显示:NKCC1多分布于胃底、胃窦黏膜底部及胃体黏膜中下部,细胞膜表达最多;而NKCC2则多分布于胃体、胃窦黏膜全层及胃底黏膜上1/3部,细胞质、细胞膜均有表达。②实时定量PCR显示:NKCC1的mRNA在正常大鼠胃体表达最高,NKCC2的mRNA则在胃窦表达最高。结论正常大鼠NKCC1与NKCC2在不同部位胃黏膜上皮细胞的分布及表达含量不同,NKCC1多分布在黏膜底部或中下部,NKCC2多分布于黏膜顶部或全层。

常压氧对大鼠脑缺血再灌注损伤Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白1型的影响

目的:研究常压氧(NBO)对大鼠脑缺血再灌注损伤Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白1型(NKCC1)的影响。方法:采用线栓法构建大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),术后2h进行神经功能评分,将其评分与假手术组进行比较。MCAO模型构建成功者进行再灌注,随机分为NBO组和模型组,NBO组于再灌注后采用体积分数60%NBO进行治疗。各组大鼠分别在0、2、4、6、12和24h处死,取脑组织进行HE染色及Western Blot检测。结果:与假手术组相比,MCAO组神经功能评分显著增高,差异有显著性意义(P<0.05)。HE染色结果显示模型组和NBO组大鼠缺血2h时脑组织均无明显病理结构改变,随着再灌注时间的延长,模型组大鼠脑组织病理改变逐渐增加,而与模型组相比,NBO组大鼠的脑组织病理改变明显减轻。Western Blot检测结果显示模型组和NBO组在起始2h内,脑组织NKCC1蛋白和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达水平与正常脑组织相比没有明显变化(P>0.05),随着再灌注时间的延长,模型组NKCC1蛋白和HIF-1α蛋白表达水平明显增加,NBO组NKCC1蛋白和HIF-1α蛋白表达水平虽有增加但其表达水平仍明显低于模型组(P<0.05)。结论:NBO疗法可以下调脑缺血再灌注后脑组织NKCC1蛋白和HIF-1α蛋白的表达,减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,促进大鼠神经功能恢复,具有脑损伤保护作用。

小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白基因启动子克隆及20-HETE对其转录活性的影响

目的克隆小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白(Nkcc2)基因启动子序列,初步探讨20-HETE对该基因转录活性的调控作用。方法应用生物信息学软件ALiBaba2.1和TRANSFAC TESS分析小鼠Nkcc2基因启动子序列;以小鼠基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增得到小鼠Nkcc2基因启动子区片段(-1 462 bp～+40 bp),并克隆入pGL3-Basic载体,构建萤光素酶报告基因载体;脂质体法将重组报告基因载体转染到HEK293T细胞24 h后,再以20-HETE处理转染细胞2 h,利用双萤光素酶报告基因检测系统分析萤光素酶活性。结果成功构建小鼠Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体;20-HETE可以显著下调小鼠Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体的转录活性。结论 20-HETE通过转录调控机制下调小鼠Nkcc2基因的表达。

三化汤对脑缺血-再灌注老龄大鼠胃肠组织Na^＋-K^＋-ATP酶活性及Ca^2＋-ATP酶活性的影响

目的观察三化汤对脑缺血-再灌注老龄大鼠胃肠组织Na^＋-K^＋-ATP酶活性、Ca^2＋-ATP酶活性的影响。方法将大鼠随机分为正常对照组（空白组）、模型组、三化汤组、西药对照组（尼莫地平）、中成药对照组（血栓心脉宁）。采用双侧颈总动脉结扎方法制备脑缺血模型，脑缺血1 h后，再灌注30 min。取出各组大鼠胃组织和小肠组织各5-20 mg制成匀浆，测定ATP酶（Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶）活性。结果与空白组比，模型组胃肠组织Na^＋-K^＋-ATP酶活性、Ca^2＋-ATP酶活性明显降低（P〈0.01）；与模型组比，用药各组胃肠组织Na^＋-K^＋-ATP酶活性、Ca^2＋-ATP酶活性均明显升高（P〈0.05）；其中三化汤组胃肠组织Na^＋-K^＋-ATP酶活性明显高于尼莫地平组（P〈0.05），Ca^2＋-ATP酶活性明显高于血栓心脉宁组（P〈0.05）。结论三化汤能明显升高脑缺血-再灌注老龄大鼠胃肠组织Na^＋-K^＋-ATP酶活性、Ca^2＋-ATP酶活性，对脑缺血-再灌注老龄大鼠胃肠损伤有一定保护作用。

Localization and vasopressin regulation of the Na^+-K^+-2Cl^- cotransporter in the distal colonic epithelium

AIM: To investigate whether Na+-K+-2Cl- cotransporter (NKCC2) is expressed in the mouse distal colonic epithelia and whether it is regulated by vasopressin in the colon.

Na^+/H^+交换、Na^+/K^+/2Cl^-转运体抑制剂对缺血大鼠心脏保护作用的研究

目的 研究 Na+ /H+ 交换抑制剂阿米洛利 (Am iloride)、Na+ /K+ /2 Cl- 协同转运抑制剂呋塞米 (Furosemide)对长时间低温保存下离体大鼠心脏的保护作用。方法 建立 L angendorff及工作心脏灌注模型。实验组用 St.Thomas- 2 (STH- 2 )液 +阿米洛利 +呋塞米停搏并保存其中 ,对照组只用 STH - 2停搏、保存。置 7℃环境 5 h后恢复灌流。观察血流动力学、心肌酶学及超微结构的变化。结果 实验组冠状动脉流量 (CAF)、左心室收缩压 (L VSP)、左心室压力变化速率 (± dp/dt)的恢复率均优于对照组 (P<0 .0 1) ;肌酸磷酸激酶 (CPK)、乳酸脱氢酶 (L DH)漏出量明显少于对照组 (P<0 .0 5 ) ;心肌组织中 Na+ - K+ - ATP酶、Ca2 + - ATP酶和 Ca2 + - Mg2 + - ATP酶活力均显著高于对照组 (P<0 .0 1) ;实验组的心肌细胞超微结构得到较好的保护。结论 Na+ /H+ 交换、Na+ /K+ /2 Cl-

醋酸泼尼松龙对豚鼠耳蜗血管纹内Na^+/K^+/2Cl^-联合转运蛋白的影响

目的观察醋酸泼尼松龙对豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞内Na^+/K^+/2Cl-联合转运蛋白的影响。方法筛选健康白色红目豚鼠40只,随机分成醋酸泼尼松龙组和对照组。利用糖皮质激素对醋酸泼尼松龙组豚鼠制造诱发性肾虚动物模型,按50mg/(kg·d)的剂量每日肌注醋酸泼尼松龙注射液,对照组则每日肌注生理盐水0.3ml/只,共17天。造模结束后,进行ABR阈值测试及90dBSPL给声强度下Ⅲ波潜伏期测试,同时进行免疫组化染色及Na^+/K^+/2Cl-联合转运蛋白积分光密度值(IOD值)测量。结果注射后,醋酸泼尼松龙组豚鼠ABR阈值显著提高,且90dBSPL给声强度下Ⅲ波潜伏期明显延后,两者与对照组之间有显著性差异(P<0.01)。且与对照组相比,醋酸泼尼松龙组豚鼠耳蜗血管纹Na^+/K^+/2Cl-联合转运蛋白显著降低(P<0.01),免疫组化反应明显减弱。结论经醋酸泼尼松龙注射后,豚鼠出现类似"肾虚"的证候,引起耳蜗血管纹边缘细胞中Na^+/K^+/2Cl-联合转运蛋白表达减少,可能是导致听觉功能的减退原因之一。

力竭游泳运动对肠组织MDA、Free-SH、ATP含量、Na~＋-K~＋-ATPase和Ca^(2＋)-ATPase活性的影响

探讨力竭性运动引起的氧化应激对肠功能的影响及运动性肠功能紊乱的原因,32只SD雄性大鼠随机分为4组:即对照组(C);运动后即刻组EX;运动后30min组(EX30);运动后60min组(EX60),测定力竭性游泳后不同时相肠组织匀浆MDA、游离巯基和ATP含量。结果:运动后肠组织MDA含量在运动后30min、60min显著性增加(P<0.01);运动后Free-SH含量在运动后30min(P<0.05)和运动后60min后(P<0.01)显著下降;运动后30min组ATP含量显著下降(P<0.01);运动后30min,Ca2+-ATPase活性下降(P<0.05);运动后60min,Na+-K+-AT-Pase和Ca2+-ATPase活性均显著下降(P<0.05)。结论:运动源性自由基产生增加,使肠组织中游离巯基被氧化,导致ATP含量下降,Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性下降,可能是造成运动性肠功能紊乱的重要因素之一。

Na_2O-K_2O-CaO-Al_2O_3-SiO_2系统熔析乳浊釉的研究

采用正交试验法 ,对传统的Na2 O -K2 O -CaO -Al2 O3-SiO2 系统釉进行了较全面系统的研究 ,找到了影响该系统乳浊釉乳浊的主次因素 ,获得了性能良好的乳浊釉及其较优乳浊釉配方。借助XRD分析 。

不锈钢在熔融(Li,Na,K)_2CO_3-(Na,K)Cl中的腐蚀行为

为了探讨在熔融碳酸盐中加入氯化物对不锈钢的腐蚀作用的影响,采用浸泡方法研究了304和310不锈钢在添加了氯化物的700℃熔融(Li,Na,K)2CO3中的腐蚀行为。结果表明,两种不锈钢都遭受了严重腐蚀,不锈钢的快速腐蚀与循环的氯化-氧化反应有关。

Role of the Na^+/K^+/2Cl^- cotransporter NKCC1 in cell cycle progression in human esophageal squamous cell carcinoma

AIM: To investigate the role of Na+/K+/2Cl- cotransporter 1 (NKCC1) in the regulation of genes involved in cell cycle progression and the clinicopathological significance of its expression in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC).

Aβ1～42及二氮嗪预处理对神经细胞Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达的影响

目的探讨Aβ1~42及二氮嗪预干预对神经细胞Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达的影响。方法原代培养大鼠皮层海马神经细胞,随机分为空白对照组、Aβ1~42组(2μmol/L)、二氮嗪(50μmol/L)预处理1 h后Aβ1~42组、单独二氮嗪预处理组,各组又分为24、72 h两个时间点,采用免疫荧光及免疫印迹法检测干预后不同培养时间细胞Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达水平的变化。结果免疫荧光显示:Aβ1~42作用细胞72 h降低了Na+-K+-ATP酶β亚基荧光强度;而经二氮嗪预处理后Aβ1~42作用72 h,与单独Aβ1~42组相比较荧光强度有所增强。Western印迹显示:二氮嗪预处理神经细胞1 h协同Aβ1~42作用24 h后及单独二氮嗪组Na+-K+-ATP酶β亚基的蛋白表达明显低于对照组及单独Aβ1~42组(P<0.01)。Aβ1~42作用神经细胞72 h后,Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达较对照组显著降低(P<0.05);二氮嗪预处理1h协同Aβ1~42共同作用于神经细胞72 h后,与单独Aβ1~42组相比较,增加了Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达量(P<0.05)。结论 Aβ1~42作用72 h,Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达量降低,二氮嗪预处理1 h协同Aβ1~42共同作用于神经细胞72 h,Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达量升高。

离子色谱法测定Na_3PO_4·12H_2O中的杂质Cl^-和SO_4^(2-)的含量

建立了一种用离子色谱法同时测定Na_3PO_4·12H_2O中的Cl^-和SO_4^(2-)的分析方法。该方法采用分离时间20min,分离度为3.02的Metrosep A Supp 4 250/4.0型色谱柱,柱温为35℃,流速为0.8mL/min。两种离子的标准曲线的相关系数达到了0.9999。Cl^-和SO_4^(2-)的稀释液的测定结果的相对标准偏差分别为1.02%,2.26%;检出限分别为0.010mg/L,0.011mg/L;加标回收率分别96.0%,94.0%。与HG/T 2517-2009中Cl^-和SO_4^(2-)的测定方法相比,该方法的相对误差仅为分别为2.78%和0.00%。因此,该方法具有较高的精密度和准确度,且分析时间短,方法简单,可作为缓蚀阻垢剂Na_3PO_4·12H_2O中的Cl^-和SO_4^(2-)含量分析的常规方法。

NaCl/Na2CO3对BaZr0.8Y0.2O3-δ/ZnO质子导体陶瓷的烧结性能和电导率的影响

拟通过添加烧结助剂(ZnO)和钠盐(NaCl/Na2CO3)来改善BaZr0.8Y0.2O3-δ质子导体陶瓷的烧结性能和电导率。采用机械球磨混合结合高温常压烧结工艺制备BaZr0.8Y0.2O3-δ-ZnO-NaCl/Na2CO3质子导体陶瓷,利用XRD、SEM、EDS和EIS等手段对烧结陶瓷的物相、微观形貌、化学组成和电学性能进行测试表征。结果表明:当烧结工艺为1450℃烧结保温6 h且ZnO添加量达到2%(摩尔分数)时,BZY-2%ZnO陶瓷的致密度和线收缩率分别为95.25%和16.76%,其晶粒尺寸大小约0.8~1μm。当烧结工艺为1400℃烧结保温4 h且NaCl和Na2CO3添加量分别为5%时,BZY-2%ZnO-5%NaCl和BZY-2%ZnO-5%Na2CO3陶瓷的致密度分别为96.71%和97.47%,线收缩率分别为17.89%和19.78%。在湿润空气中,当测试温度为700℃时,BZY-2%ZnO-10%Na2CO3和BZY-2%ZnO-10%NaCl陶瓷的电导率分别为3.124×10^-3 S/cm和2.505×10^-3 S/cm,而未添加NaCl和Na2CO3的BZY-2%ZnO陶瓷的电导率仅为1.292×10^-3 S/cm。添加NaCl和Na2CO3可以提高BZY-2%ZnO陶瓷的烧结性能和电导率。