Na^+-K^+-2Cl^-共转运体不同亚型在大鼠胃黏膜的差异性分布及表达

目的研究Na+-K+-2Cl-共转运体(Na+-K+-2Cl-co-transporter,NKCC)的两种亚型在胃不同部位黏膜层的差异性分布及表达的意义。方法用免疫荧光组织化学法和实时定量PCR技术检测NKCC不同亚型NKCC1与NKCC2在正常大鼠胃不同部位(胃底、胃体和胃窦)黏膜组织的分布和表达。结果①免疫荧光组织化学显示:NKCC1多分布于胃底、胃窦黏膜底部及胃体黏膜中下部,细胞膜表达最多;而NKCC2则多分布于胃体、胃窦黏膜全层及胃底黏膜上1/3部,细胞质、细胞膜均有表达。②实时定量PCR显示:NKCC1的mRNA在正常大鼠胃体表达最高,NKCC2的mRNA则在胃窦表达最高。结论正常大鼠NKCC1与NKCC2在不同部位胃黏膜上皮细胞的分布及表达含量不同,NKCC1多分布在黏膜底部或中下部,NKCC2多分布于黏膜顶部或全层。

海水浸泡开放性颅脑外伤早期水通道蛋白4和Na＋-K＋-2Cl-协同转运蛋白1表达的改变

目的了解海水浸泡开放性颅脑外伤早期水通道蛋白4（AQP4）和Na＋-K＋-2Cl-协同转运蛋白1（NKCCl）的表达，及其与脑水肿和血脑屏障破坏程度的关系。方法选取102只sD大鼠，采用控制性皮质撞击法造成不同程度的脑外伤，致伤后将局部损伤的脑组织浸泡在人工海水或生理盐水中，构建动物模型。采用随机数字表法将大鼠分为海水浸泡组和生理盐水浸泡组，每组51只。另选取17只大鼠作为对照组。观察各组在浸泡后3、8和24h时间点上病理学、脑含水量、血脑屏障开放程度、AQP4蛋白和NKCCl表达水平。结果与生理盐水浸泡组相比较，海水浸泡组AQP4表达水平在浸泡后3h（0．222±0．018）和8h（0．228±0．01S）显著降低，而浸泡后24h（0．462±0．013）表达水平显著升高，并超越生理盐水浸泡组；海水浸泡组NKCCl表达水平24h（0．050±0．012）内均处于明显降低的水平。结论海水浸泡对血脑屏障产生明显破坏，导致海水浸泡开放性颅脑外伤具有脑水肿发生晚但程度重的特点。海水浸泡后AQP4表达水平具有先抑制后促进的特点，其与脑组织含水量有类似的变化，值得进一步研究。

茵栀黄颗粒对胆管结扎大鼠肝细胞膜转运体Mrp2、Ntcp及Bsep表达的影响

目的通过考察茵栀黄颗粒(茵陈、栀子、金银花和黄芩)对肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白2(Multidrugresistance-associated protein 2,Mrp2/ABCC2)、Na+-牛黄胆酸共转运多肽(Na+/taurocholate cotransporter,Ntcp/SLC10A1)及胆盐输出泵(Bile salt export pump,Bsep/ABCB11)表达的影响。方法胆管结扎术制备胆汁淤积大鼠模型;生化检测和HE染色,观察茵栀黄颗粒的干预效果;流式细胞仪测定肝脏转运体Ntcp、Bsep和Mrp2的表达。结果与模型组相比,茵栀黄组肝细胞的脂肪病变和水肿较模型组显著减轻(P<0.05),Mrp2的表达显著升高(P<0.01);但Ntcp、Bsep的表达无明显变化。结论肝细胞膜转运体Mrp2的表达升高可能是茵栀黄颗粒的退黄利胆分子机制之一。

乳源β-酪啡肽7对大鼠葡萄糖吸收的影响及其作用机制

目的:探讨乳源活性肽β-酪啡肽-7(β-Casomorphin-7,β-CM7)应用于食品时对葡萄糖吸收的影响及其作用机制.方法:选用健康成年SD大鼠,分为对照组(0mol/Lβ-CM7),L低剂量组、M中剂量组、H高剂量组(终浓度分别为7.5×10-7,7.5×10-6,7.5×10-5mol/L).利用翻转离体小肠囊模型进行实验:(1)葡萄糖氧化酶法测定翻转后小肠内液葡萄糖含量;(2)比色法测定小肠黏膜Na+-K+-ATP酶活力;(3)荧光定量PCR法分析小肠黏膜组织中钠葡萄糖共转运载体(SGLT-1)和葡萄糖协助扩散转运载体(GLUT-2) mRNA的表达.结果:在离体环境下β-CM7在7.5×10-7-7.5×10-5mol/L浓度下对葡萄糖的吸收均有一定的抑制作用(1.09mol/L,1.24mol/L,1.12mol/L vs 1.74mol/L,P=0.01,0.04,0.02),能够降低Na+-K+-ATP酶活力(85.73,112.06,109.68 vs 114.93,P=0.004,0.73,0.54);荧光定量PCR结果发现:与对照组相比,β-CM7能够显著降低SGLT-1及GLUT-2 mRNA水平(0.46,0.58,0.77 vs 1.11,P=0.20,0.05,0.02;0.50,0.66,0.85 vs 1.14,P=0.30,0.14,0.03).结论:β-CM7可以通过降低Na+-K+-ATP酶活力及下调SGLT-1、GLUT-2 mRNA水平,减少大鼠小肠对葡萄糖的吸收.

NKCC1、KCC2及mTOR相关蛋白4E-BP1在外伤性癫痫中的表达及意义

目的探讨主要表达于神经元细胞膜上的NA^+-K^+-2CL-转运体(NKCC1)、K^+-CL-转运体(KCC2)及表达于神经元细胞质中m TOR通路信号蛋白4E结合蛋白1(4E-BP1)在外伤性癫痫(PTE)癫痫灶中的表达及临床意义。方法收集2010年1月至2015年12月福建医科大学附属第一医院神经外科外伤性癫痫患者术后脑组织标本14例作为实验组;选取脑外伤患者行减压或清创手术获取的和各种病变患者手术入路不可避免要切除的正常脑组织8例作为对照组。用Western blot和实时定量荧光PCR(RT-PCR)检测14例PTE癫痫脑组织、8例对照组"正常脑组织"NKCC1、KCC2、4E-BP1的表达。结果 Western blot显示PTE病灶脑组织中4E-BP1、NKCC1相对灰度值(0.61±0.12、0.92±0.19)高于正常脑组织(0.27±0.05、0.67±0.66),差异有统计学意义(P<0.05)。PTE病灶脑组织中KCC2相对灰度值(0.58±0.99)低于正常脑组织(0.72±0.06),差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示,PTE病灶脑组织中4E-BP1、NKCC1相对灰度值(30.84±1.32、27.81±1.92)高于正常脑组织(26.94±1.24、23.52±0.74),差异有统计学意义(P<0.05)。PTE病灶脑组织中KCC2相对灰度值(21.55±1.01)低于正常脑组织(24.59±1.02),差异有统计学意义(P<0.05)。PTE组中NKCC1/KCC2比值(1.29±0.11)高于对照组(0.96±0.26),差异有统计学意义(P<0.05)。结论NKCC1、KCC2和m TOR通路信号蛋白4E-BP1的异常改变,可能是外伤后脑组织组织学改变及反复癫痫发作的重要分子机制。

布美他尼后处理对大鼠创伤性颅脑损伤后NKCC1表达及脑含水量的影响

目的探讨布美他尼后处理对大鼠创伤性颅脑损伤后Na＋-K＋-2Cl-协同转运蛋白1（NKCC1）表达及脑含水量的影响。方法雄性SD成年大鼠90只,体重220-300 g。采用随机数字表法,将大鼠分为3组：假手术组（S组）、脑创伤组（TBI组）和布美他尼后处理组（TBI-B组）。采用自由落体撞击法制备创伤性颅脑损伤模型。S组接受同样的操作但不接受撞击,TBI-B组于创伤后30 min给予布美他尼30 mg/kg,TBI组给予等量的生理盐水。TBI组和TBI-B组在创伤后12 h测动脉压并取动脉血行血气分析,于创伤后2、12、24 h处死大鼠并取脑,测定皮质NKCC1的表达和脑含水量。结果与S组比较,TBI组和TBI-B组NKCC1表达水平和脑含水量在创伤后12、24 h升高（P〈0.05,P〈0.01）;与TBI组比较,TBI-B组NKCC1表达和脑含水量在创伤后12 h、24 h降低（P〈0.05,P〈0.01）。结论布美他尼后处理可减轻成年大鼠创伤性脑损伤,其机制可能与布美他尼减少大鼠脑组织NKCC1表达有关。

脑水肿相关因子及MRI研究进展

脑水肿是神经系统疾病常见并发症，对其进行评估和治疗具有重要的意义。其发病机制与多种因子如水通道蛋白-4、基质金植蛋白酶、巨噬细胞炎性蛋白-2等有关，扩散加权成像等磁共振成像技术的发展为其早期诊断提供了重要依据，其中水通道蛋白-4与磁共振成像的相关性研究已成为目前的研究热点。就脑水肿分子形成机制及磁其振成像上的相关研究进展加以综述。

离子转运／交换蛋白在缺血性脑卒中后脑水肿中的作用机制

脑卒中严重危害着人类生命健康，目前高居世界人类死因排名第二位、中国居民死亡率第二位，且发病率近年来仍呈上升趋势。脑卒中分为缺血性脑卒中及出血性脑卒中，其中缺血性脑卒中的发病率更高，约占脑卒中总数的80％。

肾素原受体参与肾脏对体液与电解质的调节（英文）

最初的研究发现肾素原受体(PRR)作为肾素与肾素原的特异性受体,参与对肾素-血管紧张素系统(RAS)活性的调节。然而,最新的证据揭示PRR功能的多样性,PRR可以发挥RAS依赖性与非依赖性的作用。PRR可以被furin或ADAM19切割,产生两个功能性片段,一是28 ku可溶性PRR受体(s PRR),另一个是M8.9,后者是vacuolar H+-ATPase的一个亚型,负责H+转运。近些年的研究证明,PRR参与了许多的生理与病理生理过程的调节。比如,PRR通过调节集合管水通道-2(AQP2)与髓袢升枝粗段(TAL)Na^+,K^+,Cl^-共转运蛋白(NKCC2)的调节而决定尿液浓缩功能;PRR通过介导局部醛固酮的产生而促进K+的排泄;肾脏PRR过度激活介导了血管紧张素II与果糖/高盐诱导的高血压。总之,PRR是肾脏生理与病理生理过程的新的调节因子。

β-CM5对离体大鼠小肠葡萄糖吸收的影响

为了探讨β-酪啡肽-5(β-CM5)对大鼠小肠葡萄糖吸收的影响,利用翻转的离体小肠模型,通过测定60 min内β-CM5不同浓度组肠囊内葡萄糖含量及葡萄糖的转运率;测定离体肠道黏膜α-葡萄糖苷酶、Na+-K+-ATP酶活力,分析大鼠小肠钠依赖性葡萄糖共转运载体(SGLT-1)及葡萄糖转运载体2(GLUT-2)mRNA表达水平,揭示β-CM5对葡萄糖吸收影响及机制。结果:不同浓度β-CM5肠囊内葡萄糖的转运量及转运率均显著低于对照组;β-CM5组小肠黏膜中α-葡萄糖苷酶和Na+-K+-ATP酶活力显著低于对照组;β-CM5组小肠黏膜中SGLT-1、GLUT-2 mRNA表达量与对照组相比均显著性下调。结果表明:β-CM5可以通过抑制葡萄糖吸收的相关酶活性,下调葡萄糖转运载体mRNA的表达,从而抑制肠道葡萄糖的吸收,提示β-CM5可能具有降糖作用。

大黄-黄芩配伍应用对脑损伤早期癫痫易感性的影响

目的：研究大黄-黄芩配伍应用对小鼠脑损伤早期癫痫易感性的影响,探讨该药对抗脑损伤后癫痫的机制。方法：将SPF级C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组,模型组,大黄-黄芩药对低（1 g·kg^-1）,高剂量组（4 g·kg^-1）及阳性组（2.6 g·kg^-1丙戊酸钠）。除空白组外,其余各组采用自由落体法建立小鼠封闭性颅脑损伤模型,于脑损伤后给予相应药物灌胃治疗,连续7 d。于末次给药后给予戊四氮（pentylenetetrazole,PTZ）亚惊厥剂量刺激,通过行为学观察各组小鼠的癫痫发作潜伏期及平均发作强度,脑电图（electroencephalogram,EEG）分析小鼠的脑部放电图谱,统计0-20 Hz的放电总和;免疫组化法（immunohistochemistry,IHC）计数海马CA1,CA3区胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的阳性细胞数;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测神经元Na^＋-K^＋-2Cl^-共转运体-1（NKCC1）的蛋白表达水平。结果：与空白组比较,模型组的小鼠癫痫发作潜伏期明显缩短,脑部异常高频放电明显增多,海马CA1,CA3区的GFAP阳性细胞计数显著增加（P〈0.05）,且神经元NKCC1的表达也较高（P〈0.05）;与模型组比较,药对低、高剂量均可延长癫痫发作的潜伏期,减少脑部异常放电,降低海马区GFAP阳性细胞数以及神经元NKCC1蛋白的表达,且药对高剂量组与模型组比较具有显著性差异（P〈0.05）。结论：大黄-黄芩配伍应用可降低脑损伤早期癫痫的易感性,作用机制可能与星形胶质细胞的调控作用有关。

甘草酸单铵保护利福平致大鼠肝损伤的机制初探

目的:本文基于肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2,Mrp2)和Na+-牛磺酸钠共转运体(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,Ntcp),初步探究甘草酸单铵(monoammonium glycyrrhizinate,MAG)对利福平(rifampicin,RIF)致大鼠肝损伤的保护作用及机制。方法:Wistar雄性大鼠随机分为3组:对照组(control组):灌胃等容量的生理盐水;RIF肝损伤组(RIF组):灌胃RIF60 mg·kg-1·d-1;MAG治疗组(MAG+RIF组):灌胃MAG45 mg·kg-1·d-13 h后灌胃RIF60 mg·kg-1·d-1。给药第7,14,21天时,各组分别随机取5只大鼠分离血清测定生化指标;取肝组织做病理切片,观察肝脏组织病理学变化并进行肝组织学活动指数(HAI)评分;采用Western blotting法检测肝组织Mrp2和Ntcp蛋白表达量。结果:与对照组相比,RIF组给药7,14,21 d时,其部分血清生化指标呈明显上升趋势,肝脏病理学HAI分值显著增加(P<0.01);MAG+RIF组血清生化指标与对照组之间无显著差异,与RIF组相比其HAI评分显著降低(P<0.05)。给药7,14,21 d时,RIF组较对照组Mrp2的表达均显著升高(P<0.05),而MAG+RIF组Mrp2的表达均显著低于RIF组(P<0.05)。给药期间,各组Ntcp的表达均无显著差异(P>0.05)。结论:利福平肝损伤机制可能与其上调Mrp2有关,MAG可保护利福平诱导的肝损伤,且其保肝作用可能与其下调Mrp2有关。

甘草酸单铵对异烟肼致大鼠肝损伤的保护作用及其机制

目的:考察甘草酸单铵(MAG)对异烟肼(INH)诱导的大鼠肝损伤的保护作用及其对肝脏转运体Na+-牛磺胆酸共转运多肽(Na+-taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)及多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2,Mrp2)的调节作用。方法:Wistar雄性大鼠45只,随机分为9组,即对照组,异烟肼肝损伤组(INH组),甘草酸单铵治疗组(MAG组),以上每组又各分为干预7,14,21 d组。INH组大鼠灌胃INH60 mg·kg-1·d-1;MAG组大鼠灌胃MAG45 mg·kg-1·d-1 3 h后灌胃INH。干预结束后,处死大鼠,通过血清生化指标、肝脏病理及Ntcp、Mrp2蛋白表达对各组大鼠进行评价对比。结果:血清生化指标与肝脏病理结果显示,INH诱导的大鼠肝损伤具有时间依赖性,而MAG对INH诱导的大鼠肝损伤具有保护作用,且存在时间依赖性;与INH组相比,MAG干预21 d对肝脏转运体Ntcp及Mrp2表达具有明显下调作用(P<0.05)。结论:MAG对INH诱导的肝损伤的保护作用可能与下调肝细胞膜转运体Ntcp与Mrp2的表达有关。

果糖诱导盐敏感性高血压的肾脏机制(英文)

从过去一个世纪以来,果糖的进食量急剧增加,并且与糖尿病、肥胖、肾衰、高血压等的发生密切相关。目前越来越多的证据证明过量的果糖饮食会引起盐敏感性高血压,其发生机制十分复杂,但是肾脏可能在其中扮演着重要的角色。本文主要阐述了果糖诱导盐敏感性高血压的肾相关机制,包括肾素原受体依赖的肾内肾素-血管紧张素系统的活化,肾内Na^+转运体钠氢交换子3 (sodium/hydrogen exchanger 3, NHE3)和Na-K-2Cl共转运体(Na/K/2Cl cotransporter, NKCC2)的活化,肾内尿酸产生的增加,肾内一氧化氮合成的降低,以及肾内活性氧产生的增加,并以此为理论依据提出潜在的治疗盐敏感性高血压的靶点或策略。