人肺癌组织细胞Na^+/H^+交换蛋白-1基因的表达与其抗凋亡的关系

目的 :通过对临床人肺癌组织Na+/H+交换蛋白 1(NHE 1)mRNA的表达的检测 ,探讨肿瘤治疗新的特异靶点。方法 :采用RNA原位分子杂交法 (RNA IMH)检测了 2 7例人肺癌组织和正常肺组织NHE 1mRNA的表达。结果 :人肺癌组织细胞NHE 1mRNA的表达显著增强 ,呈过表达 ,而各病理类型间无显著差异。结论 :人肺癌组织细胞中NHE 1mRNA过表达这一区别于正常组织细胞的分子生物学特征与肿瘤细胞的抗凋亡特性的形成密切相关 。

Fas和FasL在Na^+/H^+交换器-1抑制诱导缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡中的作用

目的探讨Fas、FasL在Na+/H+交换器1(NHE1)抑制所诱导的缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡中的作用。方法将转染NHE1特异性核酶基因的大鼠PASMCs置于缺氧条件下(O2的体积分数低于1%)培养。缺氧培养2、6、12、24和48h后用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况;半定量逆转录聚合酶链反应(sqRTPCR)方法检测细胞内fas和fasLmRNA表达变化;免疫细胞化学法检测细胞内Fas和FasL蛋白表达变化。结果转染NHE1特异性核酶基因的大鼠PASMCs在缺氧培养时,其细胞凋亡率随缺氧时间的延长而逐渐升高,但细胞内fas、fasLmRNA及Fas、FasL蛋白表达与对照组细胞比较差异均无显著性。结论Fas/FasL死亡通路可能不参与NHE1抑制而诱导缺氧大鼠PASMCs凋亡的调控。

常压氧对缺血再灌注大鼠大脑皮层1型Na^+/H^+交换蛋白的影响

目的:研究常压氧(NBO)对缺血再灌注大鼠脑组织1型Na^+/H^+交换蛋白(NHE1)水平的影响。方法:采用线栓法构建大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠模型,术后2 h进行神经功能评分。MCAO模型构建成功者进行再灌注,随机分为MCAO组和NBO组,NBO组于再灌注后给予常压氧治疗。各组大鼠分别在NBO治疗后0、2、4、6、12、24 h处死,取脑皮层组织进行HE染色后观察脑组织形态结构的改变,并采用免疫荧光法及Western Blot法检测脑组织NHE1蛋白和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,模型组神经功能评分显著增高(P<0.05);HE染色结果显示MCAO组和NBO组大鼠缺血2 h时大脑皮层组织均无明显病理结构改变,随着再灌注时间的延长,MCAO组大鼠大脑皮层组织病理改变逐渐增加,NBO组大鼠的脑组织病理改变明显减轻;免疫荧光检查和Western Blot检测结果显示MCAO组和NBO组在起始2 h内,大脑皮层组织NHE1和HIF-1α蛋白表达水平没有明显变化,随着再灌注时间的延长,MCAO组NHE1蛋白和HIF-1α蛋白表达水平逐渐增加,NBO组NHE1蛋白和HIF-1α蛋白表达水平稍有增加,但是其表达水平明显低于MCAO组(P<0.05)。结论:常压氧疗法可以下调缺血再灌注后大脑皮层组织NHE1蛋白和HIF-1α蛋白的表达,减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,促进大鼠神经功能恢复,具有脑损伤保护作用。

Na^+/H^+交换器-1在新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤中的作用

目的探讨Na+/H+交换器-1(NHE1)在新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)损伤中的作用。方法以HK-2为研究对象,以200 mL/L新生儿窒息后血清作为攻击因素处理HK-2细胞。首先将实验分为2组:对照组和窒息组,通过免疫组织化学方法检测其HK-2细胞在损伤前后胞内NHE1的表达;再分为3组:对照组、窒息组和5-N-乙基-N-异丙基-阿米洛利(EIPA)干预组(每组8个复孔)。倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HK-2细胞活力,生物化学法检测细胞培养液中LDH漏出率变化。结果与对照组比较,窒息组细胞内和细胞膜上NHE1表达明显增加;与对照组比较,窒息组细胞形态发生改变;窒息组细胞的活细胞数量较对照组明显降低;LDH漏出率明显升高,差异具有显著性意义(Pa=0);与窒息组细胞比较,EIPA干预组细胞形态明显得到改善,活细胞数量明显增加,LDH漏出率降低,差异具有显著性意义(Pa=0)。结论新生儿窒息后血清诱导HK-2细胞NHE1的表达增强可能是导致HK-2损伤的重要机制之一,通过抑制NHE1活性可使细胞损伤减轻,活性增强。

唐古特白刺液泡膜Na^+/H^+逆向运输蛋白基因NtNHX1的克隆与表达分析

植物液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白具有将胞质中过多的Na+区隔化在液泡内,从而减轻过量Na+对细胞质的伤害,同时维持细胞的渗透势,利于植物抵御盐胁迫。以2年生唐古特白刺嫩叶为试材,采用RT-PCR和RACE方法从叶片中获得1个NHX基因cDNA全长,命名为NtNHX1,GenBank登录号为KF751928。序列分析结果表明:NtNHX1全长2 134 bp,包含281 bp的5’非编码区、218 bp的3’非编码区和29 bp的poly(A)尾巴。该cDNA编码1个544个氨基酸的多肽,等电点为8.14,推测分子质量为59.9 kDa。通过与其他物种的NHX1氨基酸序列比对,NtNHX1基因与柑橘同源性最高达81%。NtNHX1基因存在12个跨膜结构域,其中TM3跨膜结构域上具有高度保守的氨氯吡嗪脒结合位点(LFFIYLLPPI)。该位点与Na+有竞争作用。相对荧光定量PCR分析表明,NtNHX1在根、茎、叶中均有表达,叶中的表达量明显高于茎和根;在高浓度盐(200 mmol·L-1NaCl)处理下,NtNHX1在叶中的转录水平显著增强,在处理12 h后表达量达到最大值。由此推断,NtNHX1基因的表达与盐胁迫的诱导和调节有关。

RLM-RACE法扩增獐茅液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因5′-cDNA末端序列

根据已获得的盐生植物獐茅(Aeluropus littoralisvar.sinensisDebeaux)液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白(Na+/H+antiporter)基因部分cDNA片段,设计2条特异引物(GSP1、GSP2),采用RLM-RACE(RNA ligase-medi-ated rapid amplification of 5′and 3′cDNA ends)法获得了其5-′cDNA末端序列,并找出了转录起始位点。该片段长816 bp,与芦苇液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因序列同源性最高达91%,与拟南芥、盐角草、水稻、大麦、小麦的同源性分别为81%、82%、86%、87%和81%,为该基因全长的克隆及启动子的研究奠定了基础。与其它测定基因转录起始位点的方法相比,RLM-RACE方法更快捷、简便、准确。

钠氢交换蛋白-1特异性抑制剂二甲基氨氯吡咪对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响

为了探讨钠氢交换蛋白-1(NHE-1)抑制剂二甲基氨氯吡咪(DMA)对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响,以敏感HL-60细胞为对照,用不同浓度的DMA干预后,荧光指示剂(BCECF/AM)检测法检测细胞内pHi,微量噻唑蓝法(MTT)检测细胞生长的抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,TUNEL法检测原位细胞凋亡,对比HL-60/ADM细胞与HL-60细胞之间的差异。结果显示:HL-60/ADM细胞内pHi较HL-60细胞显著升高;DMA作用下,HL-60/ADM细胞的pHi降低幅度、生长抑制率、细胞凋亡率均显著高于HL-60细胞;当DMA浓度100-150μmol/L时,HL-60/ADM细胞的G0/G1期细胞比率增加幅度、S期及G2/M期细胞比率降低幅度均高于HL-60细胞。结论:NHE-1特异性抑制剂DMA引起HL-60/ADM的pHi降低,可抑制细胞生长并诱导细胞凋亡;且DMA对HL-60/ADM细胞的生长抑制作用显著高于HL-60细胞。

实验性高血氨对肝细胞钠-氢交换蛋白1型转运活性和细胞内pH值的影响

目的研究高血氨对肝细胞钠-氢交换蛋白1型转运活性和细胞内pH值的影响。方法采用5mmol/L NH4Cl处理HL-7702细胞24 h,构建高血氨肝细胞模型,采用细胞计数法、流式细胞法、BCECF-AM法和Western blot法测定细胞数量、凋亡率、细胞内pH值以及NHE1蛋白的转运活性和表达水平。结果高血氨肝细胞模型肝细胞内pH值下降,NHE1蛋白的转运活性和表达水平升高,肝细胞数量降低和凋亡率升高。结论高血氨导致的肝细胞损伤可能与降低肝细胞内pH值,激活NHE1蛋白有关。

生姜对缺血性脑水肿大鼠脑组织Na^+-K^+-2Cl^-联合转运蛋白1型的影响

目的:研究生姜对缺血性脑水肿大鼠脑组织Na^+-K^+-2Cl^-联合转运蛋白1型(Na^+-K^+-2Cl^- combined transporter type 1,NKCC1)表达水平的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型对照组,生姜高、中、低剂量组。通过线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型。各组在造模前、后均给药5d。生姜高、中、低剂量组依次给予生姜10,20,40μL/g,假手术组、模型对照组给予等容积生理盐水10μL/g,灌胃给药,1d1次,连续给药10d。进行神经功能评分,通过病理组织学检查大脑病变情况,干湿重法测大脑含水量,免疫荧光染色法和Western-Blot法研究NKCC1的表达水平。结果:与假手术组对比,模型对照组大鼠出现明显的神经功能障碍,脑组织出现明显梗死灶,脑组织含水量明显升高,NKCC1蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型对照组对比,生姜高、中剂量组神经功能评分降低,脑梗死面积缩小,脑组织含水量降低,NKCC1蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:生姜可能通过降低NKCC1水平,对缺血性脑水肿大鼠产生保护作用。

卡立泊来德对缺血-再灌注大鼠肺组织钠氢交换蛋白-1表达及炎症损伤的影响

目的探讨缺血-再灌注(IR)对肺钠氢交换蛋白-1(NHE-1)表达的影响,及卡立泊来德(cariporide)预处理能否通过抑制NHE-1表达减轻肺组织的炎症损伤。方法 20枚离体灌注的大鼠肺随机分为四组:对照组(C组)、IR组、NHE-1激活剂LiCl预处理组(LiCl组)和cariporide预处理+缺血-再灌注组(CIR组)。再灌注结束后,免疫组化检测肺组织中NHE-1蛋白表达,HE染色观察肺组织病理学改变并行病理评分。结果与C组和CIR组比较,IR组和LiCl组NHE-1表达明显增加(P<0.05),CIR组和C组差异无统计学意义。IR组和LiCl组肺组织病理切片均观察到明显炎症损伤,病理评分明显高于C组和CIR组(P<0.05),CIR组病理评分和C组差异无统计学意义。结论离体的IR大鼠肺组织,NHE-1表达增加,选择性NHE-1抑制剂cariporide能减轻IR导致的肺组织炎症损伤。

Na^+/H^+交换、Na^+/K^+/2Cl^-转运体抑制剂对缺血大鼠心脏保护作用的研究

目的 研究 Na+ /H+ 交换抑制剂阿米洛利 (Am iloride)、Na+ /K+ /2 Cl- 协同转运抑制剂呋塞米 (Furosemide)对长时间低温保存下离体大鼠心脏的保护作用。方法 建立 L angendorff及工作心脏灌注模型。实验组用 St.Thomas- 2 (STH- 2 )液 +阿米洛利 +呋塞米停搏并保存其中 ,对照组只用 STH - 2停搏、保存。置 7℃环境 5 h后恢复灌流。观察血流动力学、心肌酶学及超微结构的变化。结果 实验组冠状动脉流量 (CAF)、左心室收缩压 (L VSP)、左心室压力变化速率 (± dp/dt)的恢复率均优于对照组 (P<0 .0 1) ;肌酸磷酸激酶 (CPK)、乳酸脱氢酶 (L DH)漏出量明显少于对照组 (P<0 .0 5 ) ;心肌组织中 Na+ - K+ - ATP酶、Ca2 + - ATP酶和 Ca2 + - Mg2 + - ATP酶活力均显著高于对照组 (P<0 .0 1) ;实验组的心肌细胞超微结构得到较好的保护。结论 Na+ /H+ 交换、Na+ /K+ /2 Cl-

重组人成骨蛋白-1的离子交换及分子排阻色谱法纯化及其复性研究

经发酵大量表达重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)。SDS-PAGE发现rhOP-1表达量占细菌总蛋白的35%。菌体经裂解、洗涤后,用8mol/L尿素溶解包涵体,离心后提取目的蛋白。经离子交换色谱法对变性状态下的目的蛋白进行纯化,绝大部分杂蛋白被去除,目的蛋白纯度达93%以上。为进一步提高目的蛋白浓度,采用分子排阻色谱法对目的蛋白进行再次纯化,纯度达98%以上。利用降低尿素梯度的方法对纯化的蛋白进行复性,二聚体的含量在50%以上。Westernblot证明了复性后的目的蛋白以单体和有活性的二聚体的形式存在。

羊草液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因LcNHX1的克隆及功能分析

植物Na^+/H^+逆向转运蛋白具有调节pH值和维持细胞内Na^+平衡、减少盐胁迫对植物伤害的功能。本研究从羊草中克隆Na^+/H^+逆向转运蛋白基因LcNHX1,并对它的功能进行了初步分析。该基因全长2022bp,其中ORF区1614bp,编码537个氨基酸。LcNHX1蛋白具有10个跨膜区,且具有NHX蛋白的多个典型结构特征。半定量RT-PCR结果表明,盐(NaCl 400mM)、碱(NaHCO_3150mM)、盐碱(NaCl 200mM+NaHCO_3100mM)、干旱(10%PEG8000)、低温(4℃)和ABA(100μM)均能够不同程度的诱导LcNHX1基因的表达。利用Δnhx1盐敏感酵母突变体进行功能互补试验,结果发现在60mM、100mM NaCl胁迫条件下,转基因酵母Δnhx1+LcNHX1不仅回补了酵母突变株Δnhx1的盐敏感特性,并且具有更高的耐盐能力。通过比较转LcNHX1基因株系与野生型拟南芥幼苗在含有50mM NaCl和8mM NaHCO_3的MS培养基中的生长情况,发现转基因拟南芥株系具有更好的抗盐碱能力。

脑脊液中Na^(+)-K^(+)-Cl^(-)协同转运蛋白1启动子甲基化对重型颅脑损伤患者预后有评估价值

目的:探讨重型颅脑损伤(sTBI)患者脑脊液中Na^(+)-K^(+)-Cl^(-)协同转运蛋白1(NKCC1)基因启动子甲基化的临床意义。方法:招募92例sTBI患者,根据格拉斯哥预后量表(GOS)将患者分为预后良好组(GOS>3分)63例与预后不良组(GOS≤3分)29例,选取同一时间段行腰椎内固定术后脑脊液漏的51例患者作为对照组。收集2组脑脊液样本,采用亚硫酸氢盐测序法(BSP)测定NKCC1启动子区域CpG位点的甲基化状态。采用Logistic回归分析影响sTBI患者预后的风险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估启动子甲基化的预测价值。采用定量反转录聚合酶链式反应法检测NKCC1在sTBI患者脑脊液中mRNA的表达水平。采用Pearson相关系数对启动子甲基化水平与其mRNA表达水平进行相关性分析。结果:预后不良组患者NKCC1的CpG_30.31、CpG_39.40.41位点的甲基化水平低于预后良好组(P均<0.05)。Logistic回归分析显示CpG_30.31、CpG_39.40.41位点甲基化水平是影响sTBI患者预后的独立风险因素(P均<0.05)。ROC曲线分析结果显示CpG_30.31、CpG_39.40.41位点甲基化水平预测sTBI患者预后的曲线下面积(AUC)为0.7085、0.7315(P=0.0014,0.0004)。NKCC1的CpG_30.31、CpG_39.40.41位点甲基化水平与NKCC1的mRNA水平呈负相关(r=-0.2574、-0.1328,P=0.0138、0.0325)。结论:NKCC1启动子甲基化状态对评估sTBI患者预后有价值。

常压氧对大鼠脑缺血再灌注损伤Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白1型的影响

目的:研究常压氧(NBO)对大鼠脑缺血再灌注损伤Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白1型(NKCC1)的影响。方法:采用线栓法构建大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),术后2h进行神经功能评分,将其评分与假手术组进行比较。MCAO模型构建成功者进行再灌注,随机分为NBO组和模型组,NBO组于再灌注后采用体积分数60%NBO进行治疗。各组大鼠分别在0、2、4、6、12和24h处死,取脑组织进行HE染色及Western Blot检测。结果:与假手术组相比,MCAO组神经功能评分显著增高,差异有显著性意义(P<0.05)。HE染色结果显示模型组和NBO组大鼠缺血2h时脑组织均无明显病理结构改变,随着再灌注时间的延长,模型组大鼠脑组织病理改变逐渐增加,而与模型组相比,NBO组大鼠的脑组织病理改变明显减轻。Western Blot检测结果显示模型组和NBO组在起始2h内,脑组织NKCC1蛋白和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达水平与正常脑组织相比没有明显变化(P>0.05),随着再灌注时间的延长,模型组NKCC1蛋白和HIF-1α蛋白表达水平明显增加,NBO组NKCC1蛋白和HIF-1α蛋白表达水平虽有增加但其表达水平仍明显低于模型组(P<0.05)。结论:NBO疗法可以下调脑缺血再灌注后脑组织NKCC1蛋白和HIF-1α蛋白的表达,减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,促进大鼠神经功能恢复,具有脑损伤保护作用。

生姜对大鼠脑缺血再灌注脑组织NHE1和HIF-1α蛋白水平的影响

目的研究生姜压榨汁对脑缺血再灌注大鼠脑组织缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF1α)蛋白和Na^+/H^+交换蛋白1型(Na^+/H^+exchanger protein 1,NHE1)表达水平的影响。方法通过线栓法构建大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,造模成功的大鼠随机分为模型组(MCAO)、生姜压榨汁高(H)、中(M)和低(L)剂量组,另设假手术组(CLT)为对照,各组大鼠经灌胃给药5 d,神经功能评分后,病理组织检查大脑病变情况,干湿重法测大脑含水量,免疫荧光法检测NHE1蛋白在脑组织中的表达,Western Blot法研究HIF-1α蛋白和NHE1蛋白水平。结果与CTL组比较,MCAO组大鼠出现明显的神经功能障碍,病理检测结果显示脑组织出现明显的梗死灶,脑组织含水量明显升高,NHE1蛋白和HIF-1α蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与MCAO组相比,生姜H、M剂量组能明显改善MCAO大鼠神经病学症状,显著缩小脑梗死面积,降低脑组织含水量,并降低NHE1蛋白和HIF-1α蛋白表达水平(P<0.05)。结论生姜对脑缺血再灌注大鼠脑组织可能发挥保护作用。

抑制钠氢交换蛋白下调IL-8表达和促进p38磷酸化

我们前期的研究证明,抑制钠氢交换蛋白1(NHE1)可以减少VEGF表达从而抑制K562细胞诱导的血管生成。本研究探讨抑制NHE1后其他可能的血管生成因子变化及相关机制。用NHE1特异性抑制剂卡立泊来德10μmol/L处理K562细胞;蛋白芯片筛选NHE1抑制后血管生成因子的表达变化,实时定量PCR验证卡立泊来德处理后白介素-8(IL-8)的表达水平;构建K562稳定干扰NHE1细胞株,实时定量PCR验证干扰NHE1后IL-8的表达变化,Western blot检测卡立泊来德处理后细胞内p38磷酸化水平;p38抑制剂SB203580处理K562细胞,实时定量检测IL-8表达变化。蛋白芯片筛选结果显示,卡立泊来德处理后K562细胞中IL-8表达显著下调;实时定量结果进一步验证了这种抑制效应;卡立泊来德处理后p38磷酸化水平显著上调;卡立泊来德处理后加入SB203580抑制p38,IL-8表达可以部分恢复。结论:抑制NHE1可能通过促进p38磷酸化,下调促血管生成因子IL-8的表达。

心肌梗塞致心力衰竭大鼠模型心脏NHE-1蛋白表达的改变

目的 观察在结扎冠状动脉前降支心肌梗塞致心力衰竭大鼠缺血心脏Na^+-H^+交换蛋白-1(NHE-1)表达量的变化,探讨NHE-1在心力衰竭中的作用。方法 应用左冠状动脉结扎制备慢性心力衰竭大鼠模型,术后第5周取左心室,分离心肌梗死区和心肌肥厚区,应用Western蛋白印记法检测左室心肌肥厚区NHE-1表达量的变化。结果在左室心肌肥厚区NHE-1表达量较对照组明显升高(P<0.05),且大面积梗塞组光密度值(2.01±0.12)为小面积梗塞组(1.37±0.10)的1.5倍(P<0.05)。结论 NHE-1不但在心肌细胞损害早期和心肌肥大、心室重塑的起始阶段起重要作用,而且在心力衰竭的进程(恶化)中也起重要作用。

神经调节蛋白-1原核表达及其对阿霉素致大鼠心肌细胞毒性的保护作用

目的探讨神经调节蛋白-1(NRG-1)对减轻阿霉素(DOX)所致大鼠心肌细胞毒性的作用及其机制。方法提取Sprague Dawley(SD)胎鼠的心室肌细胞总RNA并原核表达NRG-1蛋白;分离并培养SD乳鼠原代心肌细胞,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定不同浓度DOX作用下大鼠原代心肌细胞的活性;并将心肌细胞分为正常对照组、DOX(5.0μmol·L^-1)组、DOX(5.0μmol·L^-1)+NRG-1(11.0 nmol·L^-1)组和NRG-1(11.0 nmol·L^-1)组,培养7 d后分别采用Western blot法和荧光定量聚合酶链反应检测大鼠原代心肌细胞的Na+-Ca2+交换体(NCX-1)和心肌球蛋白轻链激酶(cMLCK)蛋白和mRNA表达。结果原核表达NRG-1蛋白成功;DOX的心肌细胞毒性随其浓度增高而加重;NRG-1对不同浓度DOX干预的大鼠心肌细胞活力均有恢复作用(P<0.05),DOX浓度继续增高时其恢复作用受限(P<0.05),同时NRG-1浓度越高其细胞活力恢复越好(F=3606.28、2010.60、215.41,P<0.05);5.0μmol·L^-1DOX能抑制cMLCK蛋白和mRNA的表达(P<0.05),也能提高NCX-1蛋白和mRNA的表达(P<0.05),而11.0 nmol·L^-1NRG-1能够逆转DOX的上述作用(P<0.05)。结论NRG-1能够改善DOX所致大鼠心肌细胞毒性,其机制可能与cMLCK表达上调及NCX-1表达下调有关。

阴离子交换蛋白1在HEK293t细胞中的高效表达与鉴定

目的 在人胚肾HEK2 93t(2 93t)细胞高效表达具有阴离子转运活性的阴离子交换蛋白1(AE1)。方法 用传统磷酸钙转染法将质粒pRBG4- AE1转入2 93t细胞,免疫荧光及Westernblotting验证蛋白表达及正常的细胞膜定位后,应用6 - 甲氧基- N- (3- 磺丙基)喹啉铵(SPQ)观察表达的AE1是否具有阴离子转运活性。结果 在2 93t细胞中,显示AE1高效表达。转染pRBG4 - AE1后2 93t细胞相对于正常以及转染空载体对照组的阴离子交换功能明显增强。结论 利用传统磷酸钙转染法,在2 93t可高效表达具有正常跨膜拓扑结构及阴离子转运活性的AE1,为进一步研究其相关功能奠定了基础。