木聚糖酶对尼罗罗非鱼钠葡萄糖共转运载体(SGLT_1)mRNA表达的影响

以尼罗罗非鱼[体重(106.16±16.77)g]为实验对象,小麦基础饲料为对照,小麦基础饲料中分别添加不同水平的木聚糖酶(0.05%、0.10%、0.15%)作为试验饲料。每个处理设5个重复,每个重复放养40尾雄性尼罗罗非鱼,旨在研究木聚糖酶对尼罗罗非鱼前肠和中肠钠葡萄糖共转运载体(SGLT_1)mRNA表达的影响,从分子水平揭示木聚糖酶促进尼罗罗非鱼生长的机理。饱食投喂,饲养75 d后,每饲料组分别取10尾鱼,尾静脉取血制备血清,测定血糖含量;采用离心柱型总RNA提取试剂金提取前肠和中肠总RNA,通过RT-PCR对前肠和中肠SGLT_1mRNA的表达进行相对定量。结果表明,0.05%组、0.10%组和0.15%组前肠SGLT_1 mRNA的相对表达量分别比对照组提高19.28%(P<0.05)、42.17%(P<0.01)和16.87% (P<0.05);对照组尼罗罗非鱼在摄食后2 h血糖仅为5.56 mmol·L^(-1),0.10%组极显著高于对照组(P<0.01);0.05%组和0.10%组的增重率较对照组分别提高8.29%、17.45%(P<0.01),0.15%组的增重率与对照组相比没有统计学差异(P>0.05)。研究结果表明,在小麦基础饲料中适量添加木聚糖酶能显著上调前肠SGLT_1mRNA的表达,促进葡萄糖吸收,从而提高尼罗罗非鱼的生长速度。

人参皂苷Rb1对心力衰竭大鼠心肌细胞葡萄糖转运载体-4的影响

目的探讨人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1,Gs-Rb1)减轻阿霉素所致的慢性心力衰竭(CHF)效应与改善葡萄糖转运载体-4(glucose transporter-4,GLUT-4)的关系。方法阿霉素诱导CHF大鼠被随机分为对照组(n=10)、阿霉素组(n=15)和Gs-Rb1组[70 mg/(kg.d),n=17],同时培养的乳鼠心肌细胞随机分为对照组、阿霉素组(1μmol/L)和Gs-Rb1组(200μmol/L)。干预完毕后,检测心脏超声、GLUT-4蛋白和mRNA水平。结果 (1)与阿霉素组相比,Gs-Rb1组的左室射血分数显著提高(P<0.05);(2)在体内研究中,Gs-Rb1组GLUT-4蛋白和mRNA水平均显著高于阿霉素组(P<0.05),但显著低于对照组(P<0.05);(3)在体外研究中,与阿霉素组相比,Gs-Rb1组GLUT-4蛋白水平和mRNA水平显著提高(P<0.05),但均显著低于对照组(P<0.05);(4)阿霉素组心肌细胞膜GLUT-4蛋白水平显著低于对照组(P<0.05),而Gs-Rb1组心肌细胞膜GLUT-4蛋白显著高于阿霉素组(P<0.05)。结论在阿霉素促发CHF进程中,GLUT-4的表达和移位被抑制可能起着一定作用;Gs-Rb1改善阿霉素CHF效应与促进GLUT-4的表达和移位有关。

钠葡萄糖共转运载体(SGLT1)研究进展

综述了钠葡萄糖共转运载体 ( SGLT1 )研究的新进展 ,葡萄糖的跨膜转运主要是通过 SGLT1结合 1 mol葡萄糖 ,2 mol的 Na+ ,形成 Na+ -载体 -葡萄糖复合物 ,顺 Na+的浓度梯度进入细胞。不同物种的 SGLT1具有较高的同源性 ,大小为 662～ 665个氨基酸。其二级结构业已阐明 ,它由 1 4个连为一体的 α螺旋 ( MS1～ MS1 4)组成 ,动物种类、年龄、饥饿状况、Na+ 摄入水平和血清醛固酮水平均影响 SGLT1的基因表达 ,表皮生长因子 ( EGF)、精氨酸加压素 ( AVT)、胰岛素样生长因子 ( IGF)以及蛋白激酶 A和蛋白激酶 C对

缺氧诱导因子-1α过表达通过葡萄糖转运载体-4介导缺氧大鼠骨髓间充质干细胞对葡萄糖的摄取

目的探列缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因转染是否提高骨髓间充质干细胞（MSC）缺氧状态下的葡萄糖摄取能力以及这种能力是否与葡萄糖转运载体-4（GLUT-4）的表达和易位有关。方法将MSCs分为常氧非转染组（即对照组）、常氧转染组、缺氧非转染组和缺氧转染组，分别于常氧（5％CO2，37℃）和缺氧（94％N2、1％0z和5％CO2，37℃）条件下孵育8h。放射同位素法检测。H—G摄取量，免疫细胞化学和Western-blot检测GLUT-4的表达。结果①与缺氧非转染组相比，缺氧转染组显著提高细胞摄取。H—G量（P〈0．01），但二者均显著低于对照组和常氧转染组对。H—G的摄取（P〈0．01）；②与缺氧非转染组相比，缺氧转染组显著提高细胞和细胞膜GLUT-4蛋白的表达（P〈0．01），2组均显著低于对照组GLUT-4蛋白的表达和移位（P〈0．01）；③。H—G摄取量与细胞膜中GLUT-4表达呈正相关（r=0．437，P=0．001）。结论HIF-1a基因提高MSCs的葡萄糖摄取能力，此机制与HIF-1α基因提高GLUT-4的表达和易位相关。

反刍动物钠依赖性葡萄糖转运蛋白的研究

葡萄糖转运蛋白分为2类:钠依赖性葡萄糖转运蛋白和易化葡萄糖转运蛋白。高精料饲养条件下,钠依赖性葡萄糖转运蛋白影响了过瘤胃淀粉在反刍动物小肠中的消化利用。

N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺对仔猪空肠和回肠Na^(+)依赖性中性氨基酸转运载体2表达及营养感应信号的调控作用

本研究旨在探讨Na^(+)依赖性中性氨基酸转运载体2(SNAT2)介导多胺及其前体物质对仔猪肠黏膜营养感应信号的调控作用。试验选取32头哺乳仔猪,随机分为4组,每组8头猪,自出生当日开始,每日2次分别灌服生理盐水(对照组)、腐胺(5 mg/kg BW)、脯氨酸(25 mg/kg BW)和N-氨甲酰谷氨酸(NCG,8 mg/kg BW)。14日龄断奶,断奶第3天采血后屠宰,采集空肠和回肠样品。结果表明:与对照组相比,灌服腐胺、脯氨酸和NCG显著提高仔猪平均日增重(P<0.05);灌服腐胺和NCG显著提高空肠和回肠黏膜SNAT2的蛋白表达水平(P<0.05);灌服脯氨酸和NCG显著提高了空肠黏膜氨基酸转运感应相关基因[质子耦合氨基酸转运蛋白1(PAT1)、钙感应受体(CasR)、磷脂酶Cβ2(PLCβ2)和味觉受体1家族成员3(T1R3)]的mRNA相对表达量(P<0.05),NCG还显著上调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关基因[促分裂原活化蛋白激酶3(MAP4K3)和mTOR]的mRNA相对表达量(P<0.05);灌服NCG显著提高了血清中胆囊收缩素(CCK)含量(P<0.05)及空肠黏膜CCK受体mRNA相对表达量(P<0.05)。综上所述,NCG可通过上调仔猪肠道氨基酸转运载体相关基因的表达,调节氨基酸感应途径信号分子的释放和基因表达。

葡萄糖转运载体1的表达及活性调控

葡萄糖转运蛋白家族(glucose transporters,GLUTs)属于主要协助转运蛋白超家族(major facilitator superfamily,MFS),由溶质运载蛋白家族(solute carrier family 2,SLC2)基因编码,主要协助葡萄糖进行跨细胞膜转运。GLUT1是发现最早的GLUTs家族成员,主要存在于血脑屏障及红细胞膜上,对于维持血糖浓度稳定和大脑供能发挥重要作用。GLUT1的跨膜转运能力一方面与膜上SLC2 A1基因表达量有关,另一方面与GLUT1的转运动力学调控有关。SLC2 A1基因表达调控主要涉及转录、转录后、翻译和翻译后水平调控。转运动力学调控主要包括一系列GLUT1抑制剂,例如膜内糖结合位点抑制剂、膜外糖结合位点抑制剂、腺苷结合效应类抑制剂以及高选择性抑制剂BAY-876。SLC2 A1基因缺失和突变会导致胚胎致死和GLUT1缺乏症;而SLC2 A1表达异常增高则与多种糖尿病合并症(例如糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病)、神经认知性障碍及肿瘤等发生相关。本文围绕GLUT1结构功能、表达和活性调控及其与疾病的关系进行综述,以期为GLUT1相关的临床研究和药物研发提供参考。

脂联素siRNA对3T3-L1细胞基础葡萄糖转运的影响

目的:构建携带小鼠脂联素(Acrp30)siRNA腺病毒载体,并检测其对小鼠脂肪细胞Acrp30表达以及对3T3-L1脂肪细胞基础葡萄糖转运的影响。方法:设计并化学合成小鼠脂肪细胞Acrp30 siRNA片段,将其亚克隆入AdEaxy XL腺病毒载体系统,在293细胞内包装扩增为重组腺病毒。用此重组腺病毒感染3T3-L1脂肪细胞,用RT-PCR和ELISA检测其Acrp30 mRNA和蛋白表达。采用2-Deoxy-[3H]D-glucose掺入法测定脂肪细胞葡萄糖转运。结果:设计并构建了小鼠Acrp30基因特异性siRNA腺病毒载体,该载体感染脂肪细胞后,能显著抑制Acrp30 mRNA和蛋白表达,影响3T3-L1脂肪细胞基础葡萄糖的转运,与对照组相比,差异显著(P<0.05)。结论:构建的Acrp30基因特异性siRNA腺病毒载体能有效地抑制脂联素在3T3-L1脂肪细胞中的表达,从而影响3T3-L1脂肪细胞基础葡萄糖转运。

葡萄糖转运体1研究进展

葡萄糖转运体(glucose transporter,GLUT)家族是葡萄糖转运的主要媒介,目前发现有13个成员。其中GLUT1以异构体的形式广泛表达于多种细胞,是介导葡萄糖经过血脑屏障的主要转运体。疾病可以改变GLUT1介导的葡萄糖转运过程,糖转运受到干扰能使脑功能受损,甚至导致脑死亡。近来研究显示,GLUT1能介导一些神经活性药物的转运,如糖基化的神经肽、低分子量肝素及D-葡萄糖衍生物等。因此,依赖于葡萄糖转运体的葡萄糖运载方法有可能是一个选择性药物运输系统,通过此高效转运系统,可调节药物进入大脑。

肠道上皮主要葡萄糖转运载体及其作用机制

葡萄糖在肠道的吸收主要通过Na^+依赖性葡萄糖转运载体1(SGLT1)和易化葡萄糖转运载体2(GLUT2)实现。许多影响肠道葡萄糖吸收功能的因素都是通过调控SGLT1和GLUT2转录水平、mRNA稳定性及蛋白水平来实现的。通过对葡萄糖转运载体结构和功能的研究,不仅为人类肥胖症和糖尿病等相关疾病提供潜在药物靶点,还能为调节动物营养物质吸收提供思路。本文综述了肠道上皮主要葡萄糖转运载体SGLT1和GLUT2的功能和影响其在肠道上皮表达的因素,旨在从分子层面揭示葡萄糖在肠道的吸收以及体内葡萄糖平衡的调控。

葡萄糖载体-1研究进展

葡萄糖载体-1(Glut-1)广泛分布于体内各组织细胞中,主要集中在血脑屏障(脑毛细血管内皮细胞)和红细胞膜上,是机体各细胞被动转运葡萄糖最基本的转运载体。Glut-1表达异常是临床多种疾病的发病原因或结果。近年来的研究表明,Glut-1为治疗人T细胞白血病、肿瘤及多种脑疾病提供了潜在靶点。

不同品种猪在不同生理阶段骨骼肌葡萄糖转运载体和胰岛素受体表达的发育性变化

本试验旨在研究不同品种猪在不同生理阶段骨骼肌葡萄糖转运载体(GLUT)1、GLUT4和胰岛素受体(IR)mRNA表达的发育规律。试验以1、7、30、60、90和150日龄蓝塘和长白两品种猪背最长肌、半膜肌和半腱肌组织样品c DNA为模板,采用实时荧光半定量PCR的方法,检测猪GLUT1和GLUT4 mRNA在不同骨骼肌中的表达模式。结果显示:1)1~150日龄蓝塘和长白猪背最长肌、半膜肌和半腱肌GLUT1 mRNA表达存在相似的发育变化规律,在1日龄时相对表达丰度最高。2)1~150日龄蓝塘和长白猪半膜肌和半腱肌GLUT4 mRNA相对表达丰度随日龄呈波形式变化,变化速度和程度存在品种差异。1日龄和150日龄时蓝塘猪背最长肌GLUT4mRNA相对表达丰度低于同日龄长白猪(P>0.05),而在其余日龄时高于同日龄长白猪(P>0.05)。3)蓝塘和长白猪背最长肌、半膜肌和半腱肌IR mRNA相对表达丰度在1和30日龄时表现出较高水平,而在7、60、90和150日龄时无显著差异(P>0.05);同日龄蓝塘和长白猪之间IR mRNA相对表达丰度无显著性差异(P>0.05)。结果表明:猪骨骼肌GLUT1 mRNA的表达在不同生理阶段存在差异,猪骨骼肌GLUT4 mRNA的表达在不同品种和生理阶段存在显著差异,且其与IR mRNA的表达相关性较弱,无明显规律。

葡萄糖转运蛋白SGLT1和GLUT2在槲皮素肠道吸收中的作用研究

目的探讨槲皮素在人小肠吸收模型Caco-2单层细胞上的吸收特征以及基于葡萄糖肠道吸收中的主动转运蛋白--Na^+依赖性葡萄糖转运蛋白1和易化扩散转运蛋白--葡萄糖易化扩散转运蛋白2的跨膜吸收机制。方法采用Caco-2单层细胞模型,利用Na^+依赖性葡萄糖转运蛋白1和葡萄糖易化扩散转运蛋白2特效抑制剂根皮苷和根皮素,以丁螺环酮为内标、LC-MS法测定孵育30~150分钟内各时间节点Caco-2细胞透过面槲皮素浓度,研究Na^+依赖性葡萄糖转运蛋白1和葡萄糖易化扩散转运蛋白2在槲皮素肠道吸收中的作用,探讨槲皮素的肠道吸收机制。结果在孵育30~150分钟各时间点,均在透过面检测到相应的槲皮素原形;透过面的槲皮素含量在150分钟孵育时间内呈现先升后降的趋势特征,120分钟达峰,随后下降,没有观察到平台期;葡萄糖和根皮苷对槲素的跨膜转运均表现出了明显的抑制作用,跟皮苷的抑制作用随孵育时间逐渐减弱,而根皮素却明显上调了槲皮素的透过水平(P<0.05),原因不明。结论槲皮素可以以完整分子的形式透过Caco-2细胞单层,Na^+依赖性葡萄糖转运蛋白1和葡萄糖易化扩散转运蛋白2可能同时参与槲皮素的跨膜转运,Na^+依赖性葡萄糖转运蛋白1在槲皮素的跨膜转运占据重要的位置,而葡萄糖易化扩散转运蛋白2的作用有待进一步研究。

乳源β-酪啡肽7对大鼠葡萄糖吸收的影响及其作用机制

目的:探讨乳源活性肽β-酪啡肽-7(β-Casomorphin-7,β-CM7)应用于食品时对葡萄糖吸收的影响及其作用机制.方法:选用健康成年SD大鼠,分为对照组(0mol/Lβ-CM7),L低剂量组、M中剂量组、H高剂量组(终浓度分别为7.5×10-7,7.5×10-6,7.5×10-5mol/L).利用翻转离体小肠囊模型进行实验:(1)葡萄糖氧化酶法测定翻转后小肠内液葡萄糖含量;(2)比色法测定小肠黏膜Na+-K+-ATP酶活力;(3)荧光定量PCR法分析小肠黏膜组织中钠葡萄糖共转运载体(SGLT-1)和葡萄糖协助扩散转运载体(GLUT-2) mRNA的表达.结果:在离体环境下β-CM7在7.5×10-7-7.5×10-5mol/L浓度下对葡萄糖的吸收均有一定的抑制作用(1.09mol/L,1.24mol/L,1.12mol/L vs 1.74mol/L,P=0.01,0.04,0.02),能够降低Na+-K+-ATP酶活力(85.73,112.06,109.68 vs 114.93,P=0.004,0.73,0.54);荧光定量PCR结果发现:与对照组相比,β-CM7能够显著降低SGLT-1及GLUT-2 mRNA水平(0.46,0.58,0.77 vs 1.11,P=0.20,0.05,0.02;0.50,0.66,0.85 vs 1.14,P=0.30,0.14,0.03).结论:β-CM7可以通过降低Na+-K+-ATP酶活力及下调SGLT-1、GLUT-2 mRNA水平,减少大鼠小肠对葡萄糖的吸收.

桃胶多糖对Caco-2细胞模型吸收葡萄糖的影响

目的:通过Caco-2体外细胞模型研究桃胶多糖影响葡萄糖吸收的机制。方法:以培养的Caco-2单层细胞为葡萄糖吸收模型,观察在桃胶多糖影响下,葡萄糖吸收量随时间的变化关系,从而推断桃胶多糖对葡萄糖跨膜转运过程的影响。结果:一定浓度桃胶多糖作用下,不同浓度葡萄糖的吸收量与对照组相比,均有显著差异(P<0.05),表明葡萄糖吸收受到桃胶多糖的抑制,且葡萄糖浓度越低,桃胶多糖抑制葡萄糖吸收的效果越显著(P<0.05);不同浓度的桃胶多糖作用下,相同浓度葡萄糖的吸收量与对照组相比,均有显著差异(P<0.05),且桃胶多糖浓度越高,抑制葡萄糖吸收的效果越好(P<0.05)。结论:桃胶多糖能够竞争性抑制葡萄糖的吸收,其是否可能通过影响或者占据肠道刷状缘侧钠葡萄糖共转运载体1(SGLT-1)上葡萄糖的吸收位点达到降血糖目的,其机制尚有待进一步研究。

大鼠GLUT1基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建

目的:构建携带大鼠葡萄糖转运体1基因(GLUT1)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡机制奠定基础。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT1基因全长cDNA,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-G lut1,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-G lut1,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在HEK293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印迹法(W estern b lotting)从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒。结果:经PCR分析及DNA测序显示GLUT1 cDNA序列正确;筛选出重组腺病毒质粒pAd-G lut1后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及W estern b lotting检测表明重组腺病毒包装成功。结论:成功扩增了大鼠GLUT1基因并构建了携带大鼠GLUT1基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,这有助于研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡的机制。

小肠上皮单糖转运体GLUT5与SGLT1的基本生理和功能

易化性单糖转运体5(GLUT5)和Na+依赖性单糖转运体1(SGLT1)是哺乳动物体内的2种单糖转运体,分别属于GLUTs家族和SGLTs家族,主要存在于小肠上皮细胞肠腔侧,对碳水化合物的吸收起重要作用。其表达与年龄、肠道部位、日周期节律等因素有关,并受到饮食、激素分泌、周围电生理变化以及底物浓度等多种因素的影响。其数量和功能上的异常可导致一系列病理改变和临床症状。但目前对于这两种转运体基本机理还远未阐明,有待于进一步研究。

海东鸡种鸡日粮精氨酸水平对子代7日龄雏鸡小肠黏膜中营养转运载体及消化酶基因表达影响

为探讨种鸡日粮中添加不同水平的精氨酸对海东鸡雏鸡小肠黏膜中营养转运载体(PepT1、SGLT1、GLUT2)及消化酶(APN、SI)基因表达影响,将440只种鸡分为5组,分别添加0.96%、1.16%、1.36%、1.56%和1.76%的L-精氨酸。种鸡饲养44 d,对7日龄雏鸡的十二指肠、空肠、回肠取样,通过实时荧光定量PCR技术对各肠段内相应目的基因进行表达量测定。结果显示:海东鸡不同肠段PepT1、SGLT1、APN mRNA的相对表达量差异极显著(P<0.01),GLUT2和SI mRNA相对表达量存在显著差异(P<0.05);不同L-精氨酸水平海东鸡肠道PepT1、GLUT2、SGLT1、SI mRNA相对表达量存在极显著差异(P<0.01),APN mRNA差异不显著(P>0.05)。由此可见,海东鸡肠道营养转运载体PepT1、SGLT1、GLUT2及消化酶APN、SI mRNA表达具有肠段及L-精氨酸水平的差异性,日粮添加1.16%L-精氨酸对于肠道整体营养转运载体及消化酶的基因表达影响最佳。

溶质载体家族2促进葡萄糖转运蛋白成员1 HaeⅢ基因多态性与糖尿病肾病的相关性研究

目的探讨溶质载体家族2促进葡萄糖转运蛋白成员1 HaeⅢ(SLC2A1 HaeⅢ,g20882C>T)基因多态性与DN的关系。方法将380例T2DM患者分为DN组与T2DM组,采用PCRRLFP检测SLC2A1 HaeⅢ(g20882C>T)基因分型,探讨不同基因型患者与DN发病及相关指标的关系。结果 T2DM组与DN组CC、TT基因型比较,差异有统计学意义(P<0.05),C、T等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。TT基因型患者胱抑素C(Cys-C)、Hcy、UAER低于CT、CC基因型患者(P<0.05),而eGFR高于CC、CT型患者(P<0.05)。CT基因型患者Cys-C、Hcy低于CC型患者(U=5.67、4.22,P<0.05),而eGFR高于CC型患者(U=4.31,P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,CC基因型(OR=2.105,95%CI:1.928~8.117,P<0.05)及C等位基因频率(OR=1.832,95%CI:1.003~5.462,P<0.05)为DN的危险因素。结论 SLC2A1 HaeⅢ(g20882C>T)为DN易感基因,导致Hcy、Cys-C过表达,引起DN的发生发展。