细胞外信号调节激酶及胞质磷脂酶A2α在血管紧张素Ⅱ调节肾近曲小管Na^＋-HCO3^-转运中的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）在肾近曲小管Na^＋-HCO3^-转运中的作用及细胞外信号调节激酶（ERK）、胞质磷脂酶A2α（cPLA2α）通路对其调节的机制。方法从野生小鼠和血管紧张素1a型受体fATlaR）基因缺陷小鼠分离新鲜单根肾近曲小管，在不同浓度AngⅡ（10^-10、10^-8、10^-4mol／L）及AT1、AT2受体阻滞剂或促分裂原活化蛋门激酶（MAPK）、cPLA2、P450抑制剂存在下对比Na^＋-HCO3^-离子转运活动度变化。Western印迹方法测定ERK磷酸化（p-ERK）。RT—PCR测定ATlbR在两种小鼠肾小管中的表达。结果（1）在野生小鼠，低浓度AngⅡ（10^-10mol／L）刺激Na^＋-HCO3^-转运并被AT1受体阻滞剂及MAPK阻滞剂PD98059阻滞；而高浓度AngⅡ（10～mol／L）抑制Na^＋-HCO3^-；的转运，被AT1受体阻滞剂阻滞，但PD98059对其无阻滞作用。显示AngⅡ在。肾脏近曲小管双向性调节Na^＋-HCO3^-转运，ERK通路仅参与低浓度AngⅡ的刺激作用。（2）在AT1aR基因缺陷小鼠，只有高浓度AngⅡ（10^-6mol／L）能刺激Na^＋-HCO3^-转运，并被AT1受体阻滞剂及PD98059阻滞。显示在AT1aR缺乏时，AT1bR起到部分代偿作用，RT—PCR也证实AT1bR在肾小管的存在。（3）在野生小鼠，cPLA2阻滞剂或P450阻滞剂存在下，所有浓度AngⅡ均显示刺激作用，并被AT1受体阻滞剂及PD98059阻滞。WesteIn印迹检测也证实上述结论。这显示经由AT1受体，低浓度AngⅡ通过ERK通路仅参与刺激。肾近曲小管Na^＋-HCO3^-离子转运作用，而高浓度AngⅡ经cPLA2α—P450通路抑制Na^＋-HCO3^-离子转运，cPLA2α-P450通路同时也参与了抑制ERK的激活作用。结论不同浓度AngⅡ经由AT1受体介导了ERK和cPLA2α通路的平衡，从而决定AngⅡ调节在肾近曲小管水和钠的重吸收。

酸中毒致大鼠离体冠状动脉收缩的机制

目的:探讨细胞外酸中毒(pH_(ex)6.8)致大鼠离体冠状动脉(RCA)收缩的机制。方法:采用离体微血管张力法,通过观察Na^+-H^+交换体1(NHE-1)选择性抑制剂cariporide(HOE-642)或Na^+-HCO_3^-共同转运体(NBC)抑制剂S0859预孵对pH_(ex)6.8所致RCA收缩的影响,探讨酸碱转运体在酸中毒收缩RCA中的作用;通过观察氯通道抑制剂NPPB和尼氟酸(NFA)预孵及细胞外去除氯离子对pH_(ex)6.8所致RCA收缩的影响,探讨氯离子通道在酸中毒收缩RCA中的作用。结果:pH_(ex)6.8引起RCA静息张力升高,最大张力为(3.90±0.95)mN。30μmol/L HOE-642和100μmol/L S0859均抑制pH_(ex)6.8引起的RCA收缩(P<0.01)。NPPB和NFA均呈浓度依赖性地抑制pH_(ex)6.8引起的RCA收缩和KCl(60 mmol/L)引起的收缩。100μmol/L的NPPB和NFA均抑制U46619(1μmol/L)引起的RCA收缩(P<0.01)。等摩尔NaBr代替细胞外液中NaCl后,几乎完全抑制pH_(ex)6.8引起的RCA收缩(P<0.01),但是对KCl(60 mmol/L)或U46619(1μmol/L)引起的RCA收缩无显著影响。结论:细胞外液酸化所致的RCA收缩与激活NHE-1和NBC及促进氯离子跨细胞膜运动有关。

PPAR-γ依赖性ERK磷酸化介导吡格列酮引起的钠和碳酸氢根在肾近曲小管的重吸收

目的噻唑烷二酮类药物是PPAR-γ的选择性配体,用于改善胰岛素抵抗,但因其可引起浮肿、钠潴留而使用受限。本研究探讨该类药物引起浮肿的机制及其传导通路。方法兔肾近曲小管在吡格列酮(0.03、0.3、3μmol/L)及PPAR-γ拮抗剂(5μmol/L GW9662)或MAPK抑制剂(10μmol/LPD98059)作用下,观察Na^+/HCO_3^-转运活动度及HCO_3~重1收率的变化,Western blot法测定ERK的磷酸化。结果 (1)0.3.mol/L吡格列酮刺激兔肾近曲小管Na^+和HCO_3^-的转运和重吸收,该刺激作用被MAPK抑制剂或PPAR-γ拮抗剂阻断。(2)0.3μmol/L吡格列酮引起ERK磷酸化,被MAPK抑制剂或PPAR-γ拮抗剂阻滞。结论在兔肾近曲小管,通过PPAR-γ依赖的ERK磷酸化介导吡格列酮引起的肾近曲小管Na^+和HCO_3^-的重吸收。