日本囊对虾Na-K-2Cl共同转运蛋白基因的克隆与组织表达分析

利用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)等技术在鳃组织中获得日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)Na-K-2Cl共同转运蛋白(NKCC)cDNA全序列,包含14bp的5′非编码区(5′-UTR)、201bp的3′-UTR和3 183bp的开放阅读框(ORF).该ORF共编码1 060个氨基酸,预测蛋白分子质量为117.051ku,理论等电点为6.57,命名为Mj-NKCC.预测Mj-NKCC二级结构由10个跨膜区组成,跨膜区的氨基酸序列和布局均相对保守.同源对比结果显示,Mj-NKCC的氨基酸序列与夏威夷海蚀洞虾(Halocaridina rubra)的Na-K-2Cl共同转运蛋白相似度最高,为77%.系统进化分析表明Mj-NKCC与夏威夷海蚀洞虾、蓝蟹(Callinectes sapidus)等甲壳动物的NKCC聚为一支.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析表明,Mj-NKCC基因在肝胰腺、鳃、胃、肠、心、眼柄、肌肉和血细胞中均有表达,鳃组织中表达量最高;在盐度骤变时,该基因表达变化显著,表明其很可能参与了对虾的渗透压调节,在对虾的渗透平衡中发挥重要作用.

Na-K-2Cl转运蛋白基因5′端GT重复序列多态性与新疆哈萨克民族原发性高血压的相关性

目的：探讨研究Na-K-2C1转运蛋白（NKCC2，SLC12A1，BSC-1）基因GT重复序列多态性与新疆哈萨克族人原发性高血压（EH）的关系。方法：以人群为基础进行病例-对照研究，随机选取新疆牧区30～55岁的哈萨克族牧民303例（EH患者152例，正常对照151例），采用经典的饱和酚／氯仿抽提法提取白细胞基因组DNA，运用荧光标记多聚酶链式反应（PCR）技术、毛细管电泳和Genetic Profiler自动分析软件进行微卫星基因组扫描分析技术，根据片断大小分离等位基因。检测EH患者与正常对照者的NKCC2基因GT重复序列多态性。结果：在所有研究人群中NKCC2基因重复序列存在14种等位基因（A1～A14），扩增长度为210～238bp，其频率介于0．002～0．281，以扩增长度为224bp的A9等位基因最为常见，其次为A5和A8，分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律，GT重复多态杂合率为0．812，多态信息量为0．803。EH人群NKCC2基因GT重复多态分布与正常人群差异无统计学意义（χ^2=16．885，P〉0．05）。结论：NKCC2基因5’端GT重复多态性标记与新疆哈萨克民族EH可能不相关。

充血性心力衰竭时肾脏水通道蛋白mRNA表达的改变及意义

目的 研究在不同程度的充血性心功能衰竭(心衰)时肾脏水通道蛋白2(AQP2)、上皮性钠通道(ENaC)、和髓襻升支粗段的 Na-K-2Cl转运子(rBSC1)表达的情况。方法 将 SD大鼠通过腹主动脉-下腔静脉穿刺造瘘和冠状动脉结扎的方法建成不同的心衰模型,设正常对照组、穿刺造瘘1孔组、穿刺造瘘3孔组和冠脉结扎组。用Doppler超声心动图及心脏秤重的方法比较其心功能的各项参数,并用 RT-PCR的方法检测肾脏AQP2、ENaC α亚单位和 rBSC1 mRNA表达。结果 穿刺造瘘大鼠心功能损害较轻,而冠脉结扎大鼠心功能严重失代偿。AQP2仅在冠脉结扎大鼠肾皮质表达增高,而rBSC1在造瘘1孔、3孔和结扎大鼠的肾髓质表达均显著上凋。肾皮质αENaC含量3组心衰大鼠都显著增高,而在肾髓质仅冠脉结扎大鼠明显升高,造瘘大鼠虽有上升趋势,但差异无显著性意义。结论 在不同类型的充血性心力衰竭大鼠模型中存在着肾脏AQP2、rBSC1和ENaC mRNA表达的上调,其中rBSC1增高可能和心脏受累早期肾脏排钠障碍有一定关系。

NKCC1在慢性肾脏病大鼠主动脉纤维化中的作用研究

该文探讨了Na-K-2Cl协同转运蛋白1(Na-K-2Cl cotransporter 1,NKCC1)在慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)大鼠主动脉纤维化中的作用。采用5/6肾切除方法建立CKD大鼠模型,尾套法测定大鼠血压,脲酶法测定血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐(serum creatinine,Scr);利用苏木素–伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色观察组织形态,Masson染色观察组织纤维化情况;利用Real-time PCR、Western blot和免疫组织化学染色法检测大鼠肾脏和主动脉组织中NKCC1的表达;体外培养大鼠主动脉内皮细胞(endothelial cell,EC),通过免疫荧光实验观察细胞中Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ,Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Collagen-Ⅲ,Col-Ⅲ)的表达,利用Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、血小板–内皮细胞黏附分子(CD31)、钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达。结果显示,CKD大鼠的平均收缩压(systolic blood pressure,SBP)较术前和假手术组(sham)均明显升高(P<0.05),BUN和Scr显著高于sham组(P<0.05);CKD大鼠肾脏和主动脉组织损伤严重且纤维化明显,NKCC1的表达较sham组明显增加;醛固酮(aldosterone)使EC中NKCC1、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ增多,间质细胞标志物α-SMA和vimentin上调,内皮细胞标志物CD31和E-cadherin下调,在此基础上用布美他尼(bumetanide)使NKCC1、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ减少,α-SMA和vimentin表达下降,CD31和E-cadherin升高。该研究表明,NKCC1可能通过增强内皮–间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndoMT)促进CKD主动脉纤维化。