钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂对沉默信息调节因子1信号通路的调控作用及其在糖尿病肾病中发挥肾脏保护作用的机制研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病主要并发症之一,是导致终末期肾病的主要原因。钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂是一种新型降糖药物,与其他降糖药物相比,SGLT2抑制剂的降糖优势并不明显,但其肾脏保护作用却很突出。SGLT2抑制剂可以激活沉默信息调节因子1(SIRT1)信号通路促进肾脏细胞自噬,降低氧化应激,改善肾脏缺氧从而保护肾脏,延缓糖尿病肾病进展。SGLT2抑制剂发挥肾脏保护作用的机制可能与其对SIRT1信号通路的影响有关。本文对SGLT2抑制剂通过调控SIRT1发挥肾脏保护作用的研究进展进行综述,旨在总结SGLT2抑制剂对糖尿病肾脏保护作用的机制。

脑脊液中Na^(+)-K^(+)-Cl^(-)协同转运蛋白1启动子甲基化对重型颅脑损伤患者预后有评估价值

目的:探讨重型颅脑损伤(sTBI)患者脑脊液中Na^(+)-K^(+)-Cl^(-)协同转运蛋白1(NKCC1)基因启动子甲基化的临床意义。方法:招募92例sTBI患者,根据格拉斯哥预后量表(GOS)将患者分为预后良好组(GOS>3分)63例与预后不良组(GOS≤3分)29例,选取同一时间段行腰椎内固定术后脑脊液漏的51例患者作为对照组。收集2组脑脊液样本,采用亚硫酸氢盐测序法(BSP)测定NKCC1启动子区域CpG位点的甲基化状态。采用Logistic回归分析影响sTBI患者预后的风险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估启动子甲基化的预测价值。采用定量反转录聚合酶链式反应法检测NKCC1在sTBI患者脑脊液中mRNA的表达水平。采用Pearson相关系数对启动子甲基化水平与其mRNA表达水平进行相关性分析。结果:预后不良组患者NKCC1的CpG_30.31、CpG_39.40.41位点的甲基化水平低于预后良好组(P均<0.05)。Logistic回归分析显示CpG_30.31、CpG_39.40.41位点甲基化水平是影响sTBI患者预后的独立风险因素(P均<0.05)。ROC曲线分析结果显示CpG_30.31、CpG_39.40.41位点甲基化水平预测sTBI患者预后的曲线下面积(AUC)为0.7085、0.7315(P=0.0014,0.0004)。NKCC1的CpG_30.31、CpG_39.40.41位点甲基化水平与NKCC1的mRNA水平呈负相关(r=-0.2574、-0.1328,P=0.0138、0.0325)。结论:NKCC1启动子甲基化状态对评估sTBI患者预后有价值。

人钠/二羧酸协同转运蛋白1基因融合表达及其抗体制备

利用DNA重组技术 ,将编码人钠 羧酸协同转运蛋白 1(hNaDC1)抗原表位区 (W138 Q2 19)的cDNA克隆至融合表达载体pGEX 5X 1,构建重组质粒pGEX hNaDCL6 .在大肠杆菌BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,获得谷胱甘肽巯基转移酶 (GST) hNaDC1重组融合蛋白的表达 .以谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析 ,获得纯化的GST hNaDC1.以此为免疫原制备的抗hNaDC1抗体可特异性识别人类和大鼠肾组织以及小肠组织中天然的钠 二羧酸协同转运蛋白 1.利用该抗体 ,首次证实了hNaDC1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘 ,与大鼠钠 二羧酸协同转运蛋白 1(SDCT1)分布一致 .

基于水协同转运蛋白KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na^+ -K^+ -ATP酶活性变化研究湿阻中焦证的水液代谢机制

目的：以前期研究的水通道蛋白为平台,通过观察并分析水协同转运蛋白KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~＋-K~＋-ATP酶活性变化,揭示湿阻中焦致水液代谢紊乱及平胃散对其修复作用机制的科学内涵,为中医临床治疗本证型疾病提供实验参考;同时搭建中药复方水通道调节剂的研究平台。方法：模拟＂外湿过盛,困阻脾胃、饮食不节,湿从内生、情志不遂,气机受阻、水湿不运三大致湿病因,建立湿阻中焦证模型。用蛋白定量法测定Na~＋-K~＋-ATP酶活性,用酶联免疫法（ELISA）测定肾脏组织KCC1,KCC3,KCC4,NKCC1的含量。结果：与空白组比较,模型组肾脏KCC1、KCC4含量升高,KCC3、NKCC1、Na~＋-K~＋-ATP酶活力降低,与模型组比较,自然恢复组肾脏KCC1、KCC3、NKCC1含量降低,Na~＋-K~＋-ATP酶活力明显升高（P〈0.01）,KCC4含量有上升趋势,经药物干预后,各给药组KCC1含量均明显降低（P〈0.01）,平胃散中剂量组KCC3、KCC4含量明显升高（P〈0.01）,平胃散低剂量组NKCC1含量明显降低（P〈0.01）;平胃散低剂量组肾脏Na~＋-K~＋-ATP酶活力明显升高（P〈0.01）;呋塞米组和平胃散加泽泻组KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~＋-K~＋-ATP酶活性均明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01）;与自然恢复组比较,平胃散中剂量组肾脏KCC1、KCC3、KCC4含量及Na~＋-K~＋-ATP酶活力有上升趋势,平胃散低剂量组NKCC1含量下降明显（P〈0.01）,呋塞米组和平胃散加泽泻组KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~＋-K~＋-ATP酶活性均明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：（1）湿阻中焦证模型不仅能够影响体内能量代谢,还能够影响KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量表达,这可能是湿阻中焦导致水代谢输布障碍的机制之一;（2）平胃散能够调整Na~＋-K~＋-ATP酶活性和KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量分布参与能量代谢和水液代谢调控,这可能是平胃散燥湿运脾、行气导滞、散中焦之湿阻治疗湿阻中焦证的分子机理之一;（3）水协同转运蛋白之间可能存在互补代偿机制。

钠-葡萄糖共转运蛋白-2抑制剂联合胰高血糖素样肽-1受体激动剂治疗超重/肥胖2型糖尿病患者的研究进展

钠-葡萄糖共转运蛋白-2抑制剂(SGLT-2i)和胰高血糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)是近年来降糖药物的热点研究方向。随着临床的广泛应用,SGLT2抑制剂及GLP-1受体激动剂已不限于用来治疗2型糖尿病(T2DM)的患者血糖,还能从减重、降脂、保护心脏等多个方面间接或直接地改善超重/肥胖2型糖尿病患者的血脂、体重及降低心血管事件发生风险。然而,由于超重/肥胖2型糖尿病的发病机制尚未明确,目前临床关于超重/肥胖2型糖尿病缺少彻底有效的治疗方案,主要为使用传统的不增加体重的降糖药,不能达到良好的治疗效果。因此,本文总结了SGLT2抑制剂及GLP-1受体激动剂降糖减重、调脂、保护心脏的机制及两者联合使用对超重/肥胖2型糖尿病患者的作用效果及安全性,为临床提供可靠的用药参考。

RNA干扰维生素D受体基因表达对HK-2细胞中钠/二羧酸协同转运蛋白1表达的影响

目的细胞水平上检测干扰维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)基因表达对钠/二羧酸协同转运蛋白1(Na(+)-dicarboxylate cotransporter,NaDC)在HK-2细胞中的表达的影响,探讨VDR与NaDC1在尿枸橼酸调控中的关系。方法设计6条VDR基因的siRNA,用脂质体法转染人肾近曲小管上皮HK-2细胞株,通过qPCR和Western Blot检测HK-2细胞VDR m RNA和蛋白质的表达水平,筛选有效的siRNA,用以转染HK-2细胞株,通过qPCR和WB检测细胞株中NaDC1 m RNA和蛋白的表达水平。结果siRNA-2、siRNA-3和siRNA-4能够显著降低VDRmRNA和蛋白质表达水平(P<0.05),用以后续实验发现siRNA-2、siRNA-3和siRNA-4组NaDC1的m RNA和蛋白质表达水平显著降低(P<0.05)。结论在HK-2细胞中,在一定表达水平范围内,VDR调控NaDC1的表达,两者表达水平呈正相关。由于VDR的表达上调引起了NaDC1的表达也相应上调,从而使NaDC1的转运活性增加,尿枸橼酸在肾近曲小管的重吸收也增加,表现为低枸橼酸尿症。

钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂联合胰岛素治疗1型糖尿病疗效与安全性的Meta分析

目的:系统评价钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT-2)抑制剂联合胰岛素治疗1型糖尿病(T1DM)的疗效与安全性,为临床T1DM治疗提供循证参考。方法:计算机检索PubMed、Cochrane图书馆、Embase、ClinicalTrials、中国知网、中国生物医学文献数据库与万方数据库,检索时限均为各数据库自建库起至2020年2月,收集在胰岛素基础治疗的基础上,SGLT-2抑制剂(试验组)对比安慰剂(对照组)治疗T1DM的随机对照试验(RCT)。对符合纳入标准的文献进行资料提取,采用Cochrane风险偏倚评估工具5.1.0进行质量评价后,采用Stata 12.0软件进行Meta分析。结果:共纳入11项RCT,合计7003例患者。Meta分析结果显示,试验组患者糖化血红蛋白(HbA1c)水平降低值[SMD=-0.49,95%CI(-0.53,-0.44),P<0.001]、HbA1c水平降低值≥0.5%且未发生严重低血糖的患者比例[OR=3.93,95%CI(3.49,6.21),P<0.001]、HbA1c水平降低值≥0.5%的患者比例[OR=2.65,95%CI(2.25,3.12),P<0.001]、HbA1c水平<7.0%的达标率[OR=2.85,95%CI(2.44,3.33),P<0.001]、体质量降低值[SMD=-0.83,95%CI(-0.96,-0.70),P<0.001]均显著大于或高于对照组,每日胰岛素用量、空腹血糖、餐后血糖、收缩压、舒张压的降低值均显著大于对照组,差异均有统计学意义(P≤0.011)。试验组患者总体不良反应发生率[OR=1.14,95%CI(1.04,1.26),P=0.007]、SGLT-2抑制剂相关的不良反应发生率[OR=2.17,95%CI(1.75,2.99),P<0.001]、严重不良反应发生率[OR=1.48,95%CI(1.24,1.77),P<0.001]、生殖器感染发生率[OR=3.84,95%CI(3.14,4.69),P<0.001]、腹泻发生率[OR=1.47,95%CI(1.09,1.97),P=0.011]、体液减少相关不良反应发生率[OR=2.05,95%CI(1.37,3.08),P=0.001]、酮症相关不良反应发生率[OR=4.18,95%CI(3.15,5.55),P<0.001]、酮症酸中毒发生率[OR=4.33,95%CI(3.01,6.23),P<0.001]、严重酮症酸中毒发生率[OR=5.06,95%CI(2.61,9.81),P<0.001]均显著高于对照组,差异均有统计学意义;两组患者低血糖、严重低血糖、尿路感染、肾损伤的发生率比较,差异均无统计学意义。结论:SGLT-2抑制剂用于T1DM的联合治疗,可显著改善患者血糖水平,降低体质量、减少每日胰岛素用量、降低收缩压和舒张压,且不增加低血糖、尿路感染、肾损伤的发生风险,但总体不良反应、生殖器感染、腹泻、酮症酸中毒等不良反应的发生风险增加,需予以关注。

胰高糖素样肽-1受体激动剂联合钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂在2型糖尿病中的应用

糖尿病目前是严重威胁人类健康的世界性重大公共卫生问题。因长期血糖控制不佳从而导致各种并发症,严重影响着患者的生活质量。糖尿病的治疗不单单在于血糖的控制,最重要的是并发症的治疗和预防。近年来,对降糖药物的探索中,胰高血糖素样肽-1受体激动剂联合钠葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂治疗2型糖尿病且在心血管、肾脏及其他代谢方面有诸多益处。本文综述了胰高血糖素样肽-1受体激动剂联合钠葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂在治疗2型糖尿病的应用。

胰高糖素样肽-1激动剂联合钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂对2型糖尿病的影响

近年来,全球糖尿病患病率逐年增加,其中2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)占糖尿病总患病人数的90%~95%。胰高糖素样肽-1(glucagon-like peptide 1,GLP-1)激动剂联合钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂(sodium-glucose co-transporter 2 inhibitor,SGLT2)是治疗T2DM的新型降糖药物。本文讨论在给予规范的生活方式(饮食和运动)干预下,GLP-1激动剂联合SGLT2抑制剂对T2DM的安全性和有效性。

牛阴离子交换蛋白1和生电碳酸氢钠协同转运蛋白亲水结构域的克隆·表达和纯化

[目的]表达和纯化牛阴离子交换蛋白1(AE1)和生电碳酸氢钠协同转运蛋白(NBCe1)的亲水结构域。[方法]根据AE1和NBCe1的亲水结构域设计引物,通过PCR扩增牛AE1和NBCe1的亲水结构域,通过原核表达系统,以E.coliBL21(DE3)为表达宿主,经IPTG诱导,表达重组的牛AE1和NBCe1的亲水结构域融合蛋白,并采用金属螯合层析法对目的蛋白进行纯化。15%SDS-PAGE分析目的蛋白的表达、分布和纯度。[结果]PCR扩增了牛AE1和NBCe1的亲水结构域;IPTG诱导后,成功的表达了目的蛋白;目的蛋白主要存在大肠杆菌的胞浆中,可以被较好的纯化。[结论]牛AE1和NBCe1的亲水结构域蛋白的表达为制备抗体和研究膜载体蛋白的调节机理提供了条件。

钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂对心血管系统影响的研究进展

钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂是一类新型的抗高血糖药物,该药通过抑制肾小管上皮细胞SGLT2的功能以减少尿中葡萄糖的重吸收,从而达到降低血糖的目的。该药除了降血糖,还具有降低血压、体质量及尿酸水平,改善血脂异常等心血管危险因素的作用,对心血管系统有较好的保护作用,且不良反应小、安全可靠。该类药物在国外上市以来受到广泛关注,随着对药物研究的深入,其作用机制及不良反应也越来越明确,应用也将越来越广泛。

SGLT-2抑制剂通过Nrf2/HO-1信号通路对2型糖尿病合并高血压大鼠动脉重构的干预作用

目的探究钠-葡萄糖协同转运蛋白(SGLT)-2抑制剂通过核因子-E2相关因子(Nrf)2/血红素氧合酶(HO)-1信号通路对2型糖尿病合并高血压大鼠基底动脉重构的干预作用。方法用自发性高血压大鼠(SHR)高糖高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病合并高血压大鼠模型,造模成功后分为对照组、模型组和试验组各15只,实验组采用1 mg/(kg·d)达格列净灌胃,模型组和对照组给予等量生理盐水灌胃。8 w后血糖仪检测各组血糖水平,苏木素-伊红(HE)染色检测各组基底动脉病理情况,免疫荧光法检测基底动脉核增殖指数(Ki67)表达水平,Western印迹检测点各组基底动脉Nrf2和HO-1蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组血糖显著升高,基底动脉动脉血管壁厚管腔内径管腔外径和中膜面积均明显增加,Ki67表达显著增加,基底动脉平滑肌细胞排列紊乱,出现线粒体空泡化等现象,Nrf2及HO-1表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,试验组血糖水平下降,基底动脉动脉血管壁厚管腔内径管腔外径和中膜面积均明显降低,Ki67表达水平显著降低,超微结构病理学结构有所好转,Nrf2及HO-1表达水平显著上升(P<0.05)。结论SGLT-2抑制剂可以对2型糖尿病合并高血压大鼠基底动脉重构发挥干预作用,其机制可能与Nrf2/HO-1信号通路的调控相关。

Na-K-CI +协同转运蛋白作为药物靶点的研究进展

Na-K-C1协同转运蛋白存在于人体和动物多处组织中,在不周部位发挥着不同的功能作用,与多种疾病存在着密切关联,是有潜力的药物靶点。本文就Na-K-C1协同转运蛋白(NKCC)的蛋白结构、体内分布情况,在正常生理活动和疾病中调节作用,以及NKCC作为药物靶点的药物开发技术进行综述。

肝再生过程中胆汁酸对肝细胞cyclinD1和NTCP蛋白表达的影响

目的观察大鼠肝再生过程中胆汁酸对肝细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和Na+依赖牛磺胆酸钠协同转运蛋白(NTCP)表达的影响。方法雄性Wistar大鼠72只随机分为胆酸缺乏组、胆酸负荷组和对照组,分别饲以2%无水考来烯胺饲料、0.2%胆酸饲料和标准饲料,7 d后行70%肝部分切除术。分别在术后6 h,12 h Western blot检测再生肝组织cyclin D1的蛋白表达,术后24 h检测NTCP的蛋白表达。结果术后6 h,胆酸缺乏组肝组织cyclin D1相对表达量显著低于对照组(0.09±0.02 vs 0.18±0.05,P<0.05),而胆酸负荷组(0.31±0.11)显著高于对照组(P<0.05)和胆酸缺乏组(P<0.01);术后12 h,胆酸缺乏组、胆酸负荷组和对照组肝组织cyclin D1的相对表达量分别为0.59±0.21,0.87±0.32和0.54±0.18,胆酸缺乏组与对照组间无统计学差异,但均显著低于负荷组(P<0.05)。术后24 h,胆酸缺乏组的NTCP蛋白相对表达量最高(0.51±0.11),而胆酸负荷组NTCP的表达量(0.23±0.05)最低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠肝再生过程中,体内缺乏胆汁酸可显著降低肝组织cyclin D1蛋白的表达,同时伴有和肝细胞极性密切相关的NTCP蛋白表达的上调。

SGLT-2抑制剂联合GLP-1受体激动剂治疗2型糖尿病肾病的疗效观察

目的探讨SGLT-2抑制剂(SGLT-2i)与GLP-1受体激动剂(GLP-1Ra)单独或联合使用治疗2型糖尿病肾病(T2DN)的疗效。方法回顾性分析2021年5月~2022年12月住院期间使用SGLT-2i和(或)GLP-1Ra治疗的T2DN患者,分为SGLT-2i组(n=34),GLP-1Ra组(n=32),SGLT-2i联合GLP-1Ra治疗组(n=40)。收集各组患者用药前后的血糖、生化及肾功能指标,并进行分析比较。结果与治疗前相比,联合组治疗后的空腹血糖(FPG),GLP-1Ra组治疗后的糖化血红蛋白(HbA1c),SGLT-2i组治疗后的尿β2微球蛋白水平均有所改善,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组治疗后的甘油三酯(TG)与SGLT-2i组、GLP-1Ra组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。GLP-1Ra组与SGLT-2i组对比,各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论SGLT-2i和GLP-1Ra联合用药可能对T2DN患者的血糖及肾功能指标改善方面不一定产生疗效叠加的效果,仍需大量的临床试验加以证实。

补虚解毒化瘀方通过调控NCC/HIF-1α信号通路对梗阻性肾病大鼠的作用

目的探究补虚解毒化瘀方对梗阻性肾病大鼠对侧肾脏肾小管上皮细胞表型转化的作用。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组、依普利酮组和中药(补虚解毒化瘀方)组,采用单侧输尿管结扎法制备梗阻性肾病大鼠模型,给予相应药物干预后,采用Masson染色观察肾脏病理形态,Western blot、免疫组化和免疫荧光法检测血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶-1(SGK-1)、钠氯协同转运蛋白(NCC)、低氧诱导因子(HIF-1α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,RT-qPCR法检测SGK-1、TGF-β1 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾小管间质炎性细胞浸润和局灶性胶原纤维沉积增加(P<0.01),SGK-1、NCC、HIF-1α、TGF-β1、Vimentin、α-SMA蛋白表达和SGK-1、TGF-β1 mRNA表达均升高(P<0.05,P<0.01);给予中药治疗后可改善以上指标(P<0.05,P<0.01)。结论大鼠单侧输尿管梗阻可以上调对侧肾组织NCC表达,刺激HIF-1α表达并诱导小管上皮细胞表型转化,而补虚解毒化瘀方可调控NCC/HIF-1α信号通路抑制细胞表型转化。

海水浸泡开放性颅脑外伤早期水通道蛋白4和Na＋-K＋-2Cl-协同转运蛋白1表达的改变

目的了解海水浸泡开放性颅脑外伤早期水通道蛋白4（AQP4）和Na＋-K＋-2Cl-协同转运蛋白1（NKCCl）的表达，及其与脑水肿和血脑屏障破坏程度的关系。方法选取102只sD大鼠，采用控制性皮质撞击法造成不同程度的脑外伤，致伤后将局部损伤的脑组织浸泡在人工海水或生理盐水中，构建动物模型。采用随机数字表法将大鼠分为海水浸泡组和生理盐水浸泡组，每组51只。另选取17只大鼠作为对照组。观察各组在浸泡后3、8和24h时间点上病理学、脑含水量、血脑屏障开放程度、AQP4蛋白和NKCCl表达水平。结果与生理盐水浸泡组相比较，海水浸泡组AQP4表达水平在浸泡后3h（0．222±0．018）和8h（0．228±0．01S）显著降低，而浸泡后24h（0．462±0．013）表达水平显著升高，并超越生理盐水浸泡组；海水浸泡组NKCCl表达水平24h（0．050±0．012）内均处于明显降低的水平。结论海水浸泡对血脑屏障产生明显破坏，导致海水浸泡开放性颅脑外伤具有脑水肿发生晚但程度重的特点。海水浸泡后AQP4表达水平具有先抑制后促进的特点，其与脑组织含水量有类似的变化，值得进一步研究。

布美他尼后处理对大鼠创伤性颅脑损伤后NKCC1表达及脑含水量的影响

目的探讨布美他尼后处理对大鼠创伤性颅脑损伤后Na＋-K＋-2Cl-协同转运蛋白1（NKCC1）表达及脑含水量的影响。方法雄性SD成年大鼠90只,体重220-300 g。采用随机数字表法,将大鼠分为3组：假手术组（S组）、脑创伤组（TBI组）和布美他尼后处理组（TBI-B组）。采用自由落体撞击法制备创伤性颅脑损伤模型。S组接受同样的操作但不接受撞击,TBI-B组于创伤后30 min给予布美他尼30 mg/kg,TBI组给予等量的生理盐水。TBI组和TBI-B组在创伤后12 h测动脉压并取动脉血行血气分析,于创伤后2、12、24 h处死大鼠并取脑,测定皮质NKCC1的表达和脑含水量。结果与S组比较,TBI组和TBI-B组NKCC1表达水平和脑含水量在创伤后12、24 h升高（P〈0.05,P〈0.01）;与TBI组比较,TBI-B组NKCC1表达和脑含水量在创伤后12 h、24 h降低（P〈0.05,P〈0.01）。结论布美他尼后处理可减轻成年大鼠创伤性脑损伤,其机制可能与布美他尼减少大鼠脑组织NKCC1表达有关。

大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E中VDR、PKC及其相互作用对Na DC1表达的影响

目的:探究大鼠肾小管上皮细胞NRE-52E中蛋白激酶C(PKC)、维生素D受体(VDR)及其相互作用对钠离子依赖性二羧酸协同转运蛋白1(Na DC1)表达的影响。方法:体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRE-52E,采用PKC激动剂和PKC抑制剂干预NRE-52E细胞,并用VDR过表达载体及VDR-shRNA载体转染NRE-52E细胞,结合Western blot检测细胞中PKC、VDR和Na DC1的蛋白表达情况。结果:成功建立VDR稳定过表达和VDR稳定干扰的NRK-52E细胞株。与对照组比较,PKC激动剂组VDR和Na DC1蛋白表达量显著上调(P <0. 01),VDR过表达组的PKC和Na DC1蛋白表达量显著上升(P <0. 01),VDR干扰+PKC激动剂组和VDR过表达+PKC抑制剂组中PKC和Na DC1蛋白的表达水平均介于VDR干扰组与VDR过表达组之间。结论:在大鼠肾小管上皮细胞NRE-52E中PKC活性增强诱导VDR蛋白表达,PKC活性减弱抑制Na DC1蛋白表达;VDR与PKC和Na DC1的蛋白表达存在明显正相关;PKC与VDR相互作用时PKC高活性和VDR过表达是促进或维持Na DC1蛋白表达的主要因素。

恩格列净对糖尿病小鼠肾脏保护作用的机制研究

目的探究恩格列净对肾脏保护作用的新机制。方法将8周龄雄性SPF级C57/BL6J小鼠随机分为两组,正常对照(NC)组(n=7)和高脂(HFD)组(n=23)。NC组常规饲料喂养,高脂组60%HFD喂养。HFD小鼠喂养12周后,腹腔注射0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液稀释的链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg);NC组小鼠,腹腔注射等容积的0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液。将造模成功的小鼠随机分为糖尿病(DM)组(n=8)、DM+利格列汀干预(DM+Lina)组(10 mg/kg,n=7)、DM+恩格列净干预(DM+Empa)组(25 mg/kg,n=8)。药物干预12周后留取血尿标本,生化仪检测小鼠肝肾功能、ELISA法检测血β-羟丁酸(β-HB)及生化试剂盒检测尿微量白蛋白(MAU)、视黄醇结合蛋白(RBP)、β2微球蛋白(β2-MG)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)等尿生化指标,留取肾脏组织,观察各组小鼠肾脏病理结构变化,并应用Western blot检测相关蛋白的表达。结果DM+Empa组的随机血糖、体重、总胆固醇、低密度脂蛋白水平、游离脂肪酸、肌酐低于DM组,DM+Empa组的血β-HB高于NC组、DM组及DM+Lina组,差异有统计学意义(P<0.05)。DM+Empa组的RBP、NAG、MAU低于DM组,差异有统计学意义(P<0.05),同时DM+Empa组的尿β-HB与NC组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病小鼠肾脏钠-偶联单羧酸转运蛋白1(SMCT1)低表达,恩格列净干预后可上调其表达水平;糖尿病小鼠存在肾脏超微结构损伤,恩格列净干预后可改善其病理损伤。结论恩格列净对肾脏保护作用之一可能是通过增加肾脏SMCT1的表达,SMCT1可能是治疗糖尿病肾脏病的一个新靶点。