Hippo-YAP通路参与NaAsO 2对PC12细胞周期及细胞凋亡的影响

目的探讨NaAsO 2对PC12细胞YAP蛋白核质分布的影响及Hippo-YAP通路在NaAsO 2影响细胞周期及细胞凋亡中的作用。方法以PC12细胞作为研究对象,利用核质分离及免疫荧光观察NaAsO 2对YAP蛋白核质分布的影响。再将细胞分为control组、NaAsO 2组和NaAsO 2+XMU-MP-1(MST1/2抑制剂)组、XMU-MP-1组,利用流式细胞术、Western blot验证Hippo-YAP通路在NaAsO 2影响细胞周期及细胞凋亡中的作用。结果相较于control组,核质分离与免疫荧光结果都表明NaAsO 2组细胞质中YAP蛋白明显增加(P<0.05),细胞核中YAP蛋白明显下调(P<0.01);并且NaAsO 2组p-MST1、p-LATS1、p-YAP以及凋亡相关蛋白P53和BAX表达明显上调(P<0.05),BCL-2蛋白表达明显下调(P<0.01);G 0/G 1期细胞比例降低(P<0.01),S期比例上升(P<0.05);细胞凋亡率增加(P<0.01)。与NaAsO 2组相比,NaAsO 2+XMU-MP-1组上述指标均有逆转(P<0.05)。结论Hippo-YAP通路可能参与NaAsO 2对PC12细胞周期及细胞凋亡的影响。

亚砷酸钠所致L-02人肝细胞损伤与p14ARF表达下调及MDM2、 p53表达增加有关

目的研究亚砷酸钠(NaAsO2)致L-02人肝细胞损伤过程中p14可变读框(p14ARF)、鼠双微基因2(MDM2)和p53的表达变化。方法用(0、5、10、15、20、25)μmol/L NaAsO2分别处理L-02细胞48 h,相差显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测p14ARF、MDM2和p53 mRNA及蛋白表达。结果与对照组相比,随着NaAsO2浓度增加,染砷组L-02肝细胞增殖活性逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高,p14ARF mRNA及蛋白水平逐渐降低,MDM2 mRNA及蛋白水平逐渐升高,p53 mRNA水平变化不明显,p53蛋白水平逐渐升高。结论NaAsO2所致L-02肝细胞损伤可能与p14ARF表达下调及p53、MDM2表达的上调有关。

砷中毒对大鼠纹状体神经细胞与肝组织的毒性和氧化应激作用

为研究NaAsO_2(亚砷酸钠)中毒对成年SD大鼠纹状体的神经细胞及肝脏形态学的影响,以及NaAsO_2中毒对SD大鼠神经毒性和肝毒性的作用,我们对染毒后的组织进行HE染色并观察。采用12周龄SD大鼠48只,体重200±20 g,随机分组:正常对照组(自由饮水),实验组按剂量递增方式分为低、中、高剂量NaAsO_2染毒组(按照5、10、20 mg/kg的比例配制蒸馏水,自由饮用),各组12只,均采用普通饲料喂养,建造染砷模型12周后取大鼠脑组织纹状体部分,常规石蜡切片后,HE染色,光镜观察大鼠纹状体神经细胞与肝结构的形态学是否发生改变,同时使用试剂盒检测纹状体与肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力(WST-1法)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)(微板法)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)(TBA法)的含量。结果显示,利用苏木素-伊红(HE)染色可见:NaAsO_2染毒组的纹状体神经细胞与对照组相比较,神经细胞胞体形态欠规则,数量稀疏且减少,胞浆内可见明显空泡样变,镜下可见坏死水肿的神经细胞。NaAsO_2染毒组的肝组织较正常组出现病理性改变:例如变性、坏死、组织出现水肿及炎性细胞浸润等,与对照组相比,各剂量NaAsO_2染毒组大鼠的纹状体组织及肝脏的SOD活力,GSH含量均降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,各剂量NaAsO_2染毒组大鼠的纹状体组织及肝脏的MDA含量均升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。由此可知,大鼠纹状体神经细胞形态结构及肝组织结构产生损伤可能由NaAsO_2导致其中毒,同时提示NaAsO_2致大鼠纹状体及肝组织的毒性作用可能与氧化应激相关。

砷对兰州鲇组织中代谢酶活性及RNA和蛋白质含量影响

采用毒性试验方法,研究了安全浓度(1.288 mg/L)条件下亚砷酸钠(NaAsO2)对兰州鲇(Silurus lanzhouensis)脑、鳃、肝脏、肌肉4种组织中6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PDH)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,以及RNA和蛋白质含量的影响。结果表明,染毒21d时,As(Ⅲ)可显著降低4种组织中G-6-PDH和LDH活性、RNA和蛋白质含量(P≤0.05)。撤毒后21d,除脑和肝组织中蛋白质含量未恢复到对照组水平(P≤0.05),肝脏中G-6-PDH活性超过了对照组水平(P≤0.05)外,其余各组织中G-6-PDH和LDH活性、RNA和蛋白质含量均可恢复到对照组水平(P>0.05)。以上结果表明,As(Ⅲ)对兰州鲇组织中代谢酶活性具有明显的抑制作用,可致组织细胞RNA损伤和可溶性蛋白质减少,但这种影响是可逆的,撤毒后一定时间内可恢复到正常水平。

砷诱导蚕豆气孔保卫细胞死亡的毒性效应

采用蚕豆(Vicia faba L.)叶面气孔保卫细胞,研究砷对细胞的毒性效应。结果表明,0.3—10 mg/L的NaAsO_2能降低保卫细胞活性,使部分细胞死亡,死亡率随砷浓度升高而增高。死细胞中呈现核固缩、核崩解等典型程序性死亡特征,且泛caspase抑制剂Z-Asp-CH_2-DCB能阻止NaAsO_2诱发的细胞死亡。过氧化氢清除剂过氧化氢酶与NaAsO_2共同作用时,细胞死亡率显著低于砷单独处理组,保卫细胞内Ca^(2+)水平降低,具程序性死亡特征的细胞数减少;Ca^(2+)特异性螯合剂EGTA亦能降低NaAsO_2诱发的细胞死亡。研究结果表明,NaAsO_2能诱发蚕豆保卫细胞程序性死亡,该过程由胁迫引发的ROS升高引起,ROS可能通过激活质膜Ca^(2+)通道,使胞外Ca^(2+)内流,造成胞内Ca^(2+)浓度升高,进而诱导细胞程序性死亡。

亚砷酸钠影响免疫功能相关基因表达水平的研究

目的:利用基因芯片技术研究亚砷酸钠对免疫功能相关基因表达的影响 ,探讨砷的分子遗传学机制。方法 :将肝细胞 c DNA克隆库的基因点在芯片上 (每个克隆的基因尚未知 ) ,然后与暴露于不同砷浓度肝细胞中得到的 c DNA第一链杂交 ,对表达有差异的基因进行基因测序 ,再明确基因 ,最后筛选出与免疫功能相关的基因。 结果 :砷可通过抑制细胞角蛋白 8基因 (CK8)和人类白细胞抗原 A基因 (HL A- A)的表达来影响机体免疫功能。 结论 :从基因水平研究砷对免疫功能的作用机制是可行的 。

活性氧介导砷诱导的蚕豆保卫细胞死亡

采用蚕豆(Vicia fabaL.)表皮条生物法,研究砷的细胞毒性作用机制。结果发现,一定浓度的NaAsO2可使气孔保卫细胞活性降低,部分细胞死亡,细胞死亡率呈浓度依赖性增高;砷处理组保卫细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平升高。抗氧化剂抗坏血酸和过氧化氢酶及Ca2+特异性螯合剂EGTA、Ca2+通道抑制剂LaC13与NaAsO2共同作用时,砷诱发的细胞死亡被显著抑制;MAPK激酶抑制剂PD98059亦能有效阻止NaAsO2诱发的细胞死亡。研究结果表明,砷胁迫引起的胞内ROS合成增加可能通过Ca2+信号途径介导了保卫细胞的死亡过程,MAPK途径参与了砷诱导的细胞死亡。

NaAsO_2对L-02肝细胞Cyto-c释放和Caspase-3表达的影响

目的观察NaAsO2在诱导人胚肝细胞株(L-02)细胞凋亡过程中对细胞色素-C(Cytochrome C;Cyto-c)释放和半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法分别以0(对照组)、50、100和150μmol/L的NaAsO2染毒L-02肝细胞24 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测Cyto-c和Caspase-3在NaAsO2诱导L-02肝细胞凋亡过程中的变化。结果流式细胞术检测到0、50、100和150μmol/L浓度NaAsO2组细胞凋亡率为6.3%±0.40%、12.1%±0.89%、20.15%±0.50%和28.23%±4.77%。与对照组相比细胞凋亡率明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Western blot法检测Cyto-c的释放量分别是1.10%±0.35%,1.73%±0.73%、1.83%±0.67%和2.43%±0.74%,随染砷剂量的增加而增加,仅高剂量组差异具有统计学意义(P<0.05);Caspase-3分别为0.41%±0.45%,0.74%±0.14%、0.76%±0.04%和1.02%±0.18%,随染砷剂量的增加而增加,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);结论在该试验条件下,NaAsO2可诱导L-02肝细胞发生凋亡,Cyto-c和Caspase-3在细胞凋亡过程中发挥着重要作用。

亚砷酸钠致脏器细胞DNA链断裂的实验研究

目的 观察不同剂量亚砷酸钠 (NaAsO2 )在不同时相引发小鼠体内细胞DNA链断裂损伤的影响。方法 采用单细胞凝胶电泳法 (SCGE)分别测定ICR小鼠皮下注射NaAsO2 0 .4 ,2 ,10mg/kg后 1,3,6h的脾脏、胸腺、骨髓和肝细胞的DNA链断裂损伤。结果 不同剂量亚砷酸钠注射后 ,可以发现 2和 10mg/kgNaAsO2 可诱发脾细胞、胸腺细胞、骨髓细胞DNA链断裂 ,各组出现的彗星细胞百分比明显高于对照组 ,同时DNA迁移距离也较对照组明显增大 ;而在染毒后不同时相观察的结果表明 ,NaAsO2 诱发脾细胞出现DNA链断裂损伤在 1h最为明显 ,而胸腺细胞和骨髓细胞相对较晚 ,DNA链断裂损伤高峰出现在染毒 3h ;染毒 6h ,各种组织细胞的DNA链断裂损伤开始减少 ,逐渐趋于正常。各剂量组及时间点均未观察到亚砷酸钠有诱导肝细胞DNA链断裂损伤的作用。结论 2mg/kg和 10mg/kgNaAsO2 可诱发小鼠体内脾、胸腺和骨髓细胞的DNA链断裂损伤 ,但不同细胞对NaAsO2

tBHQ对NaAsO_2诱导HaCaT细胞凋亡的拮抗作用

目的探讨叔丁基对苯二酚(tertiary butylhydroquinone,tBHQ)对亚砷酸钠(NaAsO2,sodium arsenite)诱导人角质上皮HaCaT细胞凋亡的拮抗作用。方法 tBHQ(10、25、50μmol/L)预处理12 h,再与NaAsO2(5、10、30μmol/L)共同处理HaCaT细胞24 h。用Annxin V/PI染色流式细胞术法检测细胞凋亡率;DAPI染色观察细胞形态学改变;JC-1法测定线粒体膜电位。结果将实验数据进行ANOVA分析处理后表明,5,10、30μmol/L NaAsO2单独作用时,细胞凋亡率与对照组相比显著升高,而线粒体膜电位则显著下降(P<0.05或P<0.01),形态学观察可见高强度DAPI染色细胞数目增加和凋亡小体出现;当给予tBHQ(10、25、50μmol/L)预处理后,NaAsO2致HaCaT细胞凋亡率升高和线粒体膜电位下降均明显受到抑制(P<0.05),形态学观察可见高强度DAPI染色细胞数目和细胞核碎片明显减少。结论实验结果表明tBHQ可能通过线粒体凋亡途径抑制NaAsO2引起的HaCaT细胞凋亡。

应用流式细胞仪研究As_2O_3及NaAsO_2诱导EBL7404细胞及HeLa细胞分化

目的用流式细胞仪研究As2O3及NaAsO2诱导EBL7404细胞及HeLa细胞分化。方法采用0.25μmol/L的As2O3及NaAsO2同EBL7404细胞及HeLa细胞共同作用7 d后,用CD44作为宫颈及肝癌细胞的特异性抗原进行标记,应用流式细胞仪进行肿瘤细胞与分化细胞的分选。结果 0.25μmol/L的As2O3及NaAsO2同EBL7404细胞及HeLa细胞共同作用7 d后均有肿瘤细胞进行了不同程度的分化。以0.25μmol/L NaAsO2处理的HeLa细胞分化率最高,为1.8%,其次为0.25μmol/L As2O3处理的HeLa细胞,分化率为0.7%,0.25μmol/L As2O3处理的EBL7404细胞为0.6%,0.25μmol/LNaAsO2处理的EBL7404细胞分化率为0.3%。结论低剂量的As2O3及NaAsO2同EBL7404细胞及HeLa细胞共同作用一段时间后,均有不同细胞分化。

亚砷酸钠诱导SH-SY5Y细胞凋亡及硫化氢的干预作用

目的:探讨亚砷酸钠(NaAsO 2)对SH-SY5Y细胞凋亡的影响,同时观察硫化氢(H 2S)的干预作用。方法:将SH-SY5Y细胞按24 h、48 h各分为对照组、NaAsO 2(20μmol/L)组、NaAsO 2(40μmol/L)组、NaHS(400μmol/L)组、NaHS+NaAsO 2(20μmol/L)组及NaHS+NaAsO 2(40μmol/L)组,采用Hoechst33342/PI双染法、流式细胞术和Western blot检测各组细胞形态、细胞凋亡及相关蛋白改变。结果:荧光显微镜观察发现,与对照组比较,20和40μmol/L NaAsO 2暴露24 h或48 h均剂量依赖性增加细胞凋亡率,20或40μmol/L NaAsO 2仅暴露48 h增加的凋亡率可被NaHS所拮抗(P<0.05),而20或40μmol/L NaAsO 2暴露24 h对凋亡的增长却不被NaHS所拮抗(P>0.05);流式细胞术检测显示,与对照组比较,20、40μmol/L NaAsO 2预处理24或48 h均诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,且呈浓度依赖性效应(P<0.05),20或40μmol/L NaAsO 2仅作用48 h所诱导的凋亡可被NaHS所逆转(P<0.05),而20或40μmol/L NaAsO 2暴露24 h对凋亡的增长却不被NaHS所拮抗(P>0.05);Western blot提示,20或40μmol/L NaAsO 2暴露24 h能够剂量依赖性增加cleaved Caspase-12蛋白表达、且该作用被NaHS所拮抗(P<0.05),NaAsO 2可以降低Caspase-12蛋白表达、但不被NaHS所逆转(P>0.05)。结论:外源性H 2S能抑制NaAsO 2诱导的细胞凋亡,可能与降低激活的Caspase-12蛋白表达有关。

MST过表达及亚砷酸钠对SH-SY5Y细胞的影响

目的:探讨亚砷酸钠(NaAsO 2)、巯基丙酮酸硫转移酶(MST)基因过表达对SH-SY5Y细胞的作用及机制。方法:将空载体转染细胞、MST过表达细胞各分为对照组、NaAsO 2组、TUDCA(内质网应激阻断剂)组、NaAsO 2联合TUDCA组,采用MTT、Western blot和酶活性检测等方法观察细胞活力、Bax、Bcl-2凋亡相关蛋白表达及Caspase-3活性。结果:50μmoL/L NaAsO 2暴露24 h显著降低空转组细胞活力和Bcl-2蛋白水平(P<0.01),增加Bax蛋白表达及Caspase-3活性(P<0.01);TUDCA预处理可以逆转以上变化,Bcl-2的蛋白表达则在MST基因过表达细胞砷暴露后发生显著增加,但可被TUDCA所拮抗(P<0.01)。结论:内质网应激可能参与砷、内源性H 2S对SH-SY5Y细胞损伤的影响。

化风丹对大鼠的亚慢性肝肾毒性研究

目的：比较古方化风丹、万胜化风丹、廖元和堂化风丹、去朱砂雄黄化风丹以及氯化汞（HgCl2）、亚砷酸钠（NaAsO2）对大鼠肝肾组织的亚慢性毒性作用。方法：清洁级SD大鼠每天分别灌胃古方化风丹（420mg·kg^-1,含朱砂10%、雄黄10%）、万胜化风丹（420mg·kg^-1,含朱砂3%、雄黄3%）、廖元和堂化风丹（420mg·kg^-1,含朱砂3%、雄黄3%）、去朱砂雄黄化风丹（420mg·kg^-1,含朱砂0%、雄黄0%）、HgCl2（5mg·kg^-1）和NaAsO2（25mg·kg^-1）,连续喂食60天,并设正常对照组,观察大鼠一般情况及体重,于末次给药后断头取血、肝脏及肾脏,计算肝脏指数和肾脏指数,检测大鼠血清谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、尿素氮、肌酐含量,检测肝、肾组织中汞砷蓄积量,RT-PCR法检测肾蛋白激酶1（Kim-1）、金属硫蛋白-1（MT-1）、基质金属蛋白酶7（MMP7）、肝组织金属硫蛋白-2（MT-2）、蛋白激酶1（Kim-1）及细胞色素P450酶（CYP2B1、CYP2E1、CYP3A1）水平变化。结果：氯化汞组、亚砷酸钠组大鼠在各时间段体重增长均显著低于正常组（P〈0.05）,古方化风丹组大鼠在60d时体重低于正常（P〈0.05）,其他化风丹各组大鼠体重、一般情况与正常组比较均无明显差异;与正常组比较,氯化汞组大鼠血清谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、尿素氮、肌酐含量以及肝肾指数均明显增高（P〈0.05）,亚砷酸钠组亦有不同程度的升高,化风丹各组则与正常组无明显差异;氯化汞组（亚砷酸钠组）在大鼠肝肾组织的汞（砷）蓄积量明显升高（P〈0.05）,含朱砂（雄黄）的各组化风丹在肝肾组织的汞（砷）蓄积量仅为其1/5～1/10,且古方化风丹与现代方化风丹在肝肾组织的汞（砷）蓄积量与其所含朱砂（雄黄）的含量无明显倍数关系;氯化汞组及亚砷酸钠组对大鼠肝脏Kim-1、MT-2mRNA相对表达量均有显著的升高,且氯化汞组显著高于亚砷酸钠组（P〈0.05）。古方化风丹组及万胜化风丹组可轻度诱导大鼠肝脏MT-2mRNA的相对表达,但化风丹各组方对大鼠肝脏Kim-1 mRNA相对表达量无明显诱导作用。化风丹各组方可显著增加肝脏CYP2B1mRNA的相对表达量（P〈0.05）,而对肝脏CYP2E1、CYP2A1mRNA的相对表达量呈不同程度的抑制作用,且对CYP3A1mRNA相对表达量抑制作用较为显著（P〈0.05）。氯化汞组及亚砷酸钠组对CYP2B1mRNA的相对表达量无明显影响,对CYP2E1mRNA的相对表达量有显著的增加作用（P〈0.05）。而氯化汞组对CYP2A1mRNA的相对表达量有显著的增加作用（P〈0.05）。同时,与正常组比较,氯化汞组及亚砷酸钠组对大鼠肾Kim-1、MT-1和MMP-7mRNA相对表达量均呈显著的诱导作用（P〈0.05）。化风丹各组方（除外去朱砂雄黄组）对MT-1mRNA相对表达量亦有轻度诱导作用。病理学检查显示,正常组及化风丹各组肝组织中存在较多的脂肪空泡,未见其他显著的病理损伤,化风丹各组肾组织病理切片与正常组比较无明显差异,而氯化汞及亚砷酸钠两组镜下可见较多的肝肾损伤表现,且氯化汞组相对较重。结论：给予大鼠化风丹60d并未引发机体肝肾组织的明显毒性反应,通过减少化风丹中朱砂、雄黄含量来降低化风丹毒性无确切依据。

Morris水迷宫法探讨化风丹对大鼠空间记忆能力的影响

目的：比较万胜化风丹、廖元和堂化风丹、氯化汞（HgCl2）和亚砷酸钠（NaAsO：）对健康SD大鼠空间记忆能力的影响。方法：清洁级SD大鼠每天分别喂食万胜化风丹（420rag·kg-1，含汞10．9mg·kg-1，含砷8．8mg·kg-1）、廖元和堂化风丹（420mg·kg，含汞10．9mg·kg，含砷8．8mg·kg。）、HgCl＼-2（5mg-kg，含汞3．7g·kg-1）、NaAsO＼-2（5mg·kg-1，含砷2．9mg·kg-1）以及空白对照组，持续60天，使用Morris水迷宫（MwM）法检测其空间学习能力。结果：用药前大鼠潜伏期在第1～4天无明显变化，训练第5天各组潜伏期显著下降；用药后训练第1～5天各组潜伏期呈明显下降趋势。与正常组比较，用药前各组在第1～5天均无显著差异，用药后HgCl2组在第2～5天均有显著性差异（P〈0．05），万胜化风丹组、廖元和堂化风丹组及去NaAsO2组仅在第4天差异显著（P〈O．05）；与HgCl。组比较，用药前各组在第1～5天均无显著差异，用药后万胜化风丹组、廖元和堂化风丹组和NaAsO2组在第2～5天均差异显著（P〈0．05）。结论：HgCl2长期应用可显著降低大鼠中枢神经系统的空间记忆能力，化风丹对此无明显影响。

无机砷对肝细胞转录因子Nrf2及其调控蛋白表达影响

目的探讨不同时间和不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)暴露对Chang肝细胞株NF-E2相关因子2(Nrf2)、及其调控的下游抗氧化酶NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)蛋白表达的影响。方法25μmol/L NaAsO2作用Chang肝细胞2、4、6、12和24 h;或不同浓度的NaAsO2(10、25和50μmol/L)作用Chang肝细胞6 h,免疫印迹法(western blot)检测细胞内Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达情况。结果 25μmol/L的NaAsO2可以明显诱导Chang肝细胞Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达(P<0.01);Nrf2蛋白2 h开始明显诱导,4 h表达水平最高,此后随暴露时间的延长虽然表达有所下降,但持续至24 h仍明显高于对照组;NQO1的蛋白表达水平也从4 h开始增加并持续至24 h;HO-1的蛋白表达则从6 h开始明显诱导,且随暴露时间的继续延长表达持续上升,具有明显的时间-效应关系;10、25和50μmol/L NaAsO2染毒6 h,Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达均随染毒剂量的增加而大量诱导,具有明显的剂量-效应关系(P<0.01)。结论 NaAsO2暴露能够诱导Chang肝细胞Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达增强,且具有一定的剂量-效应关系。

COX-2在慢性砷暴露诱导小胶质细胞活化中作用及机制

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)在亚砷酸钠诱导小鼠小胶质细胞活化中的作用及机制。方法建立慢性小鼠饮水砷暴露模型,将20只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组(自来水)和砷暴露组(50 mg/L NaAsO2),连续自由饮水暴露12周。Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力;苏木精-伊红染色和透射电镜观察海马区神经元病理变化及超微结构改变;免疫荧光检测海马区离子钙结合配适分子-1(IBA-1)表达;蛋白印迹法(WB)检测海马区IBA-1、COX-2、核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测海马区白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果与对照组小鼠[逃避潜伏期(29.01±18.10)s、有效停留距离(11.78±1.25)cm]比较,砷暴露组小鼠逃避潜伏期[(50.79±12.30)s]延长,有效停留距离明显缩短[(9.34±2.34)cm](P<0.05);砷暴露组小鼠海马区出现细胞排列紊乱、水肿、皱缩等病理改变,荧光显微镜下IBA-1绿色荧光表达增多。与对照组[IBA-1(0.75±0.13)、NF-κB p65(0.86±0.14)、COX-2(0.74±0.12)表达水平及IL-6(43.37±1.11)pg/mL、TNF-α(198.46±9.93)pg/mL含量]比较,砷暴露组小鼠海马IBA-1(1.01±0.12)、NF-κBp65(1.23±0.11)、COX-2(1.14±0.13)表达水平及IL-6和TNF-α含量[分别为(93.61±3.18)、(604.00±25.02)pg/mL]明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论慢性砷暴露导致小鼠学习记忆损伤机制可能与小胶质细胞活化,激活NF-κB上调COX-2分泌促炎性细胞因子,促进神经炎症有关。

水通道蛋白9磷酸化对哺乳动物细胞中砷摄入的影响

目的研究水通道蛋白9(AQP9)mRNA表达水平、水通道蛋白9及p38蛋白表达及其磷酸化水平对肝癌细胞HepG2和肝正常细胞L-02砷摄入的影响,探讨水通道蛋白9磷酸化的调控机制。方法采用电感藕合等离子体质谱法(ICP-MS)测定细胞内砷含量。采用实时定量PCR、免疫印迹法和免疫共沉淀技术分别检测不同处理后两细胞株中水通道蛋白9 mRNA、水通道蛋白9和p38蛋白表达水平及其磷酸化水平。采用SPSS统计软件分析实验数据。结果 HepG2细胞内砷含量及摄入速度高于L-02细胞。HepG2细胞的水通道蛋白9 mRNA表达水平在6 h内随NaAsO2处理时间延长而显著增加(P<0.05),而在L-02细胞无明显变化。在2 h时,HepG2细胞水通道蛋白9基因表达水平在各NaAsO2处理浓度均显著增加(P<0.05)。免疫沉淀实验结果显示,HepG2细胞中水通道蛋白9蛋白磷酸化水平随NaAsO2处理时间和浓度的增加而增加,而L-02细胞在各时间和浓度处理点水通道蛋白9蛋白磷酸化水平与对照相比明显增加,但处理间无明显差异;p38的磷酸化水平在两种细胞中均随砷处理时间延长而增加;SB203580抑制p38活性后能完全取消L-02细胞水通道蛋白9蛋白的磷酸化,而对HepG2细胞水通道蛋白9蛋白磷酸化无明显影响。结论水通道蛋白9的表达及磷酸化水平可能在调节细胞砷摄入中发挥重要作用,在不同细胞中水通道蛋白9蛋白磷酸化的调控机制有所差异。

亚砷酸钠对HaCaT细胞增殖周期及ROS生成影响

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT)增殖、细胞周期及活性氧(ROS)生成影响。方法以0、25、50μmol/L NaAsO2作用于HaCaT细胞6 h后,以Alamar Blue还原法检测细胞增殖水平;以流式细胞仪检测细胞周期及ROS水平。结果 25、50μmol/L NaAsO2组细胞增殖水平分别为(93.5±1.18)%、(82.9±2.64)%,明显低于对照组(100±0.51)%(P<0.05);G2/M期细胞数分别为(19.15±0.29)%、(18.12±1.35)%,明显高于对照组(15.24±0.04)%(P<0.05);ROS水平分别为(128.61±6.23)%、(152.92±7.25)%,明显高于对照组(100.00±3.45)%(P<0.05)。结论 NaAsO2作用可引起HaCaT细胞ROS含量增高,同时G2/M期细胞数增多,但G2/M期细胞比例增高并不是由细胞增殖作用所引起。