蛇毒神经生长因子的分离纯化及鉴定

采用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０、ＣＭ－Ｃｅｌｕｌｏｓｅ３２柱层析，从中华眼镜蛇中分离出神经生长因子（ＮｅｒｖｅＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｅｒ，ＮＧＦ）。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ法证明所得到的ＮＧＦ为单一组分，相对分子质量约为１．３×１０４．经凝胶等电聚焦电泳测得ＮＧＦ等电点ＰＩ约为７．０左右．经ＨＰＬＣ及电泳图像分析系统测得纯度为９８％．此ＮＧＦ经８ｄ鸡胚背根神经节体外培养证明，具有促进神经纤维生长的活性．将所纯化的ＮＧＦ免疫大白兔获得抗血清。

舟山眼镜蛇毒神经生长因子的亲和层析分离

用层析和制备SDS-PAGE法纯化舟山眼镜蛇(Najanajaatra Cantor)毒神经生长因子(NGF),免疫家兔获得抗血清。用辛酸-硫酸铵沉淀法初步纯化IgG,蛋白A-Sepharose亲和层析进一步纯化IgG,并与CNBr活化的Sepharose4B偶联,采用亲和层析法对舟山眼镜蛇毒神经生长因子进行分离纯化。产物经过SDS-PAGE检测呈一条带,并显示了良好的生物学活性。纯化NGF最大比活性为5.0×104U/mg蛋白,亲和常数为4.35×108L/mol,亲和层析分离NGF得率比传统分离方法得率提高35.2%,该方法为NGF的大量提取提供了技术支持。