光裸方格星虫纤溶酶对急性血瘀模型大鼠血液流变性异常及血管内皮损伤的改善作用研究

目的:研究光裸方格星虫纤溶酶(SNFE)对急性血瘀模型大鼠血液流变性异常及血管内皮损伤的改善作用。方法:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、阿司匹林组(100 mg/kg)和SNFE低、高剂量组(2 500、5 000 U/kg),每组10只,每天灌胃1次,连续给药7 d,第6天给药后1 h,除对照组外,其余各组大鼠均皮下注射盐酸肾上腺素0.8 mg/kg,再以冰水浴复制急性血瘀模型。次日给药后2 h腹主动脉采血,使用全自动血流变仪测定全血黏度(高、中、低切变率)、血浆黏度、红细胞比容、红细胞聚集指数、红细胞变形指数等血液流变学指标,酶联免疫吸附法测定血浆中一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)含量及其比值,苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉血管内皮的损伤程度。结果:与对照组比较,模型组大鼠的高、中、低切变率的全血黏度以及血浆黏度、红细胞聚集指数、ET-1含量均显著升高,红细胞变形指数、NO含量和NO/ET-1比值均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,SNFE高剂量组大鼠的高、中、低切变率的全血黏度以及血浆黏度、红细胞比容、红细胞聚集指数、ET-1含量均显著降低,红细胞变形指数、NO含量和NO/ET-1比值均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);SNFE低剂量组大鼠仅红细胞变形指数和NO/ET-1比值均显著增加,ET-1含量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。血管内皮染色图显示,与对照组比较,模型组大鼠主动脉各层结构松散无序,内膜缺损不完整,空泡增加,内皮损伤明显;各给药组大鼠内皮也均有不同程度损伤,但损伤程度均较模型组轻。结论:SNFE对急性血瘀模型大鼠的血液流变性异常和血管内皮损伤均有改善作用。

光裸方格星虫纤溶活性蛋白的提取及抗氧化活性研究

目的:从光裸方格星虫提取纤溶活性蛋白并研究其抗氧化能力。方法:光裸方格星虫全虫匀浆后,用3倍体积PBS缓冲液(0.02 mol/L,p H7.5)在4℃条件下抽提6 h,上清液用硫酸铵盐析法粗提纯纤溶活性蛋白;采用普鲁士蓝法测定该蛋白组分的还原能力,在DPPH体系,Fenton体系和邻苯三酚自氧化体系中分别测定对DPPH自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O_2^-·)的清除能力。结果:用30%饱和度硫酸铵沉淀杂质,再用50%饱和度硫酸铵沉淀上清液的纤溶活性蛋白可取得较好的纯化效果,该蛋白组分具有一定还原能力,具有显著的清除DPPH·和·OH作用,且与剂量呈正相关,EC_(50)分别为1.23、6.07 mg/m L,对O_2^-·则有负清除作用。结论:采用两级硫酸铵盐析纯化的光裸方格星虫纤溶活性蛋白具有一定体外抗氧化活性。

来自光裸方格星虫产纤溶酶蜡状芽孢杆菌的鉴定

对广西北部湾光裸方格星虫中产纤溶酶菌株进行筛选和鉴定,结合脱脂乳平板与纤维蛋白板筛选出产纤溶酶菌株,并对其粗酶液的血栓溶解机制进行了体外初步研究。结果显示,从光裸方格星虫获得5株产纤溶酶菌株,其中GXUSP-1菌株纤溶酶粗酶活力(相当尿激酶酶活力单位)为303.2 U/mL,经初步鉴定该菌为蜡状芽孢杆菌属,属于海洋共生菌,该菌株粗酶液能通过直接和间接两种方式溶解血栓,且体外溶解血栓作用显著。GXUSP-1具有良好的潜在工业应用价值。