纳米雄黄诱导B细胞非霍奇金淋巴瘤Raji细胞凋亡和自噬的研究

目的探究纳米雄黄引起B细胞非霍奇金淋巴瘤Raji细胞凋亡和自噬的作用机制。方法将细胞设为对照组和给药组(给药组分为水飞雄黄组和纳米雄黄组),进行CCK-8细胞活力检测、荧光显微镜观察、流式细胞术检测以及Western blot实验。结果与对照组相比,水飞雄黄组和纳米雄黄组均会抑制Raji细胞的增殖,且呈浓度依赖性,其中,纳米雄黄组的抑制作用更为显著。Western blot结果表明,纳米雄黄药物处理Raji细胞24 h后,凋亡相关蛋白Bax表达升高,Bcl-2蛋白表达下降;自噬相关蛋白Beclin-1表达升高,p62蛋白表达下降。结论纳米雄黄可以通过线粒体途径诱导Raji细胞发生凋亡,且能够诱导Raji细胞发生自噬,有效抑制细胞增殖从而发挥抗肿瘤作用。

纳米雄黄对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨纳米雄黄对不同宫颈癌细胞株Hela(HPV18阳性,腺癌),Caski(HPV16阳性,鳞癌),C33A(HP V阴性,腺癌)增殖、凋亡的影响。方法:体外培养3种不同宫颈癌细胞,采用不同质量浓度(5,10,2 0,4 0 mg/L)纳米雄黄作用于不同宫颈癌细胞2 4,4 8,7 2,9 6 h,相差显微镜下观察不同质量浓度组与对照组细胞形态学变化;MTT法测定药物对细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果:纳米雄黄混悬液(5,10,20,40 mg/L)作用于Caski,Hela,C33A细胞24,48,72,96 h,均可抑制细胞增殖,且呈时间剂量依赖性,抑制率波动于9.02%~49.06%,以20 mg/L质量浓度组为例,抑制率Caski(39.15%)>Hela(36.17%)>C33A(30.56%)。随着质量浓度的增加,早期凋亡、中晚期凋亡细胞均增加,凋亡率(早期+中晚期凋亡率)波动于19.29%~99.54%,以20 mg/L质量浓度组为例,凋亡率Caski(60.43±2.88)%>Hela(41.95±3.01)%>C33A(43.49±2.19)%。细胞周期结果显示高质量浓度组(20,40 mg/L)对Hela,Caski细胞有G2/M期阻滞。结论:纳米雄黄混悬液可抑制不同宫颈癌细胞株的增殖,促进细胞凋亡,其对Caski细胞的作用最强,对Hela细胞次之,对C33A细胞相对最弱。对HPV阳性的细胞可产生G2/M期阻滞。

雄黄抗肿瘤作用的研究进展

目的综述了近年来雄黄(As_4S_4)在体内和体外治疗各种肿瘤的应用近况及其药理作用。方法查阅相关文献43篇,对雄黄(As_4S_4)在临床上的应用以及其在体内和体外治疗各种肿瘤的应用现状和药理作用进行了归纳总结。结果雄黄(As_4S_4)在临床能够用于治疗血液疾病、关节疾病及皮肤病(外用),能够通过多种途径抑制多种肿瘤细胞的增殖和诱导凋亡。结论雄黄(As_4S_4)在多种肿瘤相关疾病的治疗方面具有广阔的应用前景。

复方纳米雄黄中砷在大鼠体内的药动学

目的:研究复方纳米雄黄中砷在大鼠体内的药动学行为。方法:用氢化物发生-双道原子荧光光谱法测定血清中砷元素的浓度,并计算药动学参数。结果:低、中、高(35,70,140 mg·kg^(-1))三剂量组主要药动学参数分别为t_(1/2)Ka:0.34,0.30,0.29 h;t_(1/2)Ke:19.0,21.6,22.1 h;CL/F:7.1,6.5,6.0 mL·kg^(-1)·h^(-1);V_d/F:188.6,200.1,191.0 mL·kg^(-1);C_(max):180.9,334.4,693.1 ng·mL^(-1);AUC:5069,10650,23393 ng·mL^(-1)·h。除C_(max)和AUC外,其他药动学参数在3种剂量组间比较和雌雄性别之间比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而C_(max)和AUC则与剂量呈正比。结论:复方纳米雄黄中砷在大鼠体内的药动学行为符合开放性血管外给药一室模型一级速率过程。

雄黄抗癌作用的研究进展

中药雄黄在我国传统医学中应用历史悠久,近年来在肿瘤的治疗中发挥着越来越大的作用,本文介绍雄黄抗癌作用的研究与进展,包括治疗研究、作用机理、不良反应及其新剂型—纳米雄黄的研发等,并对雄黄抗癌作用的未来进行展望。

纳米雄黄脂质体的制备、特性检测和体外抗肿瘤细胞作用的研究

目的:研究纳米雄黄脂质体的制备方法并对其特性进行检测。方法:采用化学沉淀法先制备纳米级雄黄,薄膜分散-高压均质法制备纳米雄黄脂质体。用电子显微镜、能谱仪、原子荧光光谱仪、激光粒度分析仪对其进行特性研究,并研究其体外抗肿瘤细胞的能力。结果:薄膜分散-高压均质法制备的雄黄纳米脂质体平均粒径为102.3 nm,分散性良好,球形或卵球形。能谱仪证实其中含有砷和硫的成分,脂质体的药物包封率为82.78%。体外作用于HepG2肝癌细胞显示其有良好的抑制生长作用。结论:采用上述方法可以成功制备纳米级别的雄黄脂质体,粒径较小,符合纳米制剂的要求,稳定性良好,药物包封率高,并且具备良好的抗肿瘤细胞的作用。纳米雄黄脂质体是一种新型纳米级剂型,为传统中药在抗肿瘤方面的应用提供了新的思路。

纳米级雄黄制备工艺的优化研究

目的对纳米级雄黄制备工艺进行优化研究。方法利用温度可控惰性气氛高能球磨机来制备纳米级雄黄粉体;采用正交设计实验方法,对球料比、球磨转速、球磨时间、球磨介质去离子水量、球磨温度等球磨参数进行五因素四水平的实验安排;利用激光光散射法和原子力显微镜对纳米级雄黄颗粒的粒度分布和表观形貌进行观察分析测定。结果制备纳米级雄黄的最佳工艺参数为球料比16∶1、球磨转速38Hz、球磨温度-20℃、球磨时间12h、去离子水量取50ml。结论在纳米级雄黄的最佳制备工艺条件下,可以得到粒径小于100纳米的雄黄颗粒达90%。

纳米雄黄的急性毒性实验

目的探索纳米雄黄对小鼠的急性毒性作用,为其临床应用提供依据。方法将60只小鼠随机分6组,每组10只。均采用灌胃给药：对照组给予0.5%羧甲基纤维素钠,其他组分别给予1031、515.5、257.8、128.8、64 mg·kg^-1的纳米雄黄混悬液;灌胃容积为25 ml·kg^-1。观察小鼠灌胃后毒性反应及死亡情况,Bliss法计算半数致死量（LD50）。对各组死亡小鼠及时解剖,取心、肝、脾、肺、肾进行病理检查。结果给药后,各组小鼠活动减少,不进食水,耳缘颜色变暗,呼吸急促,精神萎靡,眼球分泌物增加,粪便呈灰黑色。1031 mg·kg^-1组全部死亡,515.5 mg·kg^-1组死亡9只,257.8 mg·kg^-1组死亡2只,128.8 mg·kg^-1组死亡1只,64 mg·kg^-1组无死亡。用Bliss法计算LD50为309.72 mg·kg^-1,LD50（Feiller校正）的95%可信限为226.97~422.93 mg·kg^-1,LD5=137.36 mg·kg^-1,LD95=698.35 mg·kg^-1。死亡小鼠尸检观察,双肺、肝脏弥漫性充血,脾脏肿大发黑,小肠壁弥漫性充血,小肠胀气,部分肠道肿胀,发黑坏死。未死亡小鼠未见异常。结论小鼠灌胃给予纳米雄黄在64.4 mg·kg^-1时未见明显急性毒性反应;当剂量大于64.4 mg·kg^-1时,小鼠中毒现象会随着剂量的增大而增强。

纳米雄黄对单纯疱疹病毒Ⅱ型的体外抗病毒活性

目的:探讨纳米雄黄对单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus Type Ⅱ,HSV-2)的体外抗病毒活性。方法:以阿昔洛韦作为阳性对照,采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法观察不同浓度(200.00,150.00,100.00,50.00,25.00,12.50,6.25,3.13,1.54,0.78,0.39和0 mg/L)纳米雄黄对正常非洲绿源猴肾细胞(Vero细胞)作用48 h的细胞毒性;空斑法测定病毒滴度,建立病毒感染细胞模型,并采用细胞病变观察和MTT结合的方法对不同浓度(20.00,10.00,5.00,2.50,1.25,0.63,0.31,0.15,0.08,0.04和0 mg/L)纳米雄黄在预防、治疗及直接灭活病毒3种给药方式下的抗HSV-2活性进行评价。结果:纳米雄黄对正常Vero细胞的半数细胞毒性浓度为37.15 mg/L,HSV-2病毒滴度为7.30 log PFUs/mL,纳米雄黄在预防、治疗和直接灭活病毒3种给药方式下对HSV-2感染细胞的半数有效浓度分别为0.13,1.80和0.52 mg/L,对应的治疗指数分别为285.77,20.64和71.44,纳米雄黄在预防给药下的治疗指数高于其治疗和直接灭活给药。结论:纳米雄黄在3种给药方式下均具有良好的抗HSV-2活性,且预防给药的疗效较好。

纳米雄黄外用治疗乳腺癌破溃创面的临床观察

目的观察纳米雄黄外用治疗乳腺癌胸部破溃创面的效果并探讨其机制,证实纳米雄黄外用的安全性和有效性。方法将乳腺癌胸部破溃创面患者60例,按随机数字表法分为对照组及观察组,两组均行保乳术治疗,术后给予化疗及中药支持治疗,对照组30例常规清洁护理,以5%的环磷酰胺溶液清创后湿敷,隔日换药1次;观察组30例常规清洁换药后外敷纳米雄黄,隔日1次。比较两组近远期临床疗效,治疗期间的不良反应及治疗前后生存质量及血清肿瘤标志物水平。结果观察组总有效率为76.67%,显著高于对照组的53.33%(P<0.05),观察组治疗后1年、2年生存率显著高于对照组(P<0.01)。治疗后两组血清血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原153(CA153)、恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)水平均明显降低(P<0.01),组间差异无统计学意义(P>0.05);观察组乳腺癌生存质量测评量表(FACT-B)评分明显高于治疗前及对照组(P<0.01)。结论纳米雄黄外用可提高对乳腺癌破溃创面的治疗效果。

纳米雄黄外用治疗肠癌溃破创面的临床观察

目的:探讨纳米雄黄外用治疗肠癌溃破创面的临床疗效。方法:将52例肠癌溃破创面患者随机分为两组,对照组26例口服康复新液,同时清洁换药后湿敷浓度为3%的平阳霉素溶液;治疗组26例在口服康复新液的基础上加用纳米雄黄外涂。观察治疗后两组有效率、相关肿瘤标志物水平以及不良并发症的情况。结果:治疗组总有效率为46.15%(12/26),显著高于对照组的26.92%(7/26)(P<0.05);两组血清CEA、CA199及CA724水平均明显降低(P<0.01),但组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗组并发症发生率为23.08%(6/26),明显低于对照组的46.15%(12/26)(P<0.01)。结论:纳米雄黄外敷对肠癌溃破创面有较好的治疗效果,能减轻患者痛苦,促进肿瘤溃破创面愈合。

纳米雄黄靶向PD-1/PD-L1通路调节MRL/lpr小鼠脾细胞增殖研究

目的:研究纳米雄黄对MRL/lpr鼠脾细胞的影响及是否是通过程序性死亡蛋白1(PD-1)/程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)作用于狼疮鼠。方法:将6只BABL/C小鼠用作正常组,将24只MRL/lpr狼疮鼠随机分为模型组,高、中、低剂量治疗组,每组6只。通过管饲法连续给药8周,脱颈法杀死所有小鼠。采用组织病理学切片观察脾脏损伤,Western Blot法检测PD-L1、PD-1蛋白表达,ELISA法检测血清IL-10水平。结果:正常组脾脏组织形态正常,血清IL-10水平正常。纳米雄黄各剂量治疗组PD-L1、PD-1蛋白表达均显著高于正常组及模型组(P<0.01,P<0.05),其脾脏组织形态较模型组明显改善,IL-10水平也显著降低(P<0.05)。结论:纳米雄黄通过PD-1/PD-L1信号通路抑制脾细胞活化,有益于狼疮鼠病情改善。

纳米雄黄抗肿瘤的药理毒理研究及临床应用

雄黄,辛温,有毒,归肝、大肠经,属于以毒攻毒的药物,具有解疟抗癌、解毒杀虫、燥湿祛痰的作用。古代医家常应用雄黄治疗痈肿疔疮,聚积腹痛等,近现代医家用以治疗恶性肿瘤及血液病,由古到今为临床所用。雄黄的毒性导致其用药安全范围小,现代学者将传统中药与纳米科技手段相结合,将雄黄研磨成为纳米雄黄,相比较雄黄可言,提高了生物利用度,降低了雄黄的体内毒性,将雄黄的临床应用推动到了新的高度。现代药理研究通过运用纳米雄黄干预肺癌细胞、卵巢癌细胞、皮肤癌细胞、宫颈癌细胞和白血病细胞等实验,证实纳米雄黄具有抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡、诱导细胞分化、抑制核酸合成、抑制新生血管生成等功能,还具有抗病毒、杀菌镇痛的功效。现代毒理研究通过应用不同浓度的纳米雄黄制剂给予小鼠灌胃治疗,记录各时间段小鼠的症状体征及各项辅助检查指标,得出安全剂量下纳米雄黄对血液生化指标等影响均处于正常范围内。临床试验应用纳米雄黄外敷治疗恶性肿瘤破溃创面,发现纳米雄黄有促进患者肿瘤破溃创面愈合,减轻疼痛,缓解渗血、流脓、散发恶臭味等临床症状,提高患者生活质量的作用。并且用药简易,患者依从性好,无需住院治疗,节约医疗资源,值得临床推广应用。

小鼠经口给予纳米雄黄后砷的药动学特点

目的:研究纳米雄黄与传统水飞雄黄中砷在小鼠体内的药动学行为差异,为新药的研发及临床用药提供一定的实验基础。方法:以140只小鼠为研究对象,随机分为两组,每组70只,分别单次灌胃2.062mg·mL-1的纳米雄黄和水飞雄黄混悬液0.5mL,于服药后不同时间点摘眼球采血,用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)测得血中砷元素浓度,计算主要药动学参数。结果:纳米雄黄组与传统水飞雄黄组中砷的药代动力学参数经统计学分析均有显著差异(P<0.05)。纳米雄黄中砷达峰时间早、峰浓度高、药时曲线下面积(AUC)大,前者砷的消除半衰期较长,吸收速率常数较大。结论:纳米雄黄组在达峰时间、峰浓度、AUC等方面优于传统雄黄组。纳米雄黄组与传统水飞雄黄组相比,砷吸收快,消除慢,药物在体内维持时间长,说明雄黄经过纳米化后,其药动学特性发生明显变化,吸收速率增大而消除速率减小。

纳米雄黄炮制方法的探讨

目的:以炮制品得率及残渣质量,粒径分布,As2S2和As2O3的含量为指标,考察不同炮制方法对纳米雄黄的影响,筛选其最佳炮制方法。方法:采用高能球磨法制备纳米雄黄生品,利用水飞法、酸水飞法和碱水飞法对其进行炮制,计算各炮制品得率及残渣质量;利用激光散射法测定粉体粒径,电镜扫描法观察粉体的表观形貌;直接碘量法和二乙基二硫代氨基甲酸银法(Ag-DDC法)分别测定各样品中As2S2与As2O3的含量。结果:水飞品、酸水飞品和碱水飞品的得率分别为96.71%,95.86%,79.08%,残渣质量分别为0.328,0.891,2.208 g;生品及各炮制品的平均粒径分别为(157.3±4.8),(143.9±6.2),(137.7±4.5),(139.8±5.3)nm;As2S2质量分数分别为(94.26±1.33)%,(98.97±0.98)%,(99.58±1.45)%,(99.37±2.60)%,As2O3质量分数分别为(9.64±0.68),(3.44±0.29),(2.83±0.27),(18.17±1.70)mg·g-1。结论:3种炮制方法均能减小纳米雄黄生品的粉体粒径,提高其As2S2的含量,且水飞法和酸水飞法均可降低其As2O3的含量。确定最佳炮制方法为酸水飞法。

纳米雄黄对药物敏感性白血病细胞的凋亡诱导作用

目的:研究纳米雄黄对药物敏感性白血病细胞的凋亡诱导作用。方法:采用机械研磨法制备纳米雄黄。以白血病药物敏感K562细胞为靶细胞,采用MTT法检测纳米雄黄对K562细胞的增殖抑制作用,AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡,细胞流式细胞术检测Bax,Bcl-2,P-gp,BCRP,P-53蛋白的表达水平,Caspase-3活性。结果:雄黄经高能球磨机球磨10～50h,扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察,电镜测量纳米雄黄的平均粒径为(72.72±22.18)nm,符合纳米颗粒的形貌特征。纳米雄黄对K562细胞有明显的增殖抑制作用。24,48,72 h的IC50分别为43.48,20.52,16.07 mg.L-1。20,50 mg.L-1纳米雄黄作用48 h后Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增高,凋亡率分别为10.52%,73.25%。纳米雄黄作用48 h后Bax蛋白表达由对照的(75.80±2.40)%升高到(87.50±1.20)%和(99.60±0.10)%;Bcl-2蛋白表达由对照的(73.85±0.15)%升高到(94.80±2.00)%和(97.75±0.55)%。20,50 mg.L-1纳米雄黄处理K562细胞24 h后,K562细胞Caspase-3蛋白表达水平由对照的(3.14±0.24)%升高到(8.87±2.74)%和(72.55±1.45)%;细胞的BCRP,P-gp蛋白,P53蛋白表达总体呈上升趋势,共表达也呈上升趋势。结论:纳米雄黄可以显著诱导白血病药物敏感K562细胞发生凋亡。

纳米雄黄对白血病K562细胞及其干细胞的凋亡诱导作用

目的:研究纳米雄黄对白血病K562细胞及其白血病干细胞的凋亡诱导作用。方法:采用机械研磨法制备纳米雄黄。以白血病K562细胞为靶细胞,MTT法检测K562细胞增殖活性,采用流式细胞术检测K562细胞凋亡率、P-gp和BCRP蛋白的表达水平,以及白血病干细胞含量变化及其凋亡。结果:雄黄经高能球磨机球磨10～50h,扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察,电镜测量纳米雄黄的平均粒径为72.72±22.18 nm。20μg/ml和50μg/ml纳米雄黄及雄黄原药处理K562细胞后,纳米雄黄对K562细胞有明显的增殖抑制作用,24h、48h、72h的IC50值分别为43.48μg/ml、20.52μg/ml、16.07μg/ml。细胞的凋亡率明显升高。雄黄原药对K562细胞也有增殖抑制及凋亡诱导作用,但效果要差于纳米雄黄。BCRP、P-gp蛋白表达以及二者共表达率随着时间的延长和浓度的增高呈上升趋势,尤以高浓度时明显。20μg/ml和50μg/ml纳米雄黄处理K562细胞24h,LSC含量随浓度升高而升高,K562细胞群中LSC的凋亡率升高。结论:纳米雄黄可诱导药物敏感性白血病细胞及其白血病干细胞发生凋亡。

固体分散体技术对纳米雄黄稳定性及体外溶出的影响研究

目的:制备纳米雄黄固体分散体以提高纳米雄黄的稳定性及体外溶出度。方法:分别以聚乙二醇6000(PEG6000)、泊洛沙姆188(F68)为载体,采用熔融法制备纳米雄黄固体分散体并用X-射线衍射法、显微观察鉴别药物在载体中的存在状态。采用二乙基二硫代氨基甲酸银分光光度法对As203进行含量测定并进行稳定性考察试验,采用氢化物原子吸收分光光度法进行含量测定,对固体分散体中砷的体外溶出进行考察。结果:X-射线衍射和显微观察结果显示,纳米雄黄以无定型状态存在于固体分散体中,2种载体的固体分散体均能增加纳米雄黄中砷的溶出量和溶出速度并减少纳米雄黄的团聚和As203的含量。结论:以F68为载体制备的固体分散体能显著提高纳米雄黄的稳定性和体外溶出度。

雄黄纳米微粒在细胞水平上抑制腺病毒复制的初步研究

目的 建立腺病毒3型（ HAdV-3）感染Hep-2细胞模型,观察中药雄黄对腺病毒3型（ HAdV-3）感染Hep-2细胞病变的抑制作用.方法 用高能球磨机研磨双蒸水水飞处理制备雄黄纳米微粒,应用砷钼蓝染色法测定雄黄纳米微粒浓度并在Nano Series粒度测定仪上测定其粒度.以MTT法计算药物的半数中毒剂量（TC50）.通过三种不同给药方式即预防给药、治疗给药及直接灭活给药方式进行体外实验,以利巴韦林为阳性对照药,观察雄黄纳米微粒对HAdV-3感染Hep-2细胞病变所起的作用,并对药物的量效关系进行分析.结果 雄黄纳米微粒TC50值为0.649 μg/ml.预防、治疗及直接灭活给药方式均可减轻HAdV-3感染Hep-2细胞的CPE程度,其抗HAdV-3的半数有效浓度（ IC50）分别为0.255 μg/ml、0.142 μg/ml、0.117 μg/ml,治疗指数（TI）分别为2.55、4.57和5.55,雄黄纳米微粒对HAdV-3感染Hep-2细胞CPE的抑制作用存在着明显的量效关系.结论 雄黄纳米微粒在体外有抑制HAdV-3病毒复制和直接灭活病毒的作用,并有一定保护Hep-2细胞预防HAdV-3病毒感染的作用.

中西医结合治疗恶性肿瘤体表破溃创面进展

恶性肿瘤体表破溃创面大大降低了患者生活质量,目前西医治疗手段适应症局限,不良反应明显,临床有效率并不高,肿瘤破溃创面的治疗仍是一个亟待解决的医学难题。文章主要介绍了现代医学对恶性肿瘤体表破溃创面的治疗手段和中药纳米雄黄的现代药理作用,以期中西医结合尽早攻克这一世界难题。