富血小板纤维蛋白渗出液对脂肪干细胞成骨分化及纳米羟基磷灰石支架生物相容性的影响

目的:观察Beagle犬脂肪干细胞在向成骨细胞分化过程中富血小板纤维蛋白(Platelet-richfibrin,PRF)渗出液的作用,及其与支架材料纳米羟基磷灰石支架生物相容性的实验研究。方法:酶消化法获得Beagle犬脂肪干细胞,将收集的富血小板纤维蛋白渗出液分为成骨诱导矿化液组(含成骨矿化液+5%PRF渗出液)、B组对照组(含成骨矿化液的10%FBS的DMEM)和C组空白组(普通10%FBS的DMEM培养液),观察PRF渗出液对成骨的影响,并用环境扫描电镜观察Beagle犬脂肪干细胞与经PRF渗出液孵育的纳米羟基磷灰石支架复合培养后的附着增殖情况。结果:在PRF渗出液的作用下,脂肪干细胞能够更加有效地向成骨细胞分化,形成更多的钙化结节,结节细小致密。环境扫描电镜观察,脂肪干细胞能在支架上充分地附着伸展。结论:PRF渗出液能够有效促进脂肪干细胞向成骨细胞分化,纳米羟基磷灰石三维支架材料具有很好的生物相容性。

应用细胞-支架构建方式的组织工程方法促进牙周组织再生的实验研究

目的:观察评价细胞 -支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义,探讨自体牙周膜细胞(PDLCs)和纳米羟基磷灰石材料 -纳米羟晶 -胶原仿生骨材料 (nHAC)分别用作牙周组织工程种子细胞和支架材料的可行性。方法:改良组织块法体外培养动物自体PDLCs,传代扩增后接种到nHAC三维支架上,再植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯 (e-PTFE)膜,以单纯翻瓣组和单纯GTR组作为对照。术后 8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:自体PDLCs-nHAC-膜复合植入组较单纯翻瓣组和单纯GTR组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入。结论:应用细胞-支架构建方式的牙周组织工程方法能更有效地促进牙周组织再生和重建,而自体PDLCs可作为牙周组织工程的种子细胞,nHAC可作为牙周组织工程的支架材料。

一种新型纳米羟基磷灰石材料应用于牙周组织工程的可行性研究

目的:对一种新型纳米羟基磷灰石材料 -纳米羟晶 -胶原仿生骨材料 (nHAC)进行细胞相容性和细胞毒性的研究,以初步探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法:将体外培养的人牙周膜细胞(PDLCs)接种于nHAC三维支架上复合培养,采用细胞计数和扫描电镜观察PDLCs在nHAC支架上的附着、生长情况,并通过MTT测试法和碱性磷酸酶(ALP)活性检测法研究nHAC浸提液对PDLCs增殖和功能表达的影响。结果:人PDLCs在nHAC支架上形成良好贴附并增殖,扫描电镜可见nHAC具有良好的多孔网状结构,细胞在nHAC上生长旺盛,伸展充分,而PDLCs在不同浓度的材料浸提液中的生长、增殖及ALP活性与空白对照组相比无显著性差异。结论:nHAC具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望成为牙周组织工程的支架材料。

富血小板血浆和纳米羟基磷灰石胶原支架对人脂肪干细胞成骨分化的影响

目的:观察人脂肪干细胞在向成骨细胞分化过程中富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)的作用,及其与支架材料纳米羟基磷灰石/胶原生物相容性的实验研究。方法:酶消化法获得脂肪干细胞,分别培养在含100ml/L FBS的DMEM培养液、成骨细胞诱导液和添加PRP的成骨细胞诱导液中,观察PRP对人脂肪干细胞向成骨细胞分化的影响。并将人脂肪干细胞与经PRP孵育的纳米羟基磷灰石/胶原复合培养7 d后,环境扫描电镜观察细胞在支架材料上附着增殖情况。结果:酶消化法能成功获得人脂肪干细胞,在PRP的作用下,脂肪干细胞能够更加有效的向成骨细胞分化,形成更多的钙化结节,结节细小致密。环境扫描电镜观察,脂肪干细胞能在支架上充分的附着伸展。结论:人脂肪干细胞的成功分离诱导分化,为牙周组织工程提供了新的种子细胞来源,PRP是促进该细胞成骨细胞分化的有效的细胞因子组合,纳米羟基磷灰石/胶原可以作为牙周组织工程的支架材料。

应用生长因子-支架构建方式的组织工程方法再生牙周组织的实验研究

目的:观察评价生长因子-支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义,探讨纳米羟基磷灰石材料(nHAC)和重组人骨形成蛋白 -2 (rhBMP-2 )用于牙周组织工程的可行性。方法:将rhBMP-2与nHAC复合植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯(e-PTFE)膜,以空白对照组和单纯GTR组作为对照。术后 8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:rhBMP-2-nHAC-膜复合植入组较空白对照组和单纯GTR组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入。结论:应用生长因子-支架构建方式的牙周组织工程方法能更有效地促进牙周组织再生和重建,而rhBMP-2和nHAC有望用作牙周组织工程的生长因子和支架材料。

人参皂苷Rg1促进人牙周膜干细胞增殖及骨向分化

人参皂苷Rg1(GS Rg1)是人参的主要药理活性成分.GS Rg1有刺激造血干细胞的形成和促进骨髓间充质干细胞增殖和分化的作用.而人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs)具有自我更新和多向分化的干细胞特性.但目前关于GS Rg1能否促进牙周膜干细胞增殖和分化的研究尚不多见.本研究证明,1×10-5mol/L GS Rg1作用于h PDLSCs后,能明显促进牙周膜干细胞的增殖与分化.MTT检测细胞增殖显示,培养液中加入了GS Rg1实验组在第2,3,4,5 d增殖情况明显高于对照组,提示GS Rg1成分促进了牙周膜干细胞的增殖.检测ALP表达量,RUNX2,Collagen I,OPN,OCN表达水平,加药实验组表达水平均高于未加药对照组,它们的表达量的增高提示成骨分化的增强.牙周膜干细胞与纳米羟基磷灰石支架结合的电镜图片及其支架植入小鼠体内后的免疫组化检测显示,含有GS Rg1成分的细胞支架能促进形成更多的骨样组织.因此,GS Rg1能促进h PDLSCs体内体外的增殖及骨向分化,并在替代传统生长因子应用于牙周组织工程方面有较好前景.

纳米羟基磷灰石材料复合碱性成纤维细胞因子促进牙周组织再生的实验研究

目的:探讨新型纳米羟基磷灰石材料—纳米羟晶/胶原仿生骨材料(nHAC)作为生长因子载体和牙周组织工程支架材料应用的可行性,观察评价其对牙周组织再生修复的影响和意义。方法:将人牙周膜细胞(HPDLCs)接种于nHAC三维支架上复合培养,体外扫描电镜观察HPDLCs在nHAC支架上的附着、生长情况,并将碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与nHAC复合植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯(e-PTFE)膜,以空白对照组和单纯置膜组作为对照。术后8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:扫描电镜可见nHAC具有良好的多孔网状结构,PDLCs在nHAC支架上贴附紧密,生长旺盛,伸展充分,动物实验结果显示nHAC/bFGF/膜复合植入组较空白对照组和单纯置膜组有更多新生的牙槽骨、牙周膜和牙骨质生成,结果具有显著性差异。结论:nHAC具有良好的三维空间结构和细胞相容性,与bFGF复合植入牙周缺损后可显著促进牙周组织再生,提示nHAC有望成为理想的生长因子载体和牙周组织工程支架材料。

脂肪干细胞矿化中富血小板血浆的诱导作用及其在支架上附着增殖的研究

目的:观察Beagle犬脂肪干细胞在向成骨细胞分化的过程中富血小板血浆(platelet-richplasma,PRP)的诱导作用及其在纳米羟基磷灰石-胶原支架上的附着增殖情况。方法:酶消化法获得脂肪干细胞,分别采用含100mL/L FBS的DMEM培养液、常规成骨细胞诱导液和添加PRP的成骨细胞诱导液培养脂肪干细胞,21 d后经Von Kossa染色,观察PRP对脂肪干细胞向成骨细胞分化的诱导作用;并将脂肪干细胞与纳米羟基磷灰石-胶原共培养7d,环境扫描电镜观察细胞在支架材料上的附着情况。结果:与其他两组相比,脂肪干细胞在PRP的作用下,能生成更多的钙化结节,钙化结节细小致密,复层生长更加明显,而且脂肪干细胞能在支架材料上充分的附着伸展。结论:脂肪干细胞是良好的牙周组织工程种子细胞,PRP具有细胞因子诱导脂肪干细胞向成骨细胞的分化和增殖,纳米羟基磷灰石-胶原可以做为牙周组织工程良好的支架材料。

纳米胶原基骨在根尖周病骨缺损修复中的应用观察

【目的】研究纳米胶原基骨(nHAC)修复根尖周病骨缺损的治疗效果。【方法】选择慢性根尖周病变非手术治疗失败根尖囊肿,根周骨破坏超过1 cm×1 cm的70例患者随机分为2组,nHAC组35例,根尖搔刮术后骨腔中植入nHAC。对照组35例,术后骨腔中不置入材料。【结果】术后3个月时,X线片显示nHAC组骨密度明显增高,与对照组比较疗效差异有显著(P<0.01)。6个月时骨性愈合高于对照组,差异有显著性(P<0.01)。12个月时骨性愈合优于对照组(P<0.05)。【结论】nHAC生物相容性好,可促进早期骨缺损的修复,是一种较为理想的骨替代材料。

骨形成蛋白与胶原基纳米骨修复牙周骨缺损的实验研究

目的探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)和胶原基纳米骨复合材料(nHAC)修复牙周骨缺损的效果。方法制备小型猪牙周骨缺损模型,设立rhBMP-2-nHAC复合材料植入组、空白对照组和单纯植入胶原基纳米骨组,术后8周观察各组间修复效果及组织病理学变化,通过骨组织形态计量学测定分析评价牙周骨组织的再生情况。结果术后8周可见复合材料植入组大量新生牙周组织生长,四环素单标记表面、四环素双标记表面、骨矿化沉积率、骨体积、类骨质表面、成骨细胞表面等骨组织形态计量学结果与空白对照组和单纯胶原基纳米骨组比较,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论rhBMP-2和nHAC可明显促进牙周骨缺损修复。