抗人肝癌免疫毫微粒的制备及体外免疫学性质的鉴定

构建人肝癌特异的免疫毫微粒 ,探讨免疫毫微粒体外对靶细胞的特异性结合特性及杀伤活性。方法 :采用异型双功能交联剂SPDP将人肝癌单抗HAb18与载米托蒽醌的白蛋白毫微粒化学偶联 ,构建人肝癌特异的免疫毫微粒 ;采用玻片凝集试验 ,免疫荧光法及荧光染色阻断法 ,花环形成实验及花环形成阻断实验 ,扫描电镜 ,3H TdR掺入试验证明抗体与载药毫微粒偶联及免疫毫微粒能特异性结合并杀伤靶细胞SMMC 772 1人肝癌株。结果 :HAb18抗体已偶联到载药毫微粒上 ;免疫毫微粒能良好地与靶细胞特异性结合 ,对靶细胞具有剂量依赖性、选择性杀伤作用。结论 :SPDP偶联方法能用于构建免疫毫微粒 ;人肝癌特异免疫毫微粒体外能特异性结合并杀伤人肝癌细胞株。

单克隆抗体BDI－I导向的阿霉素白蛋白毫微球对人膀胱癌细胞的特异杀伤活性

用化学偶联法将抗人膀胱癌单克隆抗体分子偶联到阿霉素白蛋白毫微球上，构建了一个有靶向杀伤性的免疫毫微球，即：阿霉素白蛋白载单克隆抗体毫微球（ＡＤＲ－ＮＰ－Ａｂ）。改变阿霉素毫微球和单克隆抗体的反应分子比，确定了制备该免疫毫微球的最佳条件。经免疫荧光检测及显微照像分析证明，免疫毫微球可有效地和人膀胱癌细胞结合。体外杀伤试验表明，此免疫毫微球对靶细胞ＥＪ有高度特异杀伤活性，而对无关的人直肠癌Ｌｏｖｏ细胞则无明显作用。

抗体F(ab′)_2片段靶向的载多柔比星免疫毫微粒的构建及其抗肝癌作用

目的 构建抗体F(ab′) 2 片段靶向的载药免疫毫微粒 ;评价F(ab′) 2 片段免疫毫微粒对肿瘤的特异结合性及杀伤作用。方法 采用异型双功能交联剂琥珀酰亚胺基 3 (2 吡啶二硫 )丙酸酯 (SPDP)将抗人肝癌单抗HAb18或对照抗体 4E3的F(ab′) 2 片段与多柔比星 (ADR)人血清白蛋白毫微粒 (ADR HAS NP)共价交联构建抗体F (ab′) 2 片段靶向的载药免疫毫微粒 (HAb18F(ab′) 2 ADR HSA NP ,4E3F (ab′) 2 ADR HSA NP) ;采用玻片凝集试验 ,免疫荧光染色实验确定F(ab′) 2 片段是否结合在毫微粒表面 ;采用花环形成实验 ,花环形成阻断实验 ,扫描电镜分别从光镜、电镜水平观察F(ab′) 2 片段免疫毫微粒是否同人肝癌细胞株SMMC 772 1特异性结合 ;采用MTT比色分析法研究F(ab′) 2 片段免疫毫微粒的体外细胞毒作用 ;采用皮下荷人肝癌裸鼠模型 ,经瘤体注射观察免疫毫微粒的抗人肝癌作用。结果 F (ab′) 2 片段免疫毫微粒圆球状 ,粒径1 2 μm左右 ,免疫荧光染色阳性而ADR HSA NP为阴性 ,提示F (ab′) 2 片段已偶联到ADR HSA NP表面 ;HAb18F(ab′) 2 ADR HSA NP能有效结合于人肝癌细胞株SMMC 772 1,该结合能被HAb18抗体的F(ab′) 2片段阻断 ,未见该免疫毫微粒与对照细胞 (SW 1116)有效结合 ,这些结果提示 ,HAb18F(ab′)

^(35)S 标记抗人肝癌单克隆抗体Hepama-1的制备

采用Ｈ２３５ＳＯ４与苯胺合成３５Ｓ－苯胺硫酸盐，经高温转换成３５Ｓ－对氨基苯磺酸，然后再用碳二亚胺交联到抗人肝癌单克隆抗体Ｈｅｐａｍａ－１上。所得３５Ｓ－ＭＡｂＨｅｐａｍａ－１用Ｅｌｉｓａ方法检测仍保持良好的免疫活性。产品最高比活度可达５１．８ＧＢｑ／ｇ，放化纯度＞９５％，放化产率以Ｈ２３５ＳＯ４投料计算最高可达２７％，以３５Ｓ－对氨基苯磺酸投料计算最高可达４５％，适用于做荷瘤裸鼠动物模型放免治疗研究实验。

分泌抗人甲胎蛋白并对肝癌细胞有特异性亲和力的单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和鉴定

采用杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤SP_2/O细胞与用人甲胎蛋白抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合,经多次筛选,获得7株分泌抗人甲胎蛋白并对肝癌细胞有特异性亲和力的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其培养液上清和腹水效价分别为10^(-2)和10^(-6～9-)。杂交瘤腹水经硫酸铵盐析,DEAE纤维素层析,或免疫吸附亲和层析法纯化,每ml腹水单克隆抗体的产量为1～2mg。用ELISA,免疫双扩散、聚丙烯酰胺凝胶电泳、间接免疫荧光法鉴定了单克隆抗体的特异性、亲和力、稳定性及IgG亚类。

人醛缩酶A单克隆抗体的制备及应用

纯化并鉴定了人醛缩酶Ａ、Ｂ、Ｃ（ｈＡＬＤ－Ａ、Ｂ、Ｃ）。用ｈＡＬＤ－Ａ免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，将免疫的脾细胞和Ｐ＿３－Ｘ＿（６３）－Ａｇ８．６５３骨髓瘤细胞用ＰＥＧ进行融合，用ＥＬＩＳＡ法筛选，ｈＡＬＤ－Ｂ、Ｃ作阴性对照，将阳性反应的杂交瘤细胞进行克隆，获得３株杂交瘤细胞株。其ＭｃＡｂ的亚类分别为ＩｇＧ２ｂ，ＩｇＧ１、ＩｇＭ，亲合常数分别为７．５×１０￣（１０）、３．５×１０￣９、２．３×１０￣９。３株细胞株分泌的单抗通过Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ得到证实。用亲合层析法从人肝癌细胞中提纯了ＡＬＤ－Ａ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为单一区带，但其电泳迁移率较ｈＡＬＤ－Ａ滞后。

^(188)Re直接标记抗人肝癌单克隆抗体片段HAb18的研究

本工作采用两步法进行 188Re直接标记抗人肝癌单克隆抗体 HAb18片段的研究。用 Sn Cl2 作为 188Re O4 -的还原剂 ,Na HSO3作为单抗片段双硫键的还原剂 ,观察了 188Re O4 -、抗体中双硫键的还原条件及抗体标记对还原率、标记率的影响。标记率为 85%～ 93% ,还原抗体片段巯基数为 2 .4个 /分子 ,免疫活性分数为 0 .91。实验结果表明 :标记物体外稳定性良好 ;标记物在小白鼠和荷瘤裸鼠体内血液清除快 ,并且主要通过肾脏排泄 。