Nanos3与生殖细胞发育分化

小鼠Nanos3基因是果蝇Nanos的同源基因,是Nanos基因家族的一员.Nanos3是一种RNA结合蛋白,靠近其C端有两个非常保守且连续的Cys-Cys-His-Cys特异锌指结构域.研究显示,Nanos3在小鼠生殖细胞中特异表达,不仅在原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的维持方面发挥重要作用,而且是一种启动雄性生殖细胞分化程序的内源性因子,其在精子发生中的重要作用已引起越来越多的关注.探讨Nanos3的生物学功能,有助于了解生殖细胞发育过程中的部分重要机制.本文就Nanos3维持生殖细胞更新和原始生殖细胞的维持等作用作一综述.

团头鲂nanos3基因的克隆鉴定

为了标记团头鲂(Megalobrama amblycephala)的原始生殖细胞(Primordial Germ Cells, PGCs),首次克隆并鉴定了团头鲂nanos3基因(mananos3)。mananos3全长1027 bp,包括48 bp 5′UTR (5′untranslated Region),490 bp 3′UTR和489 bp开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)。该基因编码162个氨基酸。通过序列比对发现Mananos3蛋白和其他物种Nanos蛋白一样,存在一个保守的RNA结合功能域,该功能域包含一个锌指基序(Motif)。系统发育树结果显示, Mananos3与鲤(Cyprinus carpio)的Nanos3最为相近。半定量和定量PCR结果表明, mananos3具有较高的母源表达,并在胚胎发育早期高量表达,而在1000细胞期之后表达量逐渐降低。在成体组织中, mananos3仅在卵巢中检测到表达。mananos3和斑马鱼(Danio rerio) nanos3 (zfnanos3)的3′UTR均可以介导绿色荧光蛋白特异标记团头鲂和斑马鱼胚胎发育早期的PGCs,但是mananos3的3′UTR能够更特异地标记团头鲂的PGCs。通过比对mananos3和zfnanos3的3′UTR发现, mananos3的3′UTR中有一个非经典的miR430识别位点(GCACTA)。通过对该位点的突变研究证实其有利于nanos3在非PGCs组织中的降解。综上所述,团头鲂mananos3的3′UTR序列中的非经典miR430识别位点(GCACTA)可能与介导报告基因在PGCs中特异表达相关。

黄鳝nanos3基因克隆鉴定及其组织表达分析

【目的】明确nanos3基因在黄鳝卵巢发育和维持过程中的重要作用,为黄鳝PGCs可视化分子标记、生殖细胞移植及性腺发育分化机制研究打下基础。【方法】通过RACE克隆黄鳝nanos3基因cDNA序列,运用ProtParam、SOMPA、SWISS-MODEL、SignalP、TMHMM及NetPhos等在线软件进行Nanos3蛋白生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR检测nanos3基因在黄鳝不同组织中的表达情况,并以冰冻切片荧光原位杂交进行性腺组织定位。【结果】黄鳝nanos3基因cDNA序列全长1289 bp,包括147 bp的5’非编码区(5’-UTR)、531 bp的开放阅读框(ORF)及611 bp的3’非编码区(3’-UTR),共编码176个氨基酸残基。黄鳝Nanos3蛋白分子量为19.61 kD,理论等电点(pI)为9.07,为碱性蛋白;在黄鳝Nanos3氨基酸序列第108~162位处存在2个锌指基序“CCHC”结构域,无信号肽和跨膜结构域;蛋白二级结构以无规则卷曲的占比最高(64.20%),其次是α-螺旋(占24.43%),延伸链、β-转角的占比分别为6.82%和4.55%。黄鳝与大刺鳅、射水鱼、斑马鱼等鱼类的Nanos3氨基酸序列相似性分别为67.5%、57.2%和50.3%,与中国林蛙、粗皮蛙等两栖类动物的相似性分别为39.3%和30.3%,与人类、小鼠等哺乳类动物的相似性分别为33.3%和30.9%。nanos3基因在黄鳝肌肉中不表达,在精巢、肾脏、脾脏、脑、肝脏、肠道、心脏和血液中的相对表达量较低,在卵巢中的相对表达量最高,极显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.01),呈明显的组织特异性表达模式;冰冻切片荧光原位杂交分析结果显示,黄鳝nanos3基因仅在生殖细胞中表达,支持细胞中未见表达。【结论】黄鳝nanos3基因进化相对保守,主要在卵巢的生殖细胞中表达,且以细胞质中的表达为主,与核遗传信息的传递相关,是黄鳝性腺发育及分化相关的功能基因。

黄鳝卵原细胞移植研究

【目的】明确黄鳝卵原细胞是否能迁移、整合到斑马鱼生殖嵴上,为建立黄鳝异体生殖途径打下研究基础。【方法】通过酶消化法制备黄鳝卵原细胞悬液,经PKH26标记卵原细胞后显微注射到受体斑马鱼胚胎中,在荧光显微镜下追踪受体斑马鱼胚胎中供体黄鳝卵原细胞的迁移、整合及增殖情况;采用组织形态学方法检测移植受体斑马鱼胚胎的发育情况,并以半定量PCR和荧光原位杂交检测受体斑马鱼胚胎中供体黄鳝卵原细胞标记基因nanos3的表达情况。【结果】黄鳝卵巢经蛋白酶消化后,分离得到的卵原细胞悬液浓度为2.4×10^(6)个/mL,以PKH26染色后在红色荧光下呈橙黄色。荧光追踪观察结果显示,在移植后0、12、24和48 hpt的受体斑马鱼胚胎中均能检测到供体黄鳝卵原细胞,且黄鳝卵原细胞迁移至受体斑马鱼胚胎的生殖嵴上进行整合及增殖,但72 hpt受体斑马鱼出膜后荧光信号丢失。组织形态学观察结果表明,黄鳝卵原细胞注入受体斑马鱼胚胎中48 hpt后其细胞质结构松散,生殖细胞由动物极向两端迁移而分化形成组织,72 hpt和30 dpt的移植受体斑马鱼与对照组斑马鱼无明显差别。半定量PCR检测结果显示,在48 hpt受体斑马鱼胚胎中能检测黄鳝nanos3基因表达,而在72 hpt和30 hpt受体斑马鱼中表达微弱。荧光原位杂交检测结果显示,48 hpt、72 hpt和30 dpt的移植受体斑马鱼均有黄鳝nanos3基因表达。【结论】黄鳝卵原细胞在48 hpt后仍存在于受体斑马鱼胚胎内,但72 hpt后在受体斑马鱼胚胎未检测到黄鳝卵原细胞,即黄鳝卵原细胞在斑马鱼受体中迁移并最终整合到生殖嵴上,但在斑马鱼出膜后无法继续存活。因此,为了提高黄鳝生殖细胞移植成功率应选择亲缘关系近的鱼种或构建性腺不育种质作为受体。

lncRNA-NAS对湖羊睾丸间质细胞睾酮分泌的影响及其靶基因鉴定

[目的]本文旨在探究lncRNA-NAS对湖羊睾丸间质细胞(LC)睾酮分泌的影响。[方法]利用RT-qPCR对湖羊lncRNA-NAS进行组织表达谱分析,针对lncRNA-NAS设计siRNA并将其转染睾丸间质细胞;利用ELISA、Western blot、细胞计数(CCK-8)、RT-qPCR等技术分析干扰lncRNA-NAS对睾丸间质细胞睾酮分泌、细胞增殖和凋亡的影响;在高通量测序基础上对lncRNA-NAS可能作用的靶基因进行分析。[结果]lncRNA-NAS在湖羊心脏、肝、脾、肾、空肠、睾丸组织中均有表达,但其在睾丸中的表达量显著高于其他组织(P<0.05);lncRNA-NAS在睾丸中的表达量随着湖羊年龄增长而呈上升趋势,2周岁(2 Y)表达量显著高于5日龄(5 D)、3月龄(3 M)和9月龄(9 M)(P<0.05),9 M表达量显著高于5 D和3 M(P<0.05),5 D和3 M表达量差异不显著(P>0.05);相比对照组,干扰lncRNA-NAS后,睾丸间质细胞中睾酮分泌水平显著升高(P<0.05),睾酮分泌相关基因和蛋白表达量显著升高(P<0.05),细胞增殖活力增强(P<0.05),细胞凋亡相关基因Bax/Bcl-2 mRNA表达量和蛋白比值均显著降低(P<0.05);分析lncRNA-NAS潜在的9个靶基因,2个为未知基因,针对7个已知基因进行研究,当lncRNA-NAS干扰后,发现只有生殖细胞发育相关基因Nanos3表达水平发生变化,表现为显著升高(P<0.05),提示Nanos3可能为lncRNA-NAS作用的靶基因。[结论]lncRNA-NAS可能通过调控靶基因Nanos3影响湖羊睾丸间质细胞睾酮的分泌。

NaCl、KCl和NaNO_3对盐地碱蓬生长以及植物体内离子组成和分布的效应

盐生植物盐地碱蓬(Suaeda salsa)的幼苗分别用0、50、100和200 mmol·L^(-1)的NaCl、KCl和NaNO_3处理15和30 d后取样并测定干鲜重、肉质化和离子含量的变化的结果显示:(1)NaCl处理后植株鲜重和干重均随着NaCl浓度的增大而升高,NaNO_3的效应次之,KCl则起抑制作用;(2)三种盐处理后植株肉质化水平依次为NaCl>NaNO_3>KCl;(3)离子含量变化为,Na^+含量依次为NaCl>NaNO_3>KCl;K^+含量依次为KCl>NaCl>NaNO_3;Cl^-含量依次为KCl>NaCl>NaNO_3;(4)盐地碱蓬对NaCl的响应特别显著并具有很强的依赖性,200mmol·L^(-1)NaCl处理30d后植物体内Na^+和Cl^-含量分别占干重的13.5%和10.1%。显然,盐地碱蓬是一种专性盐生植物,是一种钠和氯的超富集植物。

碱性介质多元体系中钒酸钠结晶分离

测定了NaOH-NaNO_3-NO_3VO_4-Na_2CrO_4-H_2O五元体系各盐在碱中的相平衡浓度,根据所得数据对该体系中的Na_3VO_4进行了冷却结晶分离.通过研究NaOH浓度、NaNO_3浓度、结晶终点温度、降温速度、搅拌速度、晶种对钒酸钠结晶分离的影响,得到的最优实验条件为：结晶液中NaOH浓度200~250g/L,NaN0_3浓度200g/L左右,搅拌转速200r/min,80~40℃自然降温,添加晶种量1%（ω）,该条件下Na_3VO_4结晶率为61%,晶体纯度可达95%,且晶体颗粒人（147μm）,沉降分离速度快（〈10min）.

原位化学处理对东湖底泥中磷释放的影响

厌氧条件下对东湖底泥进行了30 d,4种原位化学处理(①Al2(SO4)3,②FeCl3,③CaCl2,④NaNO3)的模拟实验.结果表明,厌氧条件下底泥释放磷的速率大大超过化学处理底泥时释放磷的速率.厌氧条件下用未使用化学处理和分别用上述4种化学处理时磷的平均释放速率分别为7.548,-0.644,0.033,0.174,0.644mg.m-2.d-1;水相中总铁量和总磷量有一定的相关性.底泥中注入上述盐类引起了各形态磷组分的变化:CaCl2使处理后底泥中钙结合态磷PCa含量最高,表明钙盐促进了难溶性的含磷矿物质的生成;FeCl3和NaNO3处理的底泥表面氧化的Fe3+和铁、锰的金属氧化物结合态磷PFe,Mn的含量增加,证实了底泥表面铁氧化物对磷保持力的重要性;Al2(SO4)3处理后铝和铁的金属氧化物结合态磷PAl,Fe含量高,说明磷被吸附在铝氧化物中,因而铝盐具有较强的束缚磷的能力.

三元体系NaNO_3-KNO_3-Ca(NO_3)_2相图预测及其热力学研究

采用Toop模型预测NaNO3—KNO3-Ca（NO3）2三元体系的相图，得到三元共晶点为395．2K，摩尔分数分别为：0．122（NaNO3）、0．548（KNO3）0．330（Ca（NO3）2）。采用DSC实验对预测的三元共晶点材料的熔点进行测试，实验值为400．1K，与预测值吻合很好。将预测的三元共晶点的组成与熔点与文献报道的共晶点数据进行对比分析。对预测的三元共晶点材料进行热重TG等热稳定性测试，发现热稳定温度为773．0K，表明预测的三元共晶点材料在400．1～773．0K之间可以保持稳定的液态。

不同N源及N/P对东海原甲藻生长的影响

研究了不同浓度和不同形态的N对东海原甲藻（Prorocentrum donghaiense）生长的影响。结果表明：在以NH4Cl为N源时，当N浓度为5.20 μmol/L（N/P为8）时藻的比生长率最高，达0.499 d-1；在NaNO3为N源时，最适N/P为12。以尿素为N源时，N/P为16时藻的比生长率最大。东海原甲藻对无机N（NH4Cl和NaNO3）和尿素都可以利用，适宜生长的N/P范围在8～20之间，而相对高的N/P（32、100）不利于生长。当以甘氨酸和L-丙氨酸为N源时，随着N浓度的增高，原甲藻生长的速率和生物量反而下降，表明该藻对两种氨基酸的利用程度不高，高浓度时反而对东海原甲藻的生长有较明显的抑制作用。

桉木常规KP浆和RDH浆的氧脱木素研究(Ⅲ)——HNO_3/NaNO_3预处理对常规KP浆氧脱木素的影响

研究了HNO_3/NaNO_3预处理对桉木常规KP浆氧脱术素的改善效果。研究表明,在氧脱术素前,用HNO_3/WaNO_3对浆料进行预处理,可以有效改善后续氧脱木素段的脱木素效率,提高氧脱术素的选择性。但HNO_3/NaNO_3用量有一最佳值,且宜采用短时间高温预处理的方式进行。若将HNO_3/NaNO_3预处理与H_2O_2强化氧脱术素相结合,可取得进一步降低氧脱木素浆卡伯值、提高纸浆白度和保持较高纸浆粘度的良好效果。

关于NaNO_2-Al(NO_3)_3-NaOH比色法测定总黄酮方法的探讨

目的:探讨NaNO_2-Al(NO_3)_3-NaOH定量方法的专属性。方法:选用多种黄酮及非黄酮化合物,与NaNO_2、Al(NO_3)_3、NaOH试剂反应后测定400～700nm吸收曲线。结果:有些黄酮类物质在500nm处无最大吸收或吸收很弱,而有些非黄酮类物质在500nm处有最大吸收或有较强吸收。结论:以芦丁为对照品,NaNO_2-Al(NO_3)_3-NaOH比色法测定总黄酮方法专属性差。

水溶液法制备NaNO_3-LiNO_3/石墨复合高温相变材料研究

利用饱和水溶液法,在NaNO3和LiNO3混和溶液中添加膨胀石墨(EG),在温度90℃的水浴箱内用强力电动搅拌机搅拌,随后放入120℃电热恒温鼓风干燥箱内24h烘干,得到NaNO3-LiNO3/EG高温复合相变材料,并分别制备了EG含量为10%、20%、30%的相变材料。利用SEM、DSC、Hot-disk和自行设计的自动循环设备分别对复合相变材料的微观形貌、相变温度、潜热、导热系数以及热循环过程中储放热行为进行了测试。研究表明,NaNO3-LiNO3共晶盐能够被吸附到石墨片层之间,形成稳定、均一的复合相变材料。随EG含量的增加,复合相变材料的有效潜热不断降低,但是相变温度变化微小,相变材料本身的储热性能也没有显著的变化,因此EG没有改变相变材料的储热性能。EG含量的增加,会显著提高复合相变材料的导热系数,并且随EG含量的增加而不断增大。EG含量低的复合材料在多次蓄放热的热循环过程中,热稳定性较好。饱和水溶液法制备NaNO3-LiNO3/EG复合相变材料是一种非常有效的强化复合材料导热功能的制备方法。在实际应用中,要综合考虑储热量、导热性能和热稳定性等各方面因素进行优化选择,以便使储热系统能够高效率、快频率、长寿命地运行。

不同质量浓度NaNO_3对3种微藻生长及总脂肪酸含量和组成的影响

以BG11为基本培养液,研究了不同质量浓度NaNO3（37.5-1 875.0 mg·L^-1）对微藻P9（Klebsormidium sp.）、TH6（Oedocladium sp.）和CF5（Stigonema sp.）生长及总脂肪酸含量和组成的影响。结果显示,调整（减少或增加）培养液中NaNO3的质量浓度,对3种微藻的生长量及总脂肪酸含量和脂肪酸组成均有一定的影响;NaNO3的质量浓度较低（37.5或75.0 mg·L^-1）,3种微藻的鲜质量随培养时间的延长呈先逐渐增加然后略有降低的趋势;而在NaNO3质量浓度为150.0-1 875.0 mg.L-1的条件下,在一定的培养时间（18-33 d）内,3种微藻的鲜质量均逐渐增加;总体上看,3种微藻的生长量随NaNO3质量浓度的提高呈现逐渐增加的趋势,但仅在含1 875.0 mg.L-1NaNO3的培养液中3种微藻的生长量高于对照（1 500.0 mg·L^-1NaNO3）。在含375.0 mg·L^-1NaNO3的培养液中培养33 d,微藻P9的总脂肪酸含量最高（25.39%）,是对照的1.79倍,软脂酸、亚油酸、油酸和硬脂酸的相对含量分别是对照的2.50、2.72、2.24和2.08倍;在含37.5 mg·L^-1NaNO3的培养液中培养33 d,微藻TH6的总脂肪酸含量最高（20.69%）,是对照的1.89倍,软脂酸、亚油酸和油酸的相对含量分别是对照的3.37、1.79和1.92倍;不同处理组间微藻CF5的总脂肪酸含量及组成有一定差异,但随着NaNO3质量浓度的提高变化趋势不明显。研究结果表明,适当提高培养液中的NaNO3浓度对微藻的生长有一定的促进作用,不同种类微藻适宜的NaNO3浓度有一定的差异。综合考虑生长量和总脂肪酸含量及脂肪酸组成等因素,确定适宜于微藻P9、TH6和CF5培养的NaNO3质量浓度分别为375.0、37.5和150.0 mg·L^-1。

载体含量对NaNO_3/硅藻土复合相变储热材料的性能影响规律

采用混合烧结工艺,通过改变硅藻土载体材料的质量分数制备5种不同参数的NaNO_3/硅藻土复合相变储热材料(CPCM)样品,并对其进行抗压强度测试、热物性测试、能谱表征、微观形貌观察及热性能分析。当硅藻土质量分数从30%增加到35%和40%时,样品抗压强度随之增加,表现出脆性材料特征,当达到45%和50%时,则表现出塑性材料特征。硅藻土的加入和混合烧结处理对NaNO_3的相变几乎没有影响。样品的热导率随温度升高而降低,在同一温度条件下,样品热导率均随硅藻土质量分数的升高基本呈上升趋势,但从30%增加到35%时,热导率的增幅大于从35%增加到50%时热导率的增幅,前者约为后者的8倍。与NaNO_3相比,样品在常温-相变前温度段和相变结束-最高温度段的平均比热容随硅藻土质量分数变化均出现先下降后上升的变化。硅藻土质量分数为35%时,样品内部结构致密,NaNO_3充分均匀吸附于硅藻土的分离独立小单元中。硅藻土质量分数为35%时样品具有较好的抗压强度和储热效果。

渗透胁迫下氮磷钠配方对多浆旱生植物霸王生长的影响

以多浆旱生植物霸王(Zygophyllum xanthoxylum)为材料,采用砂培试验,研究了适量的氮磷钠配方对霸王生长和抗旱性的影响。结果表明,15mmol·L-1 NaNO3和0.5mmol·L-1 NaH2PO4为霸王生长最适浓度。根据最适的氮、磷、钠3种元素的浓度配制成氮磷钠配方(15mmol·L-1 NaNO3+0.5mmol·L-1 NaH2PO4+34.5mmol·L-1 NaCl)。在-1MPa处理下,与对照相比,氮磷钠配方处理的霸王植株的叶干质量、组织含水量、叶面积、叶相对有机干质量和株高分别增加了12%、121%、57%、10%和14%,同时,叶片丙二醛含量和相对质膜透性分别下降了64%和17%。因此,在渗透胁迫下,氮磷钠配方对霸王的生长起到了促进作用,减轻了细胞膜的受损程度,增强了霸王的抗旱能力。

氮源和初始NaHCO_3浓度对转Tα1基因聚球藻7942生长与表达的影响

研究了氮源和初始NaHCO3浓度对转基因聚球藻 794 2生长与胸腺素α1表达的影响。结果表明 :最适的氮源为NaNO3,NaNO3浓度低于 1g/L时 ,增加NaNO3浓度能提高藻细胞的生长和表达 ,但 1～ 2 .5 g/LNaNO3对转基因聚球藻 794 2生长与表达没有明显的影响。最适的初始NaHCO3浓度为 8.0 g/L。生长在 8.0 g/L初始NaHCO3浓度培养基中藻细胞密度和胸腺素α1最大表达能力分别为BG 11培养基中的 1.94倍和 2 .0 1倍。

三元体系CH_2OHCH_2OH+NaNO_3/KNO_3+H_2O在15℃和25℃下的溶解度、密度和折光率研究

为研究有机溶剂乙二醇(CH2OHCH2OH)的加入对NaNO3和KNO3在H2O中溶液性质的影响,采用自制的相平衡研究装置,用密度-折光率联合的方法,测定了NaNO3和KNO3在CH2OHCH2OH+H2O混合溶剂中在15℃和25℃下的平衡溶解度、密度和折光率。结果表明,在所有饱和体系中,随着乙二醇质量百分含量的增加,盐在混合溶剂中的溶解度和密度降低,而折光率却逐渐增大。不饱和体系中密度和折光率都随着盐含量增加而增加,随着醇比例的增加而上升。用不同的经验关联方程分别对所有饱和体系和不饱和体系的溶解度、折光率及密度数据进行了拟合,获得了较为理想的拟合结果。研究结果提供了碱金属盐在混合溶剂中的热力学数据,为相关溶液化学研究奠定了基础。

不同NaNO3浓度下可变电荷土壤铜离子解吸率的分配及影响因素

研究了江西红壤和昆明铁质砖红壤在去离子水中和在0．1molL^-1 NaNO3溶液中吸附铜离子后，依次在包括去离子水在内，浓度由低到高的NaNO3溶液中解吸时，铜离子解吸率在不同吸附pH段的分配规律。结果表明，随着吸附pH的升高，可在去离子水中解吸的铜离子解吸率变化规律与在NaNO3溶液中者完全不同。在所研究的吸附pH范围内，大致以吸附pH3．7～4．0为界，低于此值时，吸附性铜离子基本以在去离子水中解吸为主，反之则基本为交换性解吸。土壤中氧化铁含量和吸附时溶液的NaNO3浓度越高，则能被交换解吸的铜离子所占总解吸率的比例越低。其原因与不同pH段各种铜离子吸附态在不同吸附条件下的比例分配以及解吸对体系pH的影响有关。

红曲固态发酵生产洛伐他汀的实验条件优化

笔者对洛伐他汀固态发酵的8个重要影响因素进行了正交实验设计, 并根据正交试验水平极差计算选取了高产洛伐他汀的优化水平组合, 即温度25 ℃, 周期11 d, 碳源为可溶性淀粉3%, 补水量自第3 天开始为10%, 不加硫酸镁, 0 1%磷酸二氢钾, 氮源为0 2% NaNO3, pH值4 5。