Effect of Naojian Tablet on cerebral ischemic injury and its prevention mechanism

OBJECTIVE To investigate the prevention and its mechanism of Naojian Tablet,the adjusted prescription from Buyang Huanwu Decoction,during focal ischemic brain injury condition,and study on the main bioactive substance for this function.METHODS To apply the modified middle cerebral artery occlusion(MCAO)model in rats,immunohistochemistry,RT-PCR and Western blotting were applied to determine the expression of CDK5,CDK4/cyclinD1 in the hippocampus tissues in MCAO rat by treating with Naojian Tablet.On the other hand,the processes of metabolism and disposition of several active components in Naojian Tablet and Buyang Huanwu Decoction were analyzed and characterized by using HPLC-Q-TOF method.RESULTS Naojian Tablet(ig,2.41g·kg-1)could significantly decrease the levels of CDK5,CDK4/cyclinD1 in hippocampus tissues in MACO rat after treated by 3d,7d,14 d,28d(P<0.05).The similar mechanism was observed in the Buyang Huanwu Decoction treated MACO rat.Calycosin,fermononetin,senkyunolide and ligustilide in Naojian Tablet was determined simultaneously as the main active ingredient of Naojian Tablet.CONCLUSION The above-mentioned in vivo studies suggested that Naojian Tablet maybe play its prevention effect on nerve cells via its acting on CDK5 signaling and cell cycle pathway,which verified the multi-target and multi active pathways efficiency of tradition Chinese medicine in treating diverse disease.

补阳还五汤类方成分的药代动力学比较研究

目的比较补阳还五汤类方(补阳还五汤和脑健片)中阿魏酸、洋川芎内酯A、藁本内酯在大鼠体内的药代动力学特征。方法将补阳还五汤类方灌胃颈静脉插管大鼠,采用HPLC-DAD法同时检测3种成分在不同时间点的血药浓度,经DAS2.0计算得单成分的药代动力学参数,再采用总量统计矩(相似度)法整合成整体药代动力学参数并进行比较。结果 3种成分在体内的总量统计参数相差甚远,而3种成分总和的统计矩参数却比较接近,补阳还五汤和脑健片在大鼠体内AUC分别为240.6和133.0,MRT分别为3.192 min和3.259 min,VRT分别为21.59 min^2和19.75 min^2;补阳还五汤和脑健片中3种成分总量的相似度达到0.977 8。结论补阳还五汤和脑健片在体内代谢过程具有相似性,中药复方发挥功效依赖于多成分的整体贡献。

脑健冲剂对AD大鼠5-HT和MAO影响的实验研究

目的采用脑健冲剂治疗AD,观察脑健冲剂对AD大鼠海马区5-羟色胺和MAO的影响。方法本实验采用D-半乳糖拟衰老,Aβ1-40损害联合所致AD模型,用脑健冲剂治疗。结果脑健冲剂可提高海马5-羟色胺含量和降低MAO的水平。结论脑健冲剂可治疗AD。

脑健冲剂对AD大鼠Aβ沉积影响的实验研究

目的 采用脑健冲剂治疗AD ,观察脑健冲剂对AD大鼠海马区Aβ沉积的影响。 方法 本实验采用D -半乳糖拟衰老 ,Aβ损害联合所致AD模型 ,用脑健冲剂治疗。 结果 脑健冲剂可减少海马Aβ沉积的水平。

脑健胶囊对局灶性脑缺血大鼠脑组织病理形态及血液流变学指标的影响

目的观察脑健胶囊对局灶性脑缺血大鼠脑组织细胞形态及血液流变学指标的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、脑健胶囊组,每组25只,采用大脑中动脉栓塞法(MCAO)建立永久性局灶性脑缺血模型,于手术后1 d、3 d、7 d、14 d、28 d处死,给予不同处理,采用HE染色法观察脑组织细胞形态、取动脉血进行血液流变学检测。结果 (1)模型组大鼠脑组织海马神经元细胞与假手术组比较出现典型缺血损伤表现,脑健胶囊组脑缺血组织与模型组比较自术后3 d开始恢复,且其起效时间优于补阳还五汤组。(2)模型组大鼠自术后1 d开始血液流变学中血浆黏度、全血高切相对指数、全血低切相对指数、卡松黏度即较假手术组明显升高(P<0.05或P<0.01),脑健胶囊组大鼠上述血液流变学指标在各时间点均较模型组降低(P<0.05或P<0.01),且其3 d的血浆黏度和28 d的全血高切相对指数水平改善均优于补阳还五汤组(P<0.05)。结论促进脑缺血组织细胞形态恢复,改善血液流变学特性,可能是脑健胶囊发挥脑保护作用的重要途径之一。

脑健胶囊防治老年性痴呆神经递质改变实验研究

在腹腔注射D-半乳糖造成大鼠衰老的基础上,双侧海马注射喹啉酸造成拟老年性痴呆学习记忆损害模型。观察AchE MAO5-HT的活性,检测脑健胶囊对老年性痴呆大鼠神经递质的影响。结果脑健胶囊能够降低AchE MAO活性,增加5-羟色胺含量,证明脑健胶囊对AD有保护和治疗作用。

脑健冲剂对AD大鼠行为学改变及海马区线粒体结构影响的光、电镜观察

通过行为学检测及光、电镜观察,观测脑健冲剂对D-半乳糖致衰老基础上β-淀粉样蛋白颅内注射所致AD大鼠的记忆功能改变及海马区线粒体结构的影响。实验证明脑健冲剂能改善AD大鼠的记忆功能及线粒体损伤程度。

脑健冲剂对AD大鼠神经原纤维影响的实验研究

目的 采用脑健冲剂治疗AD ,观察脑健冲剂对AD大鼠海马神经原纤维的影响。方法 本实验采用D -半乳糖拟衰老 ,Aβ损害联合所致AD模型 ,用脑健冲剂治疗。 结果 脑健冲剂可改善海马神经原纤维的扭曲和增粗。结论 脑健冲剂可治疗AD。

脑健胶囊对MCAO大鼠脑组织Fas凋亡途径的影响

目的研究脑健胶囊对大鼠脑组织Fas凋亡途径的影响,探讨脑健胶囊抗脑缺血后神经保护的作用机制。方法将SD大鼠随机分为补阳还五汤组、脑健胶囊组、模型组和假手术组共4组,每组25只。除假手术组和模型组给予等体积无菌蒸馏水以外,其余两组在大脑中动脉线检法复制局灶性脑缺血大鼠模型(MCAO)造模后给药,将各组大鼠分别存活1、3、7、14、28 d时取脑组织及腹主动脉采血。运用免疫组化法和Elisa法检测脑组织及血清中Fas相关死亡域蛋白(FADD)、Caspase-8、Caspase-3因子表达。结果脑缺血后大鼠均有神经功能障碍,经过治疗后,脑健胶囊能显著改善其神经功能缺失症状,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论脑健胶囊通过抑制缺血后脑组织FADD、Caspase-3、Caspase-8的表达,从而起到保护缺血后脑组织作用,减轻脑组织损伤。

脑健冲剂对AD模型大鼠行为学及线粒体结构影响的实验研究

目的 :研究脑健冲剂对AD模型大鼠行为学及线粒体超微结构的影响。方法 :采用D -半乳糖致衰老与 β -淀粉样蛋白注射联合所致的AD大鼠模型 ,服用脑健冲剂 ,测试大鼠在迷宫中的学习及记忆能力和海马CA1区线粒体体密度、面数密度等形态学指标。结果 :脑健冲剂能有效的改善AD模型大鼠的学习、记忆障碍 ,并能很好地改善线粒体结构的受损程度。结论 :脑健冲剂对AD有较明显的治疗作用 ,为临床应用脑健冲剂治疗AD提供实验依据。

补阳还五汤及其精简方(脑健片)对脑缺血大鼠海马组织CDK4/Cyclin D1表达的影响

评价补阳还五汤及其精简方(脑健片)对脑缺血体内模型大鼠海马组织周期蛋白CDK4/Cyclin D1的调控。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤干预组(灌胃3.15 g·kg-1)及补阳精简方干预组(灌胃2.41 g·kg-1),每组按给药后1,3,7,14,28 d再各分5组。采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法考察不同时间点各组大鼠海马组织中CDK4/Cyclin D1的表达。结果发现脑缺血模型大鼠海马组织中,CDK4/Cyclin D1的表达上调,与假手术组比P<0.01,提示脑缺血损伤将激活细胞周期信号通路;补阳还五汤及其精简方干预后的3,7,14,28 d均能显著降低周期蛋白的表达,与模型组比P<0.05,提示补阳还五汤及其精简方均可通过细胞周期信号通路对神经细胞发挥保护作用。

脑健胶囊对局灶性脑缺血大鼠趋化因子MCP-1、MIP-1α的影响

目的探讨脑健胶囊对局灶性脑缺血大鼠趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的影响。方法将100只大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和脑健胶囊组,每组25只,采用大脑中动脉栓塞法建立永久性局灶性脑缺血模型,于术后1d、3d、7d、14d、28d处死,采用ELISA法检测血清中MCP-1、MIP-1α含量,免疫组化法检测脑组织中MCP-1、MIP-1α的阳性表达。结果模型组大鼠自术后1d始血清中MCP-1、MIP-1α含量即较假手术组明显升高(P<0.05或P<0.01),脑健胶囊组大鼠血清中上述指标在各时间点均较模型组降低(P<0.05或P<0.01),且其1d的MCP-1和14d的MIP-1α水平改善均优于补阳还五汤组(P<0.05);模型组脑组织中MCP-1、MIP-1α的阳性表达在术后1d、3d、7d、14d、28d均高于假手术组(P<0.05或P<0.01),脑健胶囊组MCP-1的阳性表达在上述各时间点均较模型组降低(P<0.05或P<0.01),而其MIP-1α的阳性表达从术后7d、开始降低(P<0.05或P<0.01),且脑健胶囊组MIP-1α的阳性表达在术后7d、28d均明显低于补阳还五汤组(P<0.05)。结论脑健胶囊抗脑缺血损伤的保护作用可能与降低MCP-1、MIP-1α水平,进而抑制脑缺血后炎症反应有关。

HPLC-DAD法同时测定脑健胶囊中4种指标成分含量

目的：建立脑健胶囊HPLC-DAD指纹图谱,并对其指标成分川芎嗪、阿魏酸、洋川芎内酯A、藁本内酯进行含量测定。方法：采用Elipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,柱温30℃,以0.3%乙酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,采用DAD检测器,检测波长为川芎嗪295 nm,阿魏酸325 nm,洋川芎内酯A 280 nm,藁本内酯328 nm。结果：脑健胶囊中4种指标成分能实现同时分离,川芎嗪、阿魏酸、洋川芎内酯A、藁本内酯的线性范围分别为：0.1033~2.066 g（R2=0.9999）,0.04966~1.9864 g（R2=0.9995）,0.1011~2.022 g（R2=1）,0.4072~2.066 g（R2=1）;平均加样回收率分别为95.60%（RSD 1.50%）,97.44%（RSD 1.63%）,106.2%（RSD 0.25%）,99.36%（RSD 0.71%）。结论：该方法客观可靠,适用于脑健胶囊全成分分析,实现综合质量控制。

脑健冲剂对AD大鼠线粒体结构及离子泵ATP酶的影响

目的 观察脑健冲剂对AD大鼠线粒体结构及离子泵ATP酶的影响。方法 采用D 半乳糖致衰老基础上 β 淀粉样蛋白颅内注射所致AD大鼠模型。将Wista大鼠随机分为 6组 :空白组、假损伤组、模型组、对照组、治疗组、保护组 ,通过电镜观察及比色法 ,观察脑健冲剂的作用。结果 脑健冲剂能使AD大鼠的Ca+ ATP酶、Ca2 + Mg2 + ATP酶、Na+ K+ ATP酶活力水平明显提高。用药组的线粒体体密度、面数密度和平均截面积与模型组相比差异有非常显著意义 (P <0 0 1 )。结论 脑健冲剂能改善AD大鼠的线粒体损伤程度 。

脑健胶囊对MCAO大鼠脑水肿、梗死面积及体质量的影响

目的:探讨脑健胶囊对MCAO大鼠脑水肿、脑梗死面积比及体质量恢复趋势的影响,筛选最佳剂量。方法:将大鼠随机分成假手术组(无菌蒸馏水),模型组(无菌蒸馏水),补阳还五汤组(干浸膏3.15 g·kg-1),脑健胶囊高剂量组(相当于干浸膏3.44 g·kg-1)、中剂量组(干浸膏2.41 g·kg-1)、低剂量组(干浸膏1.68 g·kg-1),灌服剂量为0.05 mL·kg-1,每组各10只。大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血模型,于手术醒后2 h和7 d处死前1 h评价其神经功能,每日称体质量,每组随机取5只计算梗死面积比,5只计算大脑含水量比。结果:脑缺血后大鼠均有神经功能障碍,治疗7 d后,脑健胶囊中剂量能显著改善其神经功能缺失症状,恢复体质量,减小梗死面积,减轻脑组织水肿,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:脑健胶囊以中剂量(干浸膏2.41 g·kg-1)疗效最佳。