脑泰方对脑缺血/再灌注大鼠海马区Nrf2、HO-1和膜铁转运辅助蛋白表达的影响

目的研究益气活血中药脑泰方通过Keap1-Nrf2/ARE信号通路对脑缺血/再灌注后大鼠海马区血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和膜铁转运辅助蛋白(hephaestin,Heph)表达的影响。方法将80只♂大鼠随机分为假手术组、模型组、脑泰方低剂量组(4.5 g·kg^(-1))、中剂量组(9 g·kg^(-1))和高剂量组(18 g·kg^(-1))。各组大鼠术前连续灌胃给药3 d,每日1次,再行大脑中动脉线栓法脑缺血/再灌注模型制备术,术后连续灌胃给药2 d。术后72 h采用Zea Longa神经功能学评分标准记录大鼠行为活动,TTC染色法测定脑梗死体积,real-time PCR检测大鼠海马区Nrf2、HO-1、Heph的mRNA表达,Western blot检测Nrf2、HO-1、Heph的蛋白表达。结果与模型组比较,脑泰方中、高剂量组的神经行为学评分明显下降(P<0.01),各脑泰方组脑梗死体积明显缩小(P<0.01);HO-1 mRNA表达均增加(P<0.05)。脑泰方中、高剂量组Heph mRNA表达增加(P<0.05);Nrf2和Heph蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。各脑泰方组HO-1蛋白表达增高(P<0.01)。结论脑泰方能减轻脑缺血/再灌注损伤,其机制可能是通过激活Keap1-Nrf2/ARE信号通路,促进HO-1生成,上调Heph的表达,减少脑铁沉积,发挥脑缺血/再灌注后神经元的保护作用。

益气活血中药脑泰方对脑缺血后海马CA2区铁跨膜转运蛋白表达的调节作用

目的:研究脑缺血后铁跨膜转运蛋白:转铁蛋白受体(Transferrin Receptor,TFR)、膜铁转运蛋白(Ferroportin,Fpn)、二价金属离子转运体(Divalent Metal Ion Transporter 1,DMT1)、人类猫白血病C亚类病毒受体(Feline Leukemia Virus Subgroup C Receptor,FLVCR)、胸腺癌抵抗蛋白(Breast Cancer Resistance Protein,BCRP)在益气活血法脑泰方(黄芪、川芎、地龙、僵蚕)干预后的表达变化。方法:随机将SD大鼠分为假手术组、模型组、脑泰方低、中、高剂量组(3、9、27 g/kg)。各组大鼠预处理灌胃给药连续3 d,大脑中动脉栓塞法(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模型制备术后连续灌胃给药3d,1次/d。术后3 d取材,免疫组织化学及Western-blot检测TFR、Fpn、DMT1、FLVCR、BCRP的表达。结果:脑泰方高剂量组缺血海马CA2区TFR表达明显降低(P<0.05),DMT1量的表达减少(P<0.05),Fpn表达明显增高(P<0.05)。脑泰方各剂量组FLVCR表达明显增高(P<0.05),各脑泰方治疗组BCRP表达与模型组无差异。结论:脑泰方通过减少TFR、DMT1的表达,抑制铁的细胞内转运,增加Fpn、FLVCR的表达,促进胞内铁的外排,调节铁代谢,起到神经元的保护作用。

大鼠脑缺血后海马CA2区FLVCR和BCRP的表达及益气活血法干预

目的研究脑缺血后血红素铁转运蛋白人类猫白血病C亚类病毒受体(feline leukemia virus subgroup C receptor,FLVCR)及胸腺癌抵抗蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)随时间表达及益气活血法脑泰方(黄芪、川芎、地龙、僵蚕)提取物干预对FLVCR及BCRP表达的影响。方法实验分两步进行,第一部分实验:随机将SD大鼠分为2 h、6 h、12 h、24 h、72 h组,采用大脑中动脉栓塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)行大鼠局灶性脑缺血模型制备,分别在术后2 h、6 h、12 h、24 h、72 h各时间点取材,通过免疫组织化学及RT-PCR检测FLVCR和BCRP及FLVCR mRNA和BCRP mRNA随时间表达的变化。第二部分实验,随机将SD大鼠分为假手术组、模型组、脑泰方低、中、高剂量组(3、9、27 g/kg)。各组大鼠预处理藻胃给药连续3天,MCAO模型制备术后连续藻胃给药3天,每日1次。术后3天取材,电镜检测海马神经元内铁样颗粒分布,免疫组织化学及RT-PCR检测FLVCR和BCRP及FLVCR mRNA和BCRP mRNA表达。结果 72 h组FLVCR表达明显降低(P<0.05),BCRP的表达2 h、6h较高,12 h、24 h、72 h表达明显降低(P<0.05);电镜下脑泰方各剂量组神经元内铁样颗粒聚集较模型组减少。脑泰方高剂量组FLVCR及FLVCR mRNA表达明显增加(P<0.05),BCRP表达无明显改变。结论大鼠脑缺血后第72 h FLVCR表达下降,益气活血中药脑泰方提取物干预可增加脑缺血后FLVCR的表达,促进血红素铁的外排,可能是治疗脑缺血损伤的新机制。

脑泰方提取物预处理对脑缺血再灌注沙土鼠海马神经元的影响

目的 :探讨脑泰方提取物预处理减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤的作用。方法 :采用钳夹双侧颈总动脉建立沙土鼠脑缺血模型 ,将 6 5只沙土鼠随机分为假手术组 ,脑缺血再灌注损伤组 (IR组 )、脑缺血预处理组 (IPC组 )、脑泰方提取物预处理组 (NPC组 ) ,根据再灌注不同时间 (2 4、4 8、72h和 7天 )。将IR组、IPC组、NPC组各分 4个亚组 (n =5 )。观察各时相沙鼠海马CA1区神经元状况 ,海马CA1区存活神经元数目。结果 :(1)IPC组、NPC组与IR组同期比较 ,海马CA1区存活神经元数目明显增多 (P <0 .0 5 ) ,脑组织结构明显改善 ;(2 )各组不同时相比较 :随着再灌注时间延长 ,海马CA1区存活神经元数目逐渐减少 ,至第 7天达最低 ;(3)药物预处理组与缺血预处理组比较 :海马CA1区存活神经元数目差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论

脑泰方提取物预处理减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤作用研究

目的探讨脑泰方提取物预处理减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤的作用。方法采用钳夹双侧颈总动脉建立沙土鼠脑缺血模型 ,将 1 3 0只沙土鼠随机分为假手术组 (SOG) ,脑缺血再灌注损伤组 (IRG组 )、脑缺血预处理组 (IPG组 )、脑泰方提取物预处理组 (NPG组 ) ,根据再灌注不同时间 ( 2 4、48、72h和 7d)。将IRG组、IPG组、NPG组各分 4个亚组 (n=1 0 )。观察各时相沙鼠 ,海马CA1 区存活神经元数目、脑组织含水量以及脑毛细血管通透性。结果①IPG组、NPG组与IRG组同期比较 ,脑含水量、伊文思蓝含量明显降低 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,海马CA1 区存活神经元数目明显增多 (P <0 .0 5 ) ;②各组不同时相比较 :随着再灌注时间延长 ,脑含水量、伊文思蓝含量测量值于第 72h达到最高 ;海马CA1 区存活神经元数目至第 7d达最低 ;③药物预处理组与缺血预处理组比较 :海马CA1 区存活神经元数目、脑含水量差异不明显 (P >0 .0 5 ) ,脑组织伊文思蓝含量差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。