脑通汤对缺氧/复氧大鼠海马神经元Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的探讨脑通汤对缺氧/复氧(H/R)大鼠海马神经元Bcl-2、Bax和半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达的影响及防治海马神经元凋亡的作用机制。方法取培养9 d的海马神经元,随机分为正常细胞组、H/R模型组、正常血清组、脑通汤大、中、小剂量含药血清组。除正常细胞组以外,各组均缺氧24 h再复氧2 h造模。采用免疫组化检测海马神经元Bcl-2、Bax蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3基因的表达。结果免疫组化显示:与正常细胞比较,模型组Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达明显升高、Bcl-2/Bax比值下调(P<0.05)。与模型组比较,脑通汤大、中、小剂量含药血清组Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值明显增高,Bax蛋白表达明显下降,呈剂量依赖性(P<0.05);但正常血清组上述指标无显著变化(P>0.05)。实时荧光定量PCR显示:Bcl-2、Bax mRNA趋势同蛋白表达一致,Caspase-3 mRNA趋势同Bax mRNA表达一致。结论脑通汤可通过上调Bcl-2蛋白及基因表达和Bcl-2/Bax比值,抑制Bax及Caspase-3的过度表达,从而抑制H/R海马神经元凋亡。

脑通汤对脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤内皮屏障抗原及紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1表达的影响

目的:探讨脑通汤对脑微血管内皮细胞(BMECs)缺氧/复氧损伤的保护作用及血脑屏障通透性的影响。方法:体外培养大鼠原代BMECs,缺氧/复氧法模拟脑缺血再灌注损伤。免疫组化检测内皮屏障抗原(EBA)蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测紧密连接蛋白-5(Claudin-5)m RNA、紧密连接蛋白(ZO-1)m RNA的表达。结果:免疫组化示,与正常细胞组比较,模型组EBA蛋白表达明显下降(P<0.05);与模型组比较,脑通汤大、中剂量含药血清组EBA蛋白表达显著升高(P<0.05);但正常血清组与模型组比较差异无显著性(P>0.05)。实时荧光定量PCR法示,与正常细胞组比较,模型组Claudin-5、ZO-1 m RNA的表达明显下降(P<0.05);与模型组比较,脑通汤不同剂量含药血清组干预后,Claudin-5、ZO-1 m RNA的表达量明显上调,其中脑通汤大剂量含药血清组显著上调(P<0.05)。结论:脑通汤可以保护脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤,其保护机制可能与其上调EBA蛋白及Claudin-5、ZO-1基因的表达密切相关。

脑通汤含药血清对缺氧/复氧大鼠海马神经元抗氧化应激相关指标的影响

目的探讨脑通汤通过海马神经元抗氧化应激治疗血管性痴呆(VD)的机制。方法培养大鼠原代海马神经元及鉴定,取培养9 d的神经元,随机分为正常细胞组、缺氧/复氧模型组、正常血清组、脑通汤大、中、小剂量含药血清组。除正常细胞组以外,各组均置入(95%N2+5%CO2)混合气体的三气培养箱缺氧24 h再复氧2 h造模。采用MTT法检测缺氧24 h和复氧2 h时间点海马神经元活性并计算细胞存活率;实时荧光定量PCR法检测海马神经元核因子-E2-相关因子(Nrf)2、血红素氧合酶亚型(HO)-1、醌氧化还原酶(NQO)1 mRNA的表达。结果 MTT显示:缺氧24 h:模型组的海马神经元活性及存活率较正常细胞组明显下降(P<0.05),与正常血清组及脑通汤不同剂量含药血清组比较无明显差异(P>0.05)。复氧2 h:脑通汤不同剂量含药血清组均较模型组明显升高(P<0.05),正常血清组较模型组无明显差异(P>0.05)。实时荧光定量PCR结果显示:脑通汤含药血清能够促进缺氧/复氧海马神经元抗氧化应激相关基因Nrf2、HO-1、NQO1的表达(P<0.05),并且脑通汤含药血清大剂量组与中剂量组的上述3个基因水平明显高于缺氧/复氧模型组(P<0.01)。结论脑通汤可通过上调抗氧化相关基因Nrf2、HO-1、NQO1的表达,减轻海马神经元缺氧/复氧损伤的氧化应激反应,从而保护大鼠海马神经元缺氧/复氧损伤。

脑通汤对缺氧-复氧大鼠海马神经元BDNF mRNA表达的影响

目的:探讨脑通汤对缺氧-复氧大鼠海马神经元脑源性神经营养因子基因(BDNF mRNA)表达的影响。方法:将体外培养大鼠海马神经元分为正常细胞组、缺氧-复氧模型组、正常血清组和脑通汤大、中、小剂量含药血清组,实时荧光定量PCR法检测脑通汤干预缺氧24 h复氧2 h后海马神经元BDNF mRNA的表达。结果:实时荧光定量PCR结果显示,与正常海马细胞组比较,缺氧-复氧模型组海马BDNF mRNA的相对表达量明显下降(P<0.05);与缺氧-复氧模型组海马细胞相比,脑通汤大、中、小剂量含药血清组海马细胞中BDNF mRNA的相对表达量明显增高(P<0.05),其中脑通汤大、中剂量含药血清组升高更明显(P<0.05);但正常血清组与模型组海马细胞比较BDNF mRNA的表达趋势差异无统计学意义(P>0.05)。结论:脑通汤可以上调缺氧-复氧后海马神经元BDNF mRNA的表达。

脑通汤对缺氧-复氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨脑通汤对缺氧-复氧损伤脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用及机制。方法:将大鼠原代BMECs培养传代至第二代,分为对照组、正常血清组、缺氧-复氧模型组、大、中、小剂量脑通汤含药血清组,后5组细胞均放入三气培养箱中持续通入95%N2和5%CO2混合气体缺氧24 h再复氧2 h制作脑缺血再灌注细胞模型;采用MTT法检测缺氧24 h和复氧2 h时BMECs的活性并计算细胞存活率,实时荧光定量PCR法检测BMECs中HIF-1α、VEGF、MMP-9 mRNA的表达。结果:缺氧24 h时,模型组的BMECs的活性及存活率较对照组明显下降(P<0.05),与正常血清组及各剂量含药血清组比较差异无统计学意义(P>0.05);复氧2 h时各剂量含药血清组BMECs的活性及存活率均较模型组明显升高(P<0.05),正常血清组与模型组差异无统计学意义(P>0.05);模型组HIF-1α、VEGF、MMP-9 mRNA的表达量均升高(P<0.05),与模型组比较,各剂量含药血清组的HIF-1α、VEGF mRNA的表达量明显升高,MMP-9 mRNA的表达量明显下降,脑通汤大、中剂量组变化更显著(P<0.01);正常血清组与模型组比较上述3种mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:脑通汤可以保护缺氧-复氧损伤的BMECs,其机制可能与其能上调HIF-1α、VEGF mRNA表达以及下调MMP-9mRNA表达有关。