一株源自传统大豆发酵食品中纳豆菌株的分离鉴定与分析

从我国传统大豆发酵食品中分离获得多株菌株,用划线纯培养法对其中1株纳豆激酶活性较高的菌株SD1进行生理生化和16S rDNA分析,并分析其纳豆激酶基因,推动新型纳豆菌开发。结果表明,菌落呈现白色,表面干燥,边缘有褶皱,中心无突起,整体平滑,呈现出芽胞杆菌的菌落特征。提取菌株SD1的基因组DNA作为模板,扩增其16S rDNA分子序列,利用凝胶电泳进行检验、测序。对获得的序列进行BLAST分析显示,SD1菌株是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),采用设计引物,可在该菌中扩增出特异性的纳豆激酶目的条带,结果符合预期。将扩增条带寄送测序,获得序列长度为1174 bp,将对应的氨基酸序列在SWISS网站上在线分析其三维结构;在预测三维结构中,含有6个α-螺旋,12个β-折叠。为新型纳豆菌的开发和利用提供基础。

固态发酵条件对纳豆激酶活性的影响及发酵条件的优化

为获得在黄豆基质上生长良好的纳豆杆菌分泌的纳豆激酶最优的发酵条件,以A和B两种不同的纳豆芽孢杆菌为发酵菌种,在固体培养基上,在优化黄豆粉碎方式、纳豆杆菌接种量和发酵时间3个单因素条件下,通过Box–Behnken实验设计,优化纳豆激酶的发酵条件。结果表明,纳豆杆菌在黄豆固体培养的最佳发酵条件为:固体培养基于121℃,30 min灭菌,1/2粒黄豆上接种11%的纳豆杆菌,发酵45 h后,纳豆激酶酶活达到1408 U/g,较未优化之前酶活提高了668 U/g,说明通过优化发酵条件,可以提高纳豆激酶酶活。

豆渣固体发酵产纳豆激酶的工艺优化及其部分酶学性质研究

研究纳豆菌固体发酵产纳豆激酶的工艺及其部分酶学性质。采用单因素和正交试验,对以豆渣为原料纳豆菌固体发酵生产纳豆激酶的工艺条件进行优化,并利用最佳发酵工艺制备纳豆激酶粗品,对纳豆激酶的部分性质进行研究。结果表明固体发酵培养基最佳配比:豆渣:麸皮=5:2,初始含水量65%,接种量为 10%,初始 pH为 8.0,培养温度 30℃。采用最适培养基和优化工艺,在250 ml三角瓶中进行验证实验,纳豆激酶的酶的产率可达到 1577U·.g- 1。酶学性质研究表明,最适反应温度为60℃,37℃以下稳定,最适反应pH为8.0,在 pH7-9 溶液中基本稳定。体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。

固态发酵产纳豆激酶的工艺优化

目的研究纳豆菌的固体发酵。方法采用单因素和正交试验 ,对以豆渣为原料纳豆菌固体发酵生产纳豆激酶的工艺条件进行了优化。结果固体发酵最佳条件为培养基配比豆渣∶麸皮 =5∶2 ,初始含水量 6 5 % (w) ,接种量 10 % (φ) ,初始pH 8 0 ,培养温度 35℃ ;采用最适培养基和优化工艺 ,在 2 5 0mL三角瓶中进行验证实验 ,纳豆激酶的酶活可达到 15 77U·g-1。

发酵法制备蛤蜊ACE抑制肽的菌种筛选

为筛选适用于发酵蛤蜊制备降血压活性多肽的纳豆芽孢杆菌,本试验从7种日本纳豆中初筛6株具有较高蛋白酶活性的纳豆芽孢杆菌株用于发酵蛤蜊,以体外血管紧张素转化酶(ACE)抑制率及多肽含量为评价指标筛选目的菌株。结果表明,共筛选出3株目的菌株(GL-5、GL^(-1)2和GL-25),其发酵产物对ACE抑制率分别为71.55%、78.31%、75.08%,多肽含量分别可达8.12、9.62、8.79mg·m L^(-1)。其中,GL^(-1)2发酵产物经消化酶水解后仍保持68.31%的ACE抑制率,表明其具有较强的抗消化能力。本研究结果为蛤蜊高值化利用开发具有降血压作用的功能食品提供了一定的理论依据。

折多山纳豆生产菌株的分离与筛选

从四川康定附近著名的高海拔大雪山、生态环境极为特殊的折多山山顶分离到 2株性能各异的枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)Z2 1和Z31。Z2 1具有枯草芽孢杆菌的典型性状 ,而Z31却与枯草芽孢杆菌的典型性状有明显差异 :不易生芽孢 ,菌落浅黄半透明且不易起皱。发酵试验表明 ,Z31是 1株优良的纳豆生产菌株 ,并可用于浓味纳豆生产。

纳豆芽孢杆菌及其在食品生产中的应用研究进展

纳豆芽孢杆菌是日本传统发酵食品纳豆的生产菌种,它不仅能分解蛋白质、碳水化合物、脂肪等大分子物质,使发酵产品中富含氨基酸、有机酸、寡聚糖等多种易被人体吸收的营养因子,而且能够产生纳豆激酶、杆菌肽、2,6-吡啶二羧酸和γ-多聚谷氨酸等多种生理活性物质,具有溶血栓、降血压、抑菌、抗氧化等保健功能。纳豆作为健康食品在日本已经食用了两千多年,纳豆芽孢杆菌是对人体安全、无病原性的功能性微生物。本文旨在概述纳豆芽孢杆菌的特点、功能成分以及应用研究进展,为人们进行功能性食品开发研究提供参考。

纳豆菌特性的研究

筛选具有强溶栓活性等多种生物学功能的纳豆菌,并对其形态、生长特性等进行研究。分离出单菌落,进行菌种鉴定,并在不同条件下用测菌悬液吸光度的方法研究其生长特性。经菌落形态、菌体形态以及生理生化特性鉴定确定为枯草杆菌。该菌种在种子培养基中生长的最适pH值为6.0～8.0,生长温度为30～45℃,耐盐性较高,在含7%以下NaCl的盐溶液中均能生长。纳豆菌的生长条件适宜于下一步产纳豆激酶的研究。

产溶栓酶纳豆菌的筛选及特性的研究

本文主要阐述了产溶栓酶纳豆菌的筛选、鉴定及最适固态发酵条件的初步研究。采用纤维蛋白平板法在经初筛获得 1 5株产溶栓酶菌株基础上 ,经复筛确定一产酶活力最高菌株 -B .N .1 0 ,并对该菌株部分生物学特性进行了研究 ,以B .N .1 0菌株进行固态发酵 ,其产酶最适温度、时间分别为 30℃和 2

双菌株混合发酵纳豆的条件优化

为降低纳豆氨腥味,提高纳豆激酶活力,从工艺条件入手,以纳豆感官、挥发性盐基氮含量和纳豆激酶活力作为评判标准,首先采用单因素试验探索了沼泽红假单胞菌与纳豆芽孢杆菌的比例、发酵温度、发酵时间3个单因素的最佳条件,然后通过正交试验探索了这3个因素的最佳联合条件。结果表明:最佳联合条件为沼泽红假单胞菌与纳豆芽孢杆菌比例1∶50,发酵温度35℃,发酵时间22h,在此发酵条件下,纳豆口感好,氨腥味明显降低,纳豆激酶活力增大显著,可达8432.003U·g^(-1),与纳豆芽孢杆菌单独发酵纳豆时相比提高53.74%,氨含量降低79.81%。纳豆芽孢杆菌与沼泽红假单胞菌混合发酵在保持纳豆原有的保健功效外,还丰富了发酵产生的蛋白酶系,提高了纳豆的营养价值,并解决了纳豆氨腥味浓郁的问题。

日本纳豆中β-葡萄糖苷酶高产菌的筛选及产酶条件研究

目的:为大豆异黄酮的酶法制备筛选新的β-葡萄糖苷酶高产菌。方法:应用微生物研究常规方法在日本纳豆中筛选出一株高产β-葡萄糖苷酶的菌株,并对其的产酶条件进行了研究。结果:该菌种经菌落形态、革兰氏染色、生化试验以及16s rRNA测序鉴定为枯草芽孢杆菌,其最适发酵条件为:2%的葡萄糖;2%的大豆蛋白胨;有Ca十、Mg十存在;pH在7.0至7.5之间;温度35～37℃,往复式摇床培养48h。在此条件下,其最高酶活可达158IU/mL。结论:随着大豆异黄酮研究工作的不断深入,大豆异黄酮将显现出越来越多的研究空间和应用价值。

纳豆激酶液体深层发酵技术的研究

本文研究了纳豆菌株ZN-4(Bacillus natto)的液体深层发酵条件及其对纳豆激酶活力的影响,结果表明:纳豆菌株ZN-4液体深层发酵的最佳培养基配方为:葡萄糖2%,大豆蛋白胨1%,Na2HPO40.6%,NaH2PO40.1%,MgSO40.05%,CaCl20.02%;最佳培养基起始pH7.0,接种量为3%,最适发酵温度为35℃。在此条件下,摇瓶、50L罐和500L罐发酵酶活最高分别达到1903U/mL、2210U/mL和1934U/mL。

响应面法优化纳豆混合发酵工艺的研究

为了改善纳豆的风味和口感,提高其可食用性,通过优化纳豆芽孢杆菌与酿酒酵母混合发酵工艺,降低纳豆的氨腥味;在此基础上,利用单因素试验和响应面法对纳豆固态发酵条件进行优化。确定纳豆固态发酵的最优条件为:混合菌种比例为3∶1,大豆含水量为60%,大豆的铺层厚度为3 cm,高温蒸煮30 min,接种量6%,发酵温度35℃,发酵时间28 h,后熟1 d,此条件下,挥发性盐基氮含量降低了40.1%,纳豆激酶活力提高了39.1%,纳豆的风味和口感均得到提升,更适合我国居民食用。

ARTP诱变选育γ-聚谷氨酸高产菌株快速筛选方法的建立

γ-聚谷氨酸是一种由微生物发酵产生的具有较强保健功能的生物高分子,在食品、医药、化妆品等行业具有广泛的应用。但因筛选方法效率低下,导致其菌株选育效率难以提高。研究筛选出一株高产γ-PGA(γ-聚谷氨酸)菌株并对其进行形态、生化与分子鉴定发现,该菌株为纳豆枯草芽孢杆菌。根据菌株的产物特征,系统分析了酪蛋白板初筛、多孔板复筛和摇瓶复筛,结果发现三者筛选结果基本一致,且多孔板复筛与酪蛋白平板形成的纳豆菌的圈径比具有线性关联。在此基础上,应用ARTP辐照纳豆菌群,并仅用酪蛋白平板法,快速筛选出一株γ-PGA高产菌株,产量较出发菌株提升了22%,且遗传稳定性良好,表明酪蛋白平板透明圈快筛方法有效,大幅压缩了筛选的时间,显著提升了菌株诱变选育的效率。

产纳豆激酶菌株液体及固体发酵工艺初步研究

对纳豆菌株ZN-4(Bacillus natto)的液体深层发酵和固体浅盘发酵两种发酵工艺分别进行了初步研究,比较了两种工艺对该菌株产纳豆激酶的影响。结果表明,纳豆菌株ZN-4液体深层发酵的最佳培养基配方为:2%的葡萄糖,1%的大豆蛋白胨,Na2HPO40.6%,NaH2PO40.1%,MgSO40.05%,CaCl20.02%;最佳培养基起始pH为7.0,最佳接种量为3%,最适发酵温度为35℃,最佳发酵时间为56h,在此条件下,摇瓶发酵酶活最高可达到1903U/mL;以无机盐溶液浸泡过夜的优质东北大豆为发酵基料的固体浅盘发酵中,初步研究了不同接种量、发酵温度和发酵时间对该菌株产纳豆激酶的影响,结果表明,纳豆菌株ZN-4固体浅盘发酵的最佳接种量为10%,最适发酵温度为37℃,最佳发酵时间为48h,在此条件下,固体发酵酶活最高可达到2200U/g。

扇贝裙边发酵制备ACE抑制肽的菌种筛选与鉴定

为筛选出适用于发酵扇贝裙边制备降血压活性多肽的纳豆芽孢杆菌,以发酵物中多肽含量及其对血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为指标,从7种纳豆产品中筛选出7株具有较高蛋白酶活性的纳豆菌用于发酵扇贝裙边。结果表明,菌株BN-30发酵扇贝裙边的多肽含量高达221 mg·g-1(干发酵物),对ACE抑制率达77.11%。经16S r DNA序列分析鉴定,确定菌株BN-30为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌种纳豆亚种。本研究结果为纳豆菌发酵海洋贝类制备ACE抑制肽的研究提供了一定的理论依据。

高产维生素K2菌株的选育及发酵条件优化

为了提升纳豆芽孢杆菌发酵过程中维生素K_2(VK_2)的产量,以纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)SD-3为出发菌株,采用化学和物理的诱变方式,构建高产VK_2的营养缺陷型菌株。首先对纳豆芽孢杆菌SD-3进行硫酸二乙酯(DES)诱变和紫外诱变,以SD-3的致死率为诱变标准做单因素试验得到诱变条件。然后多次连续筛选并检测菌体发酵液中VK_2的含量,最后通过响应面分析法对发酵条件进行优化。实验结果获得1株具有分枝酸-Trp/Phe/Tyr代谢途径,Phe-和Trp-合成缺陷的双重营养缺陷型VK_2高产菌株PT-6;其VK_2的平均产量达到40.23 mg/L,得到诱变条件为:紫外照射距离为25 cm,照射时间为50 s,2%DES,反应60 min;最佳发酵条件为:装液量64 mL,接种量3%,温度38℃,VK_2含量最终达到51.23 mg/L。VK_2的最终产量相较于初始菌株SD-3提高了134.35%。

纳豆风味改良的研究进展

纳豆是一种用豆类发酵制成的具有天然溶栓效果的传统养生食品,发酵会产生一股特殊的氨味导致其难以迎合国人口味,阻碍了其深入推广。基于此,本文综述了近年来我国相关学者对改良纳豆风味所做出的改进措施及其研究成果。