一种有效提高纳豆激酶表达量的方法

为提高纳豆激酶在大肠杆菌中的表达量 ,在不改变蛋白质序列的前提下 ,对纳豆激酶氨基端编码前 2 0个氨基酸的序列进行改造 ,以降低此区域的GC含量及稀有密码子数量 ,其中有 3个位点直接采用T ,另有 4个位点采取不确定突变的方式 ,产生 1 6种组合 ,由此而得 1 6条序列 ,利用生物信息软件DNASISv2 5对这些序列的二级结构进行模拟 ,取得自由能绝对值最低的 6条序列设计引物 ,克隆至表达载体pET 3c,导入大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 ,其中有 3株菌形成明显高效表达。

使用一种新策略在大肠杆菌中高效表达hbFGF(英文)

翻译起始区 (TIR)的二级结构是影响翻译效率的决定性因素 ,同时密码子的偏好性问题也是个至关重要的方面。基于以上两点考虑 ,对hbFGF 5’末端 35个碱基进行了改造 ,对其中 4个位点进行了定点突变 ,另有 4个位点进行了随机点突变。这些突变都可能造成TIR二级结构变化。这 4个随机突变共有 32种组合 ,使用RNA结构预测软件DNASISv2 .5对这 32种序列分别模拟其二级结构且计算其自由能 ,并选取了 10条自由能最高的序列。根据这10条序列 ,分别设计引物引入突变 ,克隆至表达载体pET 3c上 ,然后转化宿主菌E .coli,通过诱导表达纯化及生物测活等常规实验方法 ,最后确定有两株为高表达菌株 ,从某种程度上证明了用计算机辅助设计定点突变的方法来优化外源基因在E .coli中的表达是有效且很有潜力的。