自然杀伤细胞家族2成员D受体-配体轴在血液瘤中的作用研究进展

自然杀伤细胞家族2成员D(NKG2D)受体通过表达在自然杀伤(NK)细胞和细胞毒性T淋巴(CTLs)细胞上激活这些免疫细胞对抗肿瘤。肿瘤细胞通过降低自然杀伤细胞家族2成员D配体(NKG2DLs)的表达来逃避免疫系统的监视,从而促进肿瘤的免疫逃逸。最新的研究揭示了NKG2D受体-配体轴在血液瘤的发展、免疫监视和治疗中的关键作用,尤其是在阐明免疫逃逸机制和开发新的治疗策略方面显示出巨大潜力。现从NKG2D受体-配体轴在血液瘤发病机制、免疫监测及治疗中的作用进行阐述,在加深对血液瘤病理机制理解的同时,为提升治疗效果开辟了新的策略。

厄洛替尼作用后表皮生长因子受体突变的人肺腺癌HCC827细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞的杀伤敏感性

目的观察表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼及EGFR下游主要分子对人肺腺癌HCC827细胞表面NKG2D配体表达的影响,探讨厄洛替尼作用于肺腺癌HCC827细胞后,细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞对HCC827细胞杀伤活性的变化。方法 HCC827细胞分为空白对照组及厄洛替尼5、10μmol·L-1组,应用流式细胞仪检测细胞表面NKG2D配体主要组织相容性复合体I类链相关蛋白(MIC)A、B及UL16结合蛋白(ULBP)1、2、3的表达。HCC827细胞培养24 h后,分别以EGFR下游分子磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂LY294002、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580、信号传导及转录激活因子3抑制剂STAT21、蛋白激酶C抑制剂Rottlerin进行作用,应用流式细胞仪分析HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3的表达,并与空白对照组进行比较。乳酸脱氢酶释放法检测CIK细胞对空白对照组和厄洛替尼组HCC827细胞的杀伤活性。结果与空白对照组比较,厄洛替尼5、10μmol·L-1组HCC827细胞表面NKG2D配体MICB、ULBP1表达显著增高(P<0.05),MICA、ULBP2、ULBP3表达差异无统计学意义(P>0.05);厄洛替尼5μmol·L-1组与10μmol·L-1组比较,HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,SB203580组的HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达差异无统计学意义(P>0.05),STAT21组的HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB表达显著增高(P<0.05),LY294002组的HCC827细胞表面NKG2D配体MICA表达显著降低(P<0.05),Rottlerin组的HCC827细胞表面NKG2D配体ULBP1表达显著增高(P<0.05)。同一效靶比时,CIK细胞对厄洛替尼作用后组HCC827细胞的杀伤率均显著高于未经药物作用组(P<0.05)。效靶比20∶1时经NKG2D单抗封闭后的CIK细胞对未经药物作用组和10μmol·L-1厄洛替尼作用后组HCC827细胞的杀伤率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论厄洛替尼能增高HCC827细胞表面NKG2D配体表达,增强CIK细胞的杀伤活性。

嵌合抗原受体T细胞免疫疗法在晚期胃癌中的应用进展

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,当前我国胃癌就诊患者仍以进展期为主,晚期患者就诊时多已失去手术治疗的机会,而传统的放疗、化疗和靶向治疗效果并不理想。嵌合抗原受体(CAR)-T细胞(CAR-T)免疫疗法作为一种新的治疗手段,在血液系统恶性肿瘤中疗效显著,也为胃癌的免疫治疗开辟了新途径。然而,由于胃癌的异质性、肿瘤微环境免疫抑制、肿瘤靶抗原逃逸及脱靶毒性等问题,使得CAR-T免疫疗法在胃癌治疗中的应用存在挑战。本文综述了CAR的结构及CAR-T治疗原理、CAR-T治疗晚期胃癌的主要靶点及治疗现状,并探讨了CAR-T治疗胃癌面临的挑战,旨在为晚期胃癌的临床免疫治疗提供新思路。

NK细胞活化性受体及其配体在缺血性脑卒中模型小鼠脑组织中的表达变化

目的探讨NK细胞活化性受体(NKG2D)信号通路在缺血脑组织中的表达及其在缺血性脑损伤中的潜在作用。方法采用双侧颈总动脉持久性结扎法(2VO),构建C57BL/6雄性小鼠全脑缺血再灌注损伤模型组(2VO组)和假手术对照组(Sham组),每组12只。脑缺血20 min、再灌注72 h后,处死小鼠收集大脑,Nissl染色观察海马CA1区和纹状体CPu区神经元的损伤程度,实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹技术检测缺血脑组织中NKG2D及其配体(H60、Rae-1、Mult1)的表达,实时荧光定量PCR法检测NKG2D受体下游接头蛋白DAP10及促炎因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS)的mRNA表达。结果Nissl染色结果显示,2VO组小鼠海马CA1区和纹状体CPu区的神经元严重损伤(P<0.001);2VO组小鼠缺血脑组织中NKG2D及其3种配体的mRNA水平和蛋白表达水平均高于Sham组(P<0.05);下游接头蛋白DAP10以及促炎因子的mRNA水平均明显高于Sham组(P<0.05)。结论脑缺血介导的NKG2D受体信号通路激活可能在小鼠脑缺血损伤炎症反应中发挥重要作用。

香砂六君子汤合除痰解毒中药对Lewis肺癌小鼠免疫逃逸的影响

目的:观察香砂六君子汤合除痰解毒中药对Lewis肺癌小鼠免疫逃逸的作用及机制。方法:取60只SPF级C57BL/6J雄鼠,于右侧腋中线皮下注射Lewis细胞悬液0.2 m L(含细胞数2×10^(6)个/m L),接种7 d后,将造模成功的小鼠随机分为模型组、顺铂组、香砂六君子汤低、中、高剂量组、联合组,每组10只。香砂六君子汤低、中、高剂量组分别灌胃17.88、35.75、71.50 g·kg^(-1)香砂六君子汤加减溶液,1次/d,顺铂腹腔注射小鼠用量换算为5 mg·kg^(-1),2次/周,各组均连续干预14 d,每2 d测量肿瘤体积。治疗结束后称取各组小鼠肿瘤质量并计算抑瘤率;苏木素-伊红(HE)染色观察各组肿瘤的形态学特征;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组肿瘤组织中自然杀伤(NK)细胞杀伤受体2(NKG2D)、核糖核酸输出因子-1(RAE-1)、γ干扰素(IFN-γ)mRNA含量;免疫组化法(IHC)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组肿瘤RAE-1、NKG2D、IFN-γ表达;Western blot检测各组小鼠肿瘤中IL-6、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3及脾脏组织中NKG2D、RAE-1蛋白含量。结果:与模型组比较,香砂六君子汤各剂量组肿瘤质量均下降,差异无统计学意义;肿瘤体积均缩小(P<0.05,P<0.01);病理学形态改善;香砂六君子汤中剂量组NKG2D、RAE-1、IFN-γ mRNA含量均升高(P<0.05,P<0.01),肿瘤组织中NKG2D、RAE-1、IFN-γ蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01),p-JAK2、p-STAT3蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01);脾脏组织中,香砂六君子汤各剂量组NKG2D、RAE-1蛋白表达均显著升高(P<0.01)。与顺铂组比较,香砂六君子汤中剂量组NKG2D、RAE-1、IFN-γ mRNA含量升高,差异无统计学意义;IHC显示联合组NKG2D、IFN-γ蛋白表达显著升高(P<0.01),Western blot结果表明RAE-1、NKG2D、IFN-γ蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);联合组p-JAK2、p-STAT3蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01);脾脏组织中,香砂六君子汤中剂量组、联合组NKG2D、RAE-1蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:香砂六君子汤合除痰解毒中药能够通过上调RAE-1/NKG2D表达,促进NK细胞活化,抑制免疫逃逸,抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长,其机制可能与下调JAK2/STAT3通路相关。

温针灸对胃癌手术后化疗患者NK细胞数量及其生物学活性的影响

目的验证温针灸促进胃癌手术后化疗患者免疫功能恢复的效果。方法选取淄博市中心医院肿瘤科2016年10月至2017年10月收治的胃癌患者160例,并将患者按是否接受温针灸分为实验组(80例)与对照组(80例)。两组均给予5-氟尿嘧啶加顺铂化疗方案,实验组于每次化疗后第一天行温针灸治疗,穴取双侧足三里与气海穴,每日1次,连续治疗10天。观察患者外周血象变化,流式细胞术检测自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)的变化。结果实验组温针灸治疗后外周血白细胞(white blood cell,WBC)、中性粒细胞(neutrophils,N)、血小板计数(platelet,PLT)及血红蛋白(hemoglobin,Hb)与化疗前相比差异无统计学意义(P>0.05),但对照组治疗后,WBC、N、PLT、Hb的表达水平均较化疗前明显降低[(4.86±1.55)×10^(9)/L比(5.60±1.62)×10^(9)/L;(0.57±0.21)×10^(9)/L比(0.69±0.30)×10^(9)/L;(179.00±47.60)×10^(9)/L比(194.00±55.80)×10^(9)/L;(102.00±17.50)g/L比(113.00±16.90)g/L;t值分别为2.572、2.337、2.134和2.623,P值均<0.05)],差异具有统计学意义。与对照组相比,实验组温针灸治疗后NK细胞数量、NK细胞表达γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平及表达NK细胞活化型受体(natural-killer group 2,member D,NKG2D)水平皆升高[(8.40±2.29)%比(11.86±3.29)%,(9.23±2.51)%比(17.50±4.97)%,(7.50±3.59)%比(11.38±3.16)%,t值分别为2.441、2.355和2.293,P值均<0.05)],差异具有统计学意义。结论温针灸对恢复胃癌术后化疗患者骨髓抑制情况有较好的疗效,并可通过调节NK细胞活性,从而提高机体免疫功能。

生殖道感染孕产妇NK细胞活化性受体基因多态性及其妊娠结局

目的探讨自然杀伤(NK)细胞活化性受体自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)基因多态性对合并生殖道感染孕产妇妊娠结局的影响。方法选择北京朝阳医院妇产科2020年1月-2021年1月明确生殖道感染的孕产妇108例为研究对象,根据妊娠结局将孕产妇分为母体不良结局组和无不良结局组,根据出生后新生儿情况将其分为新生儿不良结局组和新生儿无不良结局组。收集所有孕产妇年龄、孕次、产次、产前体质量指数(BMI)和妊娠期糖尿病情况。提取外周血红细胞中基因组DNA,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测NKG2D基因rs1049174(G/C)位点基因分型。结果不同母体、新生儿分组的母体年龄、孕次、产次、产前BMI、妊娠期合并症及生殖道感染类型情况比较差异均无统计学意义;母体不良结局组、母体无不良结局组、新生儿不良结局组和新生儿无不良结局组NKG2D基因rs1049174(G/C)位点基因型分布实际频数和理论频数比较差异无统计学意义,均符合哈迪-温伯格平衡;母体不良结局组NKG2D基因rs1049174(G/C)位点携带CC基因型和C等位基因频率高于母体无不良结局组;新生儿不良结局组NKG2D基因rs1049174(G/C)位点携带CC基因型和C等位基因频率高于新生儿无不良结局组(P<0.05)。结论NKG2D基因rs1049174位点基因多态性显著影响合并生殖道感染孕产妇母亲和新生儿结局。