【背景和目的】植物未折叠蛋白应答(Unfolded protein response,UPR)信号通路在植物生长发育调控、逆境胁迫应答、内质网压力缓解等过程中起到重要作用,其中的bZIP60蛋白在该通路中起到关键核心作用。为了检测本氏烟UPR机制中bZIP60蛋...【背景和目的】植物未折叠蛋白应答(Unfolded protein response,UPR)信号通路在植物生长发育调控、逆境胁迫应答、内质网压力缓解等过程中起到重要作用,其中的bZIP60蛋白在该通路中起到关键核心作用。为了检测本氏烟UPR机制中bZIP60蛋白的表达,制备其抗血清用以探究其生物学功能。【方法】通过RT-PCR方法从本氏烟中克隆了bZIP60基因,然后将该基因连接至原核表达载体pET28a上,导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,经1 mM IPTG诱导表达分子量约35 kDa的融合蛋白,用Ni-NTA亲和柱纯化获得靶标蛋白。最后以纯化的bZIP60蛋白辅以佐剂皮下免疫新西兰大白兔制备抗血清。【结果】Western blot分析表明,制备的抗血清具有较好的特异性和灵敏度,可以特异性检测到由喷施DTT引起本氏烟中bZIP60蛋白的表达。【结论】本研究通过原核表达技术成功获得融合His标签的bZIP60重组蛋白并制备了相应的抗血清,为下一步深入探究病原物与植物互作中bZIP60的分子机理提供研究基础。展开更多
文摘【背景和目的】植物未折叠蛋白应答(Unfolded protein response,UPR)信号通路在植物生长发育调控、逆境胁迫应答、内质网压力缓解等过程中起到重要作用,其中的bZIP60蛋白在该通路中起到关键核心作用。为了检测本氏烟UPR机制中bZIP60蛋白的表达,制备其抗血清用以探究其生物学功能。【方法】通过RT-PCR方法从本氏烟中克隆了bZIP60基因,然后将该基因连接至原核表达载体pET28a上,导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,经1 mM IPTG诱导表达分子量约35 kDa的融合蛋白,用Ni-NTA亲和柱纯化获得靶标蛋白。最后以纯化的bZIP60蛋白辅以佐剂皮下免疫新西兰大白兔制备抗血清。【结果】Western blot分析表明,制备的抗血清具有较好的特异性和灵敏度,可以特异性检测到由喷施DTT引起本氏烟中bZIP60蛋白的表达。【结论】本研究通过原核表达技术成功获得融合His标签的bZIP60重组蛋白并制备了相应的抗血清,为下一步深入探究病原物与植物互作中bZIP60的分子机理提供研究基础。
