高糖环境下Ndufa4线粒体复合体相关蛋白2(Ndufa4l2)对小鼠视网膜感光细胞661W的影响

目的探讨高糖环境下Ndufa4线粒体复合体相关蛋白2(Ndufa4l2)对视网膜感光细胞661W功能的影响及其相关机制。方法体内实验选取C57BL/6J小鼠12只,采用随机数字表法分为糖尿病组和正常组,每组各6只,糖尿病组小鼠采用腹腔注射链脲佐菌素造模,正常组小鼠腹腔注射等体积柠檬酸缓冲液。采用免疫组织化学法检测Ndufa4l2蛋白在正常组和糖尿病组小鼠视网膜中的表达情况。体外实验将661W细胞随机分组为对照组(细胞采用正常培养基培养24 h)、高糖组(细胞采用含葡萄糖浓度为50 mmol·L^(-1)高糖培养基培养24 h)、si-NC组(细胞转染si-NC无序序列后,采用正常培养基培养24 h)、si-NC+HG组(细胞转染si-NC无序序列后,采用含50 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基培养24 h)和si-Ndufa4l2+HG组(细胞转染si-Ndufa4l2特异敲低序列后,采用含50 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基培养24 h);采用qRT-PCR和Western blot检测对照组和高糖组细胞中Ndufa4l2的表达情况。CCK-8法检测si-Ndufa4l2对661W细胞活性的影响,采用活性氧(ROS)试剂盒检测si-Ndufa4l2对661W细胞中ROS水平的影响,采用乳酸检测试剂盒检测si-Ndufa4l2对661W细胞中乳酸水平的影响。结果体内实验结果表明,与正常组小鼠相比,糖尿病组小鼠视网膜中Ndufa4l2蛋白表达降低。体外实验结果显示,对照组和高糖组661W细胞中Ndufa4l2 mRNA相对表达量分别为1.001±0.069和0.356±0.071,Ndufa4l2蛋白相对表达量分别为1.000±0.078和0.795±0.070,与对照组相比,高糖组661W细胞中的Ndufa4l2 mRNA和蛋白达表水平均下降(均为P<0.05)。CCK-8法检测发现,si-Ndufa4l2+HG组661W的细胞活力低于si-NC+HG组(P<0.001)。ROS检测结果表明,si-Ndufa4l2+HG组661W细胞的荧光亮度高于si-NC+HG组。细胞上清乳酸检测结果显示,si-NC组、si-NC+HG组和si-Ndufa4l2+HG组细胞上清中乳酸含量分别为(10.470±0.140)mmol·L^(-1)、(7.480±0.270)mmol·L^(-1)和(6.080±0.240)mmol·L^(-1),si-Ndufa4l2+HG组与si-NC+HG组相比,细胞上清中乳酸含量进一步降低(P<0.001)。结论线粒体Ndufa4l2蛋白在高糖条件下低表达,Ndufa4l2水平下降会通过氧化磷酸化途径损伤细胞的代谢功能从而进一步抑制661W的细胞活力。

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基4、环氧合酶2在结直肠癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系

目的 探讨肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基4(ARPC4)、环氧合酶2(COX2)在结直肠癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法 收集96例结直肠癌患者的病历资料,所有患者均采用免疫组织化学染色法检测ARPC4、COX2表达情况,比较不同临床特征结直肠癌患者结直肠癌组织中ARPC4、COX2阳性表达率,采用回归分析法分析结直肠癌组织中ARPC4与COX2表达的相关性,比较不同ARPC4、COX2表达情况结直肠癌患者的3年生存率。结果 结直肠癌患者中ARPC4阳性表达率为61.46%(59/96),COX2阳性表达率为59.38%(57/96)。有淋巴结转移、低分化、Ⅲ~Ⅳ期结直肠癌患者结直肠癌组织中ARPC4、COX2阳性表达率均高于无淋巴结转移、中高分化、Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结直肠癌组织中ARPC4与COX2的表达呈正相关(r=0.618,P﹤0.05)。ARPC4阳性表达结直肠癌患者的3年生存率低于ARPC4阴性表达患者,COX2阳性表达结直肠癌患者的3年生存率低于COX2阴性表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论结直肠癌组织中ARPC4与COX2的表达呈正相关,其表达与结直肠癌患者的临床特征及预后有关。

结直肠癌组织中LAMβ1、ARPC4、Cx26的表达及对肿瘤侵袭、转移的影响

目的探究结直肠癌组织中层粘连蛋白β1(LAMβ1)、肌动蛋白相关蛋白2/3复合体4(ARPC4)及间隙连接蛋白26(Cx26)的表达及与肿瘤侵袭、转移的关系。方法选取2018年6月至2019年12月如皋市人民医院病理科收集的100例结直肠癌手术切除的肿瘤组织及相应的癌旁正常组织,应用实时荧光定量PCR检测肿瘤组织及癌旁正常组织LAMβ1、ARPC4、Cx26的mRNA表达;Western blot检测肿瘤组织及癌旁正常组织LAMβ1、ARPC4、Cx26蛋白表达,免疫组织化学法检测LAMβ1、ARPC4、Cx26蛋白在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达阳性率,并分析LAMβ1、ARPC4、Cx26蛋白表达与患者临床病理特征的关系。结果RT-PCR结果显示,结直肠癌组织中LAMβ1、ARPC4、Cx2的mRNA表达相较于癌旁组织上调。Western blot检测结果显示,结直肠癌组织中LAMβ1、ARPC4、Cx26蛋白表达高于癌旁组织(P<0.05)。免疫组化结果显示,LAMβ1、ARPC4、Cx26着色主要分布于肿瘤细胞的细胞膜和细胞质中。不同性别、年龄、肿瘤大小结直肠癌患者LAMβ1、ARPC4、Cx26表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同分化程度、临床分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移结直肠癌患者LAMβ1、ARPC4、Cx2表达比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌肿瘤组织中LAMβ1、ARPC4、Cx26的mRNA表达量存在正相关性(P<0.05),其蛋白表达之间同样存在正相关性(P<0.05)。结论LAMβ1、ARPC4、Cx26表达升高与结直肠癌的侵袭、转移有关。

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体4在结直肠癌组织中的表达及其对侵袭能力的影响

目的观察肌动蛋白相关蛋白2/3复合体4(ARPC4)在结直肠癌组织、癌旁组织中的表达情况,分析ARPC4蛋白的表达变化与结直肠癌患者临床病理指标及预后的关系。方法应用实时荧光定量PCR和Western blot检测肿瘤组织和癌旁组织中ARPC4的mRNA及蛋白表达情况,应用免疫组织化学检测ARPC4在110例结肠癌患者的结肠癌组织和癌旁组织中的表达情况;分析ARPC4蛋白的表达与结直肠癌患者临床病理指标及预后的关系。采用Transwell法检测结直肠癌细胞系HCT-8中ARPC4敲降后细胞侵袭能力的变化;应用Western blot研究ARPC4影响结直肠癌细胞侵袭相关蛋白,分析ARPC4影响结直肠癌细胞侵袭能力的分子机制。结果实时荧光定量PCR和Western blot的结果显示,ARPC4在结肠癌组织中表达明显高于癌旁组织(P<0.01)。免疫组织化学的结果显示,ARPC4蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织(59%vs.12%,P<0.01)。ARPC4蛋白在结直肠癌组织中的表达与肿瘤淋巴结转移、远处转移及病理分期有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,ARPC4蛋白阳性表达可明显缩短结直肠癌患者术后无瘤生存期(P=0.010)。多因素Cox回归分析结果表明,ARPC4蛋白阳性表达是结直肠癌患者预后不良的独立预测因素(P=0.035)。下调ARPC4表达能够抑制HCT-8的侵袭,Western blot结果显示在HCT-8中ARPC4敲降后,侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达受到抑制。结论 ARPC4蛋白在结直肠癌中高表达,并与结直肠癌的转移及预后相关,ARPC4可能通过MMP-2和MMP-9影响结直肠癌细胞侵袭。

LAMβ1联合ARPC4检测在结直肠癌诊断中的应用

目的探讨层粘连蛋白β1(LAMβ1)联合肌动蛋白相关蛋白2/3复合体4(ARPC4)检测在结直肠癌诊断中的应用价值。方法收集2020年3月至2021年3月江苏省如皋市人民医院收治的74例结直肠癌患者的癌组织标本和癌旁组织标本。采用实时荧光定量PCR检测癌组织及癌旁组织LAMβ1、ARPC4 mRNA表达水平;采用免疫印迹法测定癌组织及癌旁组织LAMβ1、ARPC4蛋白表达水平;采用受试者操作(ROC)曲线分析LAMβ1联合ARPC4蛋白表达水平诊断结直肠癌的价值。结果结直肠癌组织LAMβ1、ARPC4 mRNA、蛋白表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。癌组织LAMβ1、ARPC4蛋白表达水平诊断结直肠癌的最佳截断点分别为1.02、0.94;灵敏度分别为78.38%、81.08%;特异度分别为82.43%、78.37%;曲线下面积(AUC)分别为0.815、0.804;约登指数分别为0.608、0.595;两者联合的特异度、AUC和约登指数分别为98.65%、0.873和0.757。结论结直肠癌患者癌组织LAMβ1、ARPC4蛋白表达水平均异常升高,两者均可作为诊断结直肠癌的敏感指标,两者联合诊断价值更高。

ARPC4在结直肠癌组织中的表达及其对侵袭能力的影响

目的探讨肌动蛋白相关蛋白(actinrelated protein,ARP)2/3复合体4(ARPC4)在结直肠癌组织中的表达及其对侵袭能力的影响。方法选择结直肠癌患者78例,取所有患者手术切除的癌灶组织标本(病灶组)与癌旁结肠粘膜组织(癌旁组),采用免疫组化法检测ARPC4表达水平,调查患者的一般资料、病理特征并进行相关性分析。结果在78例患者中,病灶组的ARPC4表达阳性率为80.8%,显著高于癌旁组的28.2%(P<0.05)。不同肿瘤大小、临床分期、局部侵袭、淋巴结转移等患者的ARPC4表达阳性率对比差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson直线相关性分析显示:临床分期、局部侵袭、淋巴结转移与患者的ARPC4表达阳性率存在显著相关性(P<0.05)。COX回归分析显示:临床分期、淋巴结转移、ARPC4表达阳性率为导致局部侵袭的影响因素(P<0.05)。结论ARPC4在结直肠癌组织中呈现高表达状况,与患者的临床特征密切相关,且可影响结直肠癌的局部侵袭能力。