NEL样1型基因联合唑来膦酸预防股骨头坏死塌陷作用的初步观察

目的观察NEL样1型基因(NELL-1)联合唑来膦酸用于股骨头坏死治疗是否可以预防股骨头的塌陷,并促进新骨形成。方法雄性SD大鼠24只,随机分为3组:假手术组、安慰剂组和NELL-1唑来膦酸联合治疗组。假手术组为正常对照组,安慰剂组在建立股骨头坏死模型后给予生理盐水治疗,NELL-1唑来膦酸联合治疗组在建立股骨头坏死模型后给予NELL-1髋关节注射并联合唑来膦酸皮下注射治疗。术后5周处死,取术侧股骨分别行X光照相,显微CT和组织学检查。结果大体观察NELL-1唑来膦酸联合治疗组可见股骨头形态良好,安慰剂组可见股骨头轻度变扁。各组均未观察到异位成骨现象。X光照相检查NELL-1唑来膦酸联合治疗组股骨头高度与宽度比值明显高于安慰剂组(P<0.01),而与假手术组差异无统计学意义(P>0.05)。显微CT检查显示3组间股骨头的体积、股骨头内骨量、股骨头骨矿盐含量NELL-1唑来膦酸联合治疗组和假手术组相比差异无统计学意义(P>0.05),但都大于安慰剂组(P<0.01)。组织学检查显示NELL-1唑来膦酸联合治疗组股骨头内以活骨为主,与安慰剂组相比,存在活跃的成骨细胞活动而破骨细胞数则明显减小。结论 NELL-1联合唑来膦酸用于大鼠的创伤性骨坏死治疗,可以促进成骨细胞活动,抑制破骨细胞活动,保存骨量和股骨头形态,具有良好的预防股骨头坏死塌陷的作用,有望实现骨坏死病程的逆转。

Nel样1型分子对成骨细胞分化的分子调控机制

Nel样1型分子(Nell-1)是一种新的重要的生长因子,其基因主要在成骨细胞的分化和程序性死亡阶段发挥重要的作用。下面着重就nell-1基因与转化生长因子和成纤维细胞生长因子,nell-1基因在介导成骨细胞分化过程中的作用和相关分子信号途径,Nell-1蛋白对成骨细胞和成软骨细胞胞外基质蛋白的调控作用等作一综述。

Nel样1型基因对早期急性牙髓炎幼鼠牙髓损伤修复的作用及对Notch通路的影响

目的 探讨Nel样1型基因(NELL-1)对早期急性牙髓炎幼鼠牙髓损伤的修复作用及对Notch通路的影响。方法 取90只幼鼠随机分为对照组、模型组、NELL-1组、NELL-1-NC组、NELL-1-siRNA组、NELL-1-siRNA-NC组。检测各组大鼠痛行为学;RT-PCR检测各组NELL-1 mRNA表达情况;ELISA检测血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;对各组牙髓组织进行组织病理学观察;Western Blot检测牙髓组织NELL-1、Notch及Delta-1蛋白相对表达情况。结果 与模型组、NELL-1-NC组比较,NELL-1组擦面行为时间减少,血清中TNF-α、IL-1β水平、Notch、Delta-1蛋白表达降低,NELL-1 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);与模型组、NELL-1-siRNA-NC组比较,NELL-1-siRNA组擦面行为时间增加,血清中TNF-α、IL-1β水平、Notch、Delta-1蛋白表达升高,NELL-1 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。HE染色显示,与模型组比较,NELL-1组有少量炎性细胞浸润,血管轻度扩张;NELL-1-siRNA组大量炎性细胞浸润并聚集成团,血管扩张变形严重,有牙髓坏死现象。结论 过表达NELL-1可减轻早期牙髓损伤幼鼠血清炎症因子水平,改善牙髓病理变化,对牙髓具有修复作用,其机制可能与抑制Notch相关通路有关。

生理性拉应力通过Nell-1/Ihh信号通路对ATDC5软骨细胞分化的调控作用

目的:探讨生理性拉应力对软骨细胞分化的调控作用,并阐明其相关信号通路机制。方法:体外培养软骨ATDC5细胞,应用四点弯曲细胞力学加载仪对其施加生理性拉应力,首先分为对照组和拉应力组(2 000μstrain/2 h组),另分为不同力值(1 000、2 000和3 000μstrain)加力时间为2 h和力值为2 000μstrain不同加力时间(1、2和4 h)组,同时设未加力的细胞为对照组,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、Ⅹ型胶原(Col-Ⅹ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、性别决定区Y框蛋白9 (SOX9)、血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Nel样1型分子(Nell-1)、Runt相关转录因子2 (Runx2)、印度刺猬因子(Ihh)、补缀同源物1 (Ptch-1)、GLI家族锌指蛋白1 (Gli-1)和刺猬因子相互作用蛋白1 (Hhip-1) mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中Nell-1、Runx2和Ihh蛋白表达水平。ATDC5细胞分为对照组、环巴胺组、拉应力组和环巴胺+拉应力组,采用RT-qPCR法检测各组细胞中Nell-1、Ihh、Ptch-1、Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中Nell-1和Ihh蛋白表达水平。结果:与对照组比较,2 000μstrain/2 h组细胞中Col-Ⅱ、 Col-Ⅹ、 Aggrecan、 SOX9、VEGF和PCNA mRNA表达水平均明显升高(P<0.01)。在对细胞施加2 000μstrain不同加力时间(1、2和4 h)或不同力值(1 000、2 000和3 000μstrain) 2 h的拉应力后,与对照组比较,随时间的延长或力值的增加其他各组细胞中Runx2 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01),Nell-1、Ihh、 Ptch-1、 Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01),且在2 000μstrain/2 h时达到最高,随后出现回落但仍明显高于对照组(P<0.01)。Western blotting检测,各组细胞中Nell-1、Runx2和Ihh蛋白表达水平与mRNA表达水平变化趋势一致。环巴胺预处理后,与对照组比较,环巴胺组细胞中Ihh、Ptch-1、Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平均明显降低(P<0.01),拉应力组和环巴胺+拉应力组细胞中Nell-1、Ihh、Ptch-1、Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与环巴胺组比较,环巴胺+拉应力组细胞中Nell-1、Ihh、Ptch-1、Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与拉应力组比较,环巴胺+拉应力组细胞中Ihh、Ptch-1、Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。与对照组比较,环巴胺组细胞中Ihh蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Nell-1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),拉应力组和环巴胺+拉应力组细胞中Nell-1和Ihh蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与环巴胺组比较,拉应力组和环巴胺+拉应力组细胞中Nell-1和Ihh蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与拉应力组比较,环巴胺+拉应力组细胞中Nell-1和Ihh蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:在生理性拉应力刺激下,Nell-1可在上游激活Ihh信号通路,进而调控ATDC5软骨细胞的分化。

RELM-β基因敲除大鼠的繁育及基因型鉴定

目的探讨抵抗素样分子β(RELM-β)基因敲除大鼠的最优繁育方式和基因型鉴定方法。方法将RELM-β^(-/-)纯合子雌性Sprague Dawley(SD)大鼠和野生型雄性Wild type(WT)SD大鼠按2∶1交配,繁育出F1杂合子大鼠,采用RELM-β^(-/-)纯合子互交、RELM-β+/-杂合子互交、纯合子及杂合子互交(正交及反交)4种方式交配,PCR扩增凝胶电泳法鉴定子代大鼠基因型,观察子代大鼠的外形,统计子代大鼠数量、体质量及纯合率。结果PCR扩增凝胶电泳法成功鉴定亲代及子代大鼠的基因型,3种基因型大鼠的外观形态无明显差异,3周至6周龄大鼠体质量无明显差异,不同交配方式子代数量无明显差异。结论合理的繁殖方法并进行正确的鉴定是获得RELM-β基因敲除SD大鼠的重要途径,PCR扩增凝胶电泳法具有快速、经济,重复性较好的优点。

鲍温样丘疹病组织中人乳头瘤病毒16型L1基因的克隆及序列分析

目的 :克隆生殖器鲍温样丘疹病 (Bowenoidpapulosisofthegenetalia)组织中人乳头瘤病毒 16型L1基因并进行序列分析 .方法 :采用PCR法从 10例生殖器鲍温样丘疹病标本中扩增获得人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )的晚期基因L1,克隆入载体 ,并测序 ,分析其序列 .结果 :与HPV16L1标准型比较 ,发现 10例L1标本的序列存在若干变异 ,并由此引起所编码的氨基酸亦发生变化 .结论 :鲍温样丘疹病组织中HPV16L1基因序列存在一定程度的变异 ,其变异的临床意义有待于进一步探讨 .

人Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体β基因(PILRβ)的克隆、表达、纯化及其多克隆抗体的制备

目的:表达和纯化人Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体蛋白PILRβ,制备并鉴定其多克隆抗体。方法:应用RT-PCR从人的外周血细胞总RNA中反转录并扩增出PILRβ基因,将其克隆到表达载体pET-32a,在大肠杆菌中IPTG诱导表达,经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,纯化后的蛋白多次注射免疫新西兰大白兔,获取多克隆抗血清,ELISA法检测抗体效价,Western印迹检测抗体特异性。结果:获得了较高纯度的PILRβ蛋白(Mr约为42 000)及其抗体,多抗效价达到1:10 000,且特异性较好。结论:成功克隆了PILRβ基因并表达纯化了其蛋白,获得了效价较高、特异性较强的多克隆抗体,为进一步研究PILRβ蛋白的功能和潜在的药物开发打下了基础。

Nell-1基因修饰骨髓基质细胞复合β-磷酸三钙提升兔上颌窦底的实验研究

目的:评价Nel样I型分子(Nell-1)基因修饰骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,bMSCs)复合β-磷酸三钙提升兔上颌窦底的效果。方法:抽取兔骨髓进行bMSCs培养,体外采用腺病毒载体携带Nell-1基因(AdNell-1)及绿色荧光蛋白EGFP基因(AdEGFP)转染bMSCs,GFP表达检测转染效率、Nell-1免疫细胞化学检测目的基因的表达。碱性磷酸酶(ALP)染色、半定量检测及钙结节茜素红染色检测细胞成骨分化。将基因修饰bMSCs与β-磷酸三钙颗粒复合用于兔上颌窦底提升,分别在术后2周和8周取材,HE染色,测量成骨面积,并采用SPSS11.0软件包对2组间数据进行t检验。结果:AdEGFP基因修饰组GFP表达效率可达60%～80%,Nell-1细胞化学染色显示,AdNell-1基因修饰组呈阳性表达。AdNell-1基因修饰组ALP染色及钙结节茜素红染色均高于AdEGFP基因修饰组,ALP半定量检测具有统计学差异(P<0.05)。体内实验研究中,AdNell-1基因修饰组新骨形成面积在8周时显著高于AdEGFP基因修饰组(P<0.05)。结论:采用AdNell-1基因转染兔bMSCs可促进其成骨分化,体内可促进上颌窦底提升的效果。

nell-1型基因成骨及其在骨组织工程中的应用

nel样Ⅰ型基因是一种在颅缝早闭者早闭区过度表达的新型基因,因其具有极强的诱导成骨细胞分化和促进新骨形成的生物学功能,被作为新型生长因子用于骨组织工程。本文就nel样Ⅰ型基因成骨及其在骨组织工程中的应用等研究进展作一综述。

水稻粒型基因克隆与分子育种研究进展

水稻(Oryza sativa L.)粒型包括粒长、粒宽和长宽比,既是水稻外观品质之一,又通过影响粒重而影响产量,因此改良水稻粒型具有十分重要的意义。随着功能基因组和分子标记技术的发展,越来越多的粒型基因被克隆,部分已经开始应用于育种实践。综述了水稻粒型基因的克隆、粒型基因之间的相互关系及其在分子育种中的应用。以期为水稻育种提高产量和改良品质提供理论依据。

人成牙本质细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的克隆

目的:克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因。方法:采用RT-PCR方法,从人成牙本质样细胞系中克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基的特异性基因片段,将其亚克隆入pUC18载体进行序列测定。结果:从人成牙本质样细胞系中获得900bp的特异性片段。序列分析表明,与Gen-Bank登陆的人L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列完全一致。结论:成功地从人成牙本质样细胞系中克隆到人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列。

2型糖尿病患者外周血白细胞粘附分子CD_(54)CD_(11b)、CD_(62L)表达的研究

目的探讨 2型糖尿病患者外周血白细胞粘附分子CD54、CD11b、CD62L表达及其与微血管损害的关系。方法用流式细胞仪测定有、无糖尿病微血管病变的 32例 2型糖尿病患者外周血淋巴细胞、单核和多形核细胞粘附分子CD54、CD11b、CD62L表达的百分率 ,同时测定血糖和糖化血红蛋白 ,并分别与 2 0例正常健康人比较。结果与正常组比较 ,无论有无微血管病变的 2型糖尿病患者其外周血白细胞表面上述三种粘附分子表达百分率均有不同程度的增加 ,微血管病变组表达率高于无微血管病变组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。糖尿病患者血糖和糖化血红蛋白的含量明显增加 ,有微血管病变组高于无微血管病变组 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论 2型糖尿病患者白细胞表面CD54、CD11b、CD62L表达阳性率与高血糖 ,糖化血红蛋白浓度和微血管病变的发生有密切关系。

CHD1L在恶性肿瘤中的作用与机制研究进展

恶性肿瘤的发生发展与细胞增殖、凋亡或其他生物学过程中关键的癌症相关基因密切相关。染色质结构域解旋酶/ATP酶DNA结合蛋白1样基因(CHD1L)是一种新发现位于Chr1q21的致癌基因。CHD1L在许多人类正常组织中均有表达,且在肝癌、结直肠癌、胃癌、卵巢癌和神经胶质瘤等多种人类恶性肿瘤组织中高表达。CHD1L作为恶性肿瘤发生发展的促进因子,影响肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡和自噬等生物学过程,且其高表达与恶性肿瘤的不良预后密切相关。CHD1L在转录调控、维持染色体完整性和DNA修复中也发挥着重要作用。本文就CHD1L在恶性肿瘤中的作用及其机制研究进展进行综述,以期为CHD1L成为恶性肿瘤潜在标志物和临床治疗的新靶点提供参考。

骨质疏松分子生物学研究专家共识

骨质疏松分子生物学研究在骨代谢分子信号通路、骨质疏松易感基因、骨质疏松相关蛋白、骨质疏松靶向治疗等方向取得了很大进展。核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素(RANK/RANKL/OPG)信号通路、核因子κB受体活化因子(NF-κB)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)信号通路、钙离子(Ca^(2+))信号通路、酪氨酸激酶、蛋白激酶B(Src、Akt)信号通路、蛋白激酶C(PKC)信号通路等骨代谢重要通路,维生素D受体(VDR)基因、低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)基因、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因、雌激素受体(ER)基因等易感基因,载脂蛋白E(Apo E)、Klotho蛋白(Klotho)、骨形态发生蛋白(BMP)、骨涎蛋白(BSP)等相关蛋白,以直接或间接的方式参与调控骨代谢,作用重叠相互联系,互为结果,已在本专业领域达成共识。

籼型杂交水稻恢复系粒长及粒重的分子改良

【目的】通过分子标记辅助选择培育长粒型新恢复系,为杂交水稻长粒型育种提供新的种质资源。【方法】利用常规回交育种、分子标记辅助选择和抗病鉴定,结合粒型和低垩白等形态性状选择,将长粒型基因gs3导入短粒型优良恢复系中间材料R33947中。【结果】培育出了4个新的长粒、低垩白和产量较高的改良系。他们的基因位点没有差异,但粒形和产量性状有明显不同。其中,RGL3株系配合力较好,后定名为成恢637。利用该恢复系与优质香稻不育系川康606A配制的杂交水稻新组合"川康优637"在长江上游区域试验中比对照F优498增产4.7%,米质优良。【结论】通过常规的回交选育、分子标记辅助选择和抗病鉴定,结合优良形态选择的方法,筛选获得4份gs3纯合的优质抗病改良系,为选育新的优质水稻恢复系提供种质资源。育成优良恢复系成恢637,其与优质香稻不育系川康606A配制的新组合"川康优637"具有品质优良、丰产性好、抗病性强等特点。

EZH2与乳腺癌分子亚型的关系及对临床病理的意义

目的:研究EZH2与乳腺癌分子亚型和临床病理参数的关系,探讨EZH2对评价乳腺癌分子亚型预后的价值。方法:回顾分析80例临床病理资料及术后随访资料均完整的乳腺癌患者,通过免疫组织化学Max Vision快捷法,检测ER、PR、HER-2、CK5/6、CK14、EGFR、EZH2蛋白的表达,分析EZH2阳性表达与乳腺癌分子亚型及临床病理参数的关系,观察EZH2对患者预后的影响。结果:80例乳腺癌病例中,Luminal型49例,HER-2(+)型8例,Basal-like型20例,Normal breast-like型3例;各分子亚型只与患者绝经与否具有相关性;Luminal型乳腺癌总生存率最高,Basal-like型最低(P<0.05)。EZH2阳性表达率45.00%,其阳性表达与患者同侧腋窝淋巴结转移与否和肿瘤组织学分级及术后临床分期相关(P<0.05);EZH2在Luminal型、HER-2(+)型、Basal-like型乳腺癌阳性表达率分别为34.60%、50.00%和70.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EZH2阳性表达提示患者预后不良;EZH2有望成为Basal-like型乳腺癌的特异性标记物之一。

骨生长因子NELL-1的研究进展

Nel样分子I型(Nel-like type I molecular,NELL-1)是一种与人颅缝早闭症相关的外分泌型蛋白,近年来一系列体外及体内研究表明NELL-1更是一种非常有效的骨生长因子。与其他骨生长因子相比,NELL-1的生物学效应相对单一,其骨诱导活性也更具有特异性,同时它无法单独诱导异位骨组织形成,因此NELL-1可具有更高的生物安全性和精准性。NELL-1作为一种全新的生长因子在治疗各类骨组织缺损与骨再生方面具有广阔而良好的应用前景。本文就目前NELL-1在骨再生领域的应用及其作用机制研究的进展做一综述。

血管周上皮样细胞肿瘤的分子遗传学

血管周上皮样细胞肿瘤(perivascular epithelioid cell tumours,PEComas)是由组织学和免疫组织化学上有独特表现的血管周上皮样细胞构成的间叶性肿瘤,PEComas家族包括肾血管平滑肌脂肪瘤、肺透明细胞"糖"瘤、淋巴管肌瘤病、淋巴管平滑肌瘤、镰状韧带透明细胞肌黑色素细胞性肿瘤和其他部位罕见的透明细胞肿瘤。最新研究表明结节性硬化复合物蛋白1/结节性硬化复合物蛋白2(tuberous sclerosis complex-1/tuberous sclerosis com-plex-2,TSC1/TSC2)和结合于免疫球蛋白重链(基因)增强子的转录因子3(transcription factor binding to immuno-globuim heavy chain enhancer3,TFE3)等在PEComas分子遗传学上起到重要作用,而基因分型不同,预后也存在差别。由于TSC1/TSC2基因异常导致了其转录产物错构瘤蛋白和马铃薯蛋白功能的异常,从而影响了正常的细胞生成、分化和移行过程,进而形成肿瘤。TFE3基因融合与PEComas发病机制的关系,可能与其他TFE3基因融合的相关肿瘤相似。本文对TSC1/TSC2和TFE3在PEComas分子遗传学中的关联性进行综述。

2型糖尿病的分子遗传学新进展

2型糖尿病是一种多基因遗传的复杂性疾病 ,其确切的分子遗传学机制目前仍不清楚 ,对与