莲胚愈伤组织诱导及植株再生的研究

关于莲胚组织培养国内外有过研究，但迄今利用组织培养技术从莲胚诱导愈伤组织形成再生植株的成功例子尚未见有报道。

莲子心多糖的提取、分离和抗氧化活性研究

干燥的莲子心经机械粉碎、乙醇脱脂、沸水提取、乙醇沉淀及中性酶和Sevag法除蛋白得其粗多糖,经DE-AE-Cellulose-32阴离子交换和SephacrylTMS-200凝胶过滤层析得组份ELPS-Ⅰ和混合物Ⅱ,Ⅱ再经过DEAE-Cel-lulose-32柱层析得组份ELPS-Ⅱ.GC-MS法测定粗多糖、ELPS-Ⅰ和ELPS-Ⅱ的中性糖组成.凝胶过滤色谱(GPC)法测得ELPS-Ⅰ和ELPS-Ⅱ的重均分子量分别为4.97×104Da和2.96×106Da.β-胡萝卜素漂白实验结果显示:莲子心粗多糖具有显著的抗氧化活性(维生素C作为阳性对照).

气质联用法测定不同产地莲子心中的有机氯农药残留

目的 建立气相色谱-质谱（GC-MS）联用法检测莲子心中有机氯农药残留。方法 样品经C18小柱净化或硫酸磺化处理后用GC-MS分析。采用选择离子监测模式（SIM）,以保留时间和特征离子定性,峰面积定量。色谱柱为HP-5MS石英毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）,程序升温（初始柱温为80℃,保持1 min,以30℃.min-1升到175℃,保持4 min;以6℃min-1至200℃,保持5 min;再以30℃min-1升到300℃,保持3 min）,分流比为1：1。结果 23种农药在相应范围内线性关性良好（r2均〉0.99）,平均回收率在87.9%～105.3%,RSD均〈6%（n=5）。采用该法对5个不同产地莲子心中农药残留进行分析,未检测到农药残留。结论 该方法简单灵敏、结果准确可靠,可应用于莲子心中农药残留的分析。

莲心总碱对脂多糖/D-氨基半乳糖诱导急性肝衰竭小鼠肝脏炎症反应的缓解作用

目的:观察莲心总碱(total alkaloids from the seed embryo of Nelumbo nucifera,TAENN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/D-氨基半乳糖(D-galactosamine,Gal N)诱导急性肝衰竭小鼠肝脏炎症反应的影响。方法:将昆明小鼠40只随机分为4组(正常对照组、模型组和TAENN高、低剂量组),每组10只。TAENN高、低剂量组的给药剂量分别为100、30 mg/kg,给药途径为灌胃,每日给药1次。正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水。给药结束后,模型组和TAENN高、低剂量组小鼠腹腔注射LPS/Gal N建立小鼠急性肝衰竭模型。用酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和前列腺素E2(prostaglandine E2,PGE2)水平。用Griess法检测肝组织中一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量。用实时聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测小鼠肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的mRNA的表达水平。用免疫印迹法检测小鼠肝组织中iNOS、COX-2蛋白表达和核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)p65亚基磷酸化水平。结果:与模型组相比,TAENN组小鼠血清与肝脏中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显降低(P<0.01)。肝脏中炎症介质NO和PGE2水平亦有极显著下降(P<0.01)。经TAENN处理后,模型小鼠肝脏中TNF-α、IL-1β、IL-6、i NOS、COX-2等的m RNA表达水平明显下降(P<0.01)。此外,iNOS和COX-2的蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p65蛋白本身的表达水平不变,但其536位丝氨酸的磷酸化水平亦极显著下降(P<0.01)。结论:TAENN对LPS/Gal N诱导小鼠急性肝衰竭相关的炎症反应具有明显的保护作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路并减少炎症因子和炎症介质相关基因的表达有关。

莲心总碱的提取分离及其抗氧化性研究

采用醇提法从莲子心中提取莲心总碱,考察乙醇浓度、体积和提取时间对回流提取率的影响,并经正交实验确定了该法提取的最佳工艺条件:采用90%乙醇回流提取两次,固液比1∶10,提取时间分别为60、45min,得到总生物碱量为87.28mg/g。对获得的莲心总碱以微分脉冲伏安法测试其氧化还原性能,研究它对羟基自由基的清除能力:在0～0.5V区间内,峰电位Ep在0.27V有氧化和还原峰,峰电流随莲心总碱浓度的增大呈线性变化;当浓度达到1.0mg/mL时,对羟自由基(·OH)的清除率接近90%。

莲胚发育与核酸、蛋白质含量的变化

莲胚发育达到最大鲜重(开花后21d)前,胚轴和子叶的DNA,RNA都持续增长。开花13d后,蛋白、淀粉等贮藏物质显著积累,核酸增长速度加快。成熟胚轴的DNA和RNA含量很高,而子叶中积累大量的淀粉、可溶性糖和蛋白质。发育前期胚乳的生长速度较快,开花后16d左右鲜重和物质积累达到高峰。胚生长后期胚乳逐渐败育,贮藏物质和结构物质都减少,膨大的子叶逐步取代了胚乳的地位。 莲胚生物大分子物质含量的模式属于双子叶植物类型。讨论了莲胚细胞多倍化的问题。

莲心碱提取分离的研究进展

莲心碱是莲子心中一种主要的双苄基异喹啉类生物碱,具有抗心律失常、降压等心血管系统活性。概述了莲心碱的性质、结构鉴定方法,介绍了莲心碱检测及提取分离方法的研究进展情况。

莲种胚发育过程中胚胎晚期丰度蛋白基因表达量与种子含水量相关性分析

通过莲胚形态观察、生理指标测定、蛋白质谱鉴定与基因表达量分析,筛选出莲胚脱水成熟过程中显著富集的LEA蛋白(late embriogenesis abundant protein),并分析其基因表达量与含水量的相关性。结果表明,莲胚发育成熟共需约30 d,形态发育15~18 d,随后进入脱水成熟阶段。在种胚脱水阶段种胚含水量由80%下降到6.7%,细胞内蛋白含量上升2.75倍。对不同脱水阶段莲胚进行蛋白单向电泳,筛选出7条显著富集的蛋白条带,其中包含7种LEA家族蛋白:EMB564-like、Dehydrin Rab18、Lea14-A与4种D-34类蛋白。Dehydrin Rab18、D-34、D-34-like-1表达量随莲胚脱水而递增,与种子含水量呈负相关;EMB564-like、Lea14-A、D-34-like-2、D-34-like-3基因表达水平呈单峰曲线,在莲胚发育20 d时达到峰值。其中Dehydrin Rab18、EMB564-like与D-34-like-2在莲胚脱水阶段上调表达幅度最大,表达量分别是莲胚脱水前的38.7、11.5、19.0倍,可能与莲胚的逆境保护与耐储存机制相关。

莲心总碱对脂多糖和D-氨基半乳糖诱导小鼠急性肝衰竭肝脏的保护作用

目的:研究莲心总碱(TAENN)对脂多糖和D-氨基半乳糖(LPS/GalN)诱导小鼠急性肝衰竭肝脏的保护作用及可能作用机制。方法:昆明种雄性小鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、TAENN高剂量组(100 mg·kg-1)、TAENN低剂量组(30 mg·kg^(-1))。腹腔注射LPS/GalN建立小鼠急性肝衰竭模型;通过生存曲线分析、HE组织化学染色、肝脏指数和血清转氨酶活性分析评价动物肝损伤程度;通过检测血清及肝脏内中SOD、GSH、MDA、ROS、CAT、GSH-Px水平评价小鼠整体和肝脏内氧化应激的状况。结果:口服TAENN能有效降低LPS/GalN诱导的小鼠死亡,HE染色观察显示TAENN能明显减轻LPS/GalN诱导的肝脏显微结构变化;此外,TAENN明显缓解了LPS/GalN诱导的肝脏肿大,降低了小鼠血清中ALT和AST活性水平(P<0.01)。进一步研究表明,TAENN明显降低了模型小鼠血清中MDA的含量,而血清GSH和SOD水平则明显增加(P<0.01);经TAENN处理后,小鼠肝组织中ROS和MDA的相对含量降低,而肝脏GSH、SOD、CAT和GSHPx水平则显著增加(P<0.01)。结论:TAENN能有效缓解LPS/GalN诱导的小鼠肝衰竭,且这种对肝脏的保护作用与其抑制LPS/GalN诱导的肝脏氧化应激相关。