新甘草酚对HepG2人肝癌细胞增殖的影响及机制研究

目的研究新甘草酚对HepG2人肝癌细胞增殖的影响和机制。方法研究分为空白对照组(PBS)、新甘草酚低(10μmol/L)、中(20μmol/L)、高(40μmol/L)剂量组、索拉非尼组(10μmol/L),相应药物培养HepG2细胞24h。CCK8细胞增殖实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白A(cyclin A)mRNA表达水平,蛋白免疫印记(WB)检测磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号活化。Akt抑制剂实验分为对照组(DMSO),pan-Akt抑制剂组(20μmol/L),相应药物处理12h,RT-PCR检测cyclin D1 mRNA相对表达量。结果CCK实验结果显示,与空白对照组比较,索拉非尼组及新甘草酚低、中、高剂量组对HepG2细胞活力均具有抑制作用[(32.16±2.25)%、(70.61±5.06)%、(51.26%±3.06)%、(31.05±5.26)%比(100.00±1.23)%,P<0.05];细胞周期实验表明,与空白对照组比较,索拉非尼组及新甘草酚低、中、高剂量组HepG2细胞G0/G1期细胞明显减少[(12.56±2.65)%、(20.05±2.48)%、(12.36±2.76)%、(5.54±1.86)%比(22.45±2.62)%,P<0.05],索拉非尼组及中、高剂量组G2/M期细胞明显增加[(78.92±2.16)%、(79.03±2.05)%、(86.04±1.76)%比(69.13±1.36)%,P<0.05];RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,索拉非尼组及新甘草酚中、高剂量组cyclin D1、cyclin A mRNA表达明显下调[cyclin D1:(0.45±0.07)、(0.62±0.08)、(0.39±0.11)比(1.00±0.15);cyclin A:(0.37±0.09)、(0.64±0.14)、(0.37±0.09)比(1.00±0.11),P<0.05];WB结果显示,与空白对照组比较,索拉非尼组及新甘草酚低、中、高剂量组对p-PI3K、p-Akt的磷酸化水平均具有明显抑制作用;与索拉非尼组比较,新甘草酚高剂量组HepG2细胞活力及增殖标志物cyclin D1、cyclin A mRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05),新甘草酚高剂量组G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增多(P<0.05)。Akt抑制剂实验RT-PCR结果显示,与对照组比较,pan-Akt抑制剂组cyclin D1 mRNA水平明显下降[(0.59±0.07)比(1.00±0.14),P<0.05]。结论新甘草酚可能通过抑制PI3K-Akt信号活化,抑制细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin A表达,从而对人肝癌细胞HepG2细胞增殖起到抑制作用。