1,8-桉叶油素对小鼠的经口急性毒性和蓄积毒性的研究

采用改良寇氏法测试了1，8-桉叶油素对小鼠的急性毒性，并采用固定剂量蓄积毒性系数法测试了其蓄积毒性。结果表明，1，8一桉叶油素对小鼠经口半数致死剂量（LD5。）为3847．34mg／kg．bw，95％置信限为3352．80—4414．82mg／kg．bw，急性中毒主要靶器官为肝脏和肾脏；小鼠蓄积性毒性实验所得蓄积系数K〉5，与对照组相比，1，8一桉叶油素对小鼠饲料利用率与脏器系数无明显影响（P〉0．05），对脏器无明显不良影响。可见1，8-桉叶油素对小鼠属于低毒化学物质，无明显蓄积毒性。

莲子心新碱对转化生长因子β1诱导的H1299细胞侵袭和迁移的抑制作用及其机制

目的构建转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)H1299细胞上皮-间充质转化(EMT)模型,并探讨莲子心新碱(Neoliensine,NeoL)对其侵袭和迁移能力的抑制作用及潜在机制。方法用5、10、15 ng·mL^(-1)的TGF-β1诱导H1299细胞构建EMT模型;以15 ng·mL^(-1)的TGF-β1诱导H1299细胞作为EMT模型组,以法舒地尔(Fas)为阳性药,设置1、2、3μmol·L^(-1)的莲子心新碱实验组。采用倒置荧光显微镜观察诱导后的细胞形态;用CCK-8法检测莲子心新碱对H1299细胞的抑制率;Western Blot法检测细胞黏附因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)以及间充质标记物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及ROCK 1与P-Smad 2/3蛋白的表达;Transwell法检测莲子心新碱对TGF-β1诱导的H1299细胞侵袭、迁移的抑制作用;免疫荧光法检测H1299细胞内ROCK 1蛋白的表达及分布。结果TGF-β1诱导后H1299细胞形态呈现间充质特性。与对照组比较,随着TGF-β1浓度的升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05,P<0.01),N-cadherin与Vimentin表达明显升高(P<0.01,P<0.001),并且ROCK 1蛋白的表达也在这一过程中升高(P<0.05)。莲子心新碱可以抑制H1299细胞的活力,IC50为5.04μmol·L^(-1);同时与模型组比较,莲子心新碱抑制了TGF-β1促进的H1299细胞EMT过程及侵袭迁移作用(P<0.001),中、高剂量组明显增加E-cadherin蛋白的表达(P<0.05),明显减少N-cadherin和Vimentin蛋白的表达(P<0.001),还明显降低了H1299细胞内因TGF-β1诱导而升高的ROCK 1(P<0.001)和P-Smad2/3(P<0.001)蛋白的水平。免疫荧光结果显示莲子心新碱可以抑制TGF-β1诱导的H1299细胞胞质中ROCK 1蛋白的表达及分布。结论TGF-β1可以诱导H1299细胞发生EMT,莲子心新碱可以有效抑制这一过程,其机制可能是抑制了TGF-β1/Smad/RhoA/ROCK通路。

小鼠肠系膜动脉平滑肌细胞的制备及莲子心新碱对其收缩的抑制作用

目的建立小鼠肠系膜动脉平滑肌细胞(MASMCs)分离、培养和鉴定的方法,并探讨莲子心新碱(NeoL)对其收缩的抑制作用及机制。方法采用胶原酶消化法分离制备小鼠原代MASMCs;免疫荧光法检测细胞的纯度和分化状态;细胞计数法检测传代细胞的生长特性;CCK-8法检测MASMCs细胞活力;成像技术法观察NeoL对KCl诱导MASMCs收缩的影响;蛋白免疫印迹法及免疫荧光法检测MASMCs中ROCK1蛋白的表达情况。结果MASMCs生长曲线近似“S”形,第4~7天处于对数生长期,可用于传代,细胞的成活率达95%。经鉴定,MASMCs为典型的平滑肌细胞且纯度高。NeoL对MASMCs增殖能力有显著抑制作用,IC50值为1.327μmol·L^(-1)。与124 mmol·L^(-1)KCl诱导的模型组比较,0.3、0.6μmol·L^(-1)NeoL干预后MASMCs的细胞长度均显著延长(P<0.01),ROCK1蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.001)。结论成功构建了小鼠MASMCs模型,细胞纯度高,多次传代后细胞特征稳定;NeoL对KCl诱导的MASMCs收缩具有抑制作用,可能与其下调ROCK1蛋白表达有关。