茚三酮比色法测定青天葵中总游离氨基酸的含量

目的利用α-氨基酸与茚三酮反应产生颜色,产生的颜色可以使溶液的吸光度变化的原理,采用可见光分光光度法测定青天葵中总游离氨基酸的含量。方法以亮氨酸为标准品溶液,在568 nm波长下测定供试品溶液的吸光度,根据朗伯-比尔定律计算供试品中总游离氨基酸的含量。结果茚三酮比色法显色反应的最佳反应条件为加入缓冲液的pH值为5.0,用量为1.0 mL;显色剂用量为2.0 mL;反应温度和时间分别为100℃水浴加热19 min,冷却10 min。结论本方法准确、灵敏、重复性好,具有简便实用的特点。

青天葵植物化学成分和药理活性研究进展

青天葵是我国传统出口名贵药材,值得深入的研究与开发。该文通过查阅全面的国内外相关文献,按照化合物的结构类型对青天葵植物化学成分进行分类综述,并对其药理活性进行总结。青天葵植物化学成分主要含有萜类、黄酮类、氨基酸类以及挥发油等化合物种类,具有清热解毒、抗炎、抗病毒、镇痛、镇咳、平喘、治疗慢性支气管炎等药理活性。

青天葵具抗肿瘤活性石油醚部位的成分研究

通过体外抑制肿瘤细胞生长活性筛选确定青天葵95%乙醇(体积分数)提取物及其石油醚萃取部位为抗肿瘤活性部位.综合利用多种色谱手段及重结晶方法从石油醚部位分离得到了8个化合物,并运用理化性质和波谱技术分析确定了化合物结构.其结构分别为:环桉烯醇(cycloeucalenol)(1);豆甾醇(2);谷甾醇(3);熊果酸(4);aurantiamide acetate(5);(20S,22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol(6);6-methoxy-cerevisterol(7);和β-胡萝卜苷(8).其中,化合物3、5、6、7和8均为首次从该植物中分离得到.

青天葵石油醚部位化学成分研究

目的：对青天葵石油醚部位进行化学成分研究。方法：采用硅胶柱层析,对青天葵石油醚部位进行分离纯化,根据理化常数和光谱分析,对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果：共分离得到6个化合物,分别为：Cy-clohomonervilol（Ⅰ）、二十八烷酸（Ⅱ）、豆甾醇（Ⅲ）、Cyclohomonervilol-（E）-p-hydroxy cinnamate（Ⅳ）、24（R/α）-di-hydrocycloeucalenol-（E）-p-hydroxy cinnamate（Ⅴ）、十六烷酸（Ⅵ）。结论：化合物Ⅰ~Ⅵ均为首次从该植物中分离得到。

青天葵活性部位的体内抗肿瘤作用研究

目的:确定广西特产药材青天葵体内抗肿瘤作用的活性部位。方法:体外初步筛选出的青天葵石油醚和乙酸乙酯活性部位,利用S180和H22小鼠模型进行了体内抗肿瘤试验。结果:青天葵石油醚和乙酸乙酯部位对小鼠移植性肉瘤S180和小鼠肝癌H22均有明显的抑瘤活性,并且对H22荷瘤小鼠可延长其生存期。它们也能改善小鼠的免疫机能。结论:首次确定了青天葵的石油醚和乙酸乙酯部位是体内抗肿瘤作用的有效部位。在此基础上,可以更深入探讨青天葵抗肿瘤作用的有效成分或成分群以及抗肿瘤作用的特点。

青天葵活性部位的体外抗肿瘤作用研究

目的确定广西特产药材青天葵体外抗肿瘤作用的活性部位。方法青天葵部位提取物的制备主要采用溶剂法,青天葵全草先用95%的乙醇提取,得到的提取物进一步用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、甲醇依次提取,得到极性由小到大的4个提取部位。活性筛选采用MTT法实验,观察青天葵提取物对7种肿瘤细胞的生长抑制作用。结果青天葵石油醚和醋酸乙酯部位具有一定的体外抗肿瘤作用。结论首次确定了青天葵的石油醚和醋酸乙酯部分是体外抗肿瘤作用的有效部位。

青天葵4种提取物抗氧化活性与其总黄酮和总酚含量的相关性

目的考察青天葵Nervilia fordii(Hance)Schltr.氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇提取物抗氧化活性与其总黄酮和总酚含有量的相关性。方法 Al Cl3-HAc-Na Ac显色法和福林-酚比色法分别测定青天葵4种提取物中总黄酮和总酚含有量,通过测定DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、还原能力评价提取物抗氧化活性,SPSS17.0软件分析抗氧化活性与2种成分含有量的相关性。结果青天葵4种提取物的抗氧化活性均呈量效关系,乙酸乙酯提取物最强,而乙醇提取物最弱。其与总黄酮含有量有一定相关性(0.604<r<0.638),与总酚含有量相关性显著(r>0.977)。结论青天葵乙酸乙酯提取物可用于天然抗氧化剂开发,总酚含有量是影响其抗氧化活性的主要因素。

青天葵镇咳、平喘药理作用研究

观察青天葵镇咳、平喘的药理作用。【方法】NIH小鼠随机分为8组,即青天葵水提浸膏高、中、低剂量组, 青天葵醇提浸膏高、中、低剂量组(剂量均分别为19．2、9．6、4．8 g·kg-1·d-1),阳性对照组(镇咳实验为50mg·kg-1·d-1 的磷酸可待因,平喘实验为0．1g·kg-1·d-1的茶碱)和模型组;采用氨水超声雾化法引发小鼠咳嗽,乙酰胆碱-组胺超声雾化法诱发豚鼠哮喘,观察青天葵的镇咳、平喘药理作用。【结果】青天葵水提和醇提高、中、低剂量组均能减少模型小鼠咳嗽次数(P<0．01),醇提高、中、低剂量组均能延长模型小鼠咳嗽潜伏期(P<0．01);青天葵醇提高、中、低剂量组和水提高、中剂量组均能延长模型豚鼠抽搐跌倒潜伏期(均P<0．05或P<0．01),醇提中、低剂量组和水提高剂量组均能延长模型豚鼠的呼吸困难潜伏期(均P<0．05或P<0．01)。【结论】青天葵具有一定的镇咳、平喘的作用。

青天葵及其混伪品的rbcL基因序列鉴定研究(英文)

本研究旨在利用植物DNA条形候选片段rbcL基因的序列信息鉴别青天葵及其混伪品。采用试剂盒法提取青天葵及其混伪品的叶片总DNA,一对通用引物应用于PCR扩增和双向测序。采用DNAMAN、CLUSTALX和MEGA4.0等软件进行序列拼接比对、遗传距离分析和聚类分析。获得的青天葵及其混伪品rbcL基因序列长度为502 bp,3个类型的青天葵序列完全一致,它们与毛叶芋兰之间存在5处差异;青天葵种内K2P遗传距离小于其与混伪品的种间K2P遗传距离;NJ聚类树显示,各物种均表现出单系性,并与其它物种相互区别。表明rbcL基因可用于鉴别青天葵及其混伪品。

基于RAPD的青天葵遗传多样性及鉴别研究

目的建立及优化青天葵样品总DNA的提取方法及RAPD反应,探讨不同品种的青天葵及其替代品、伪品在DNA分子水平上的遗传多样性及其遗传关系。方法使用高盐低pH值法提取总DNA,采用随机扩增多态性DNA,从49条随机引物中筛选能扩出清晰条带的引物,对22个青天葵样品及伪品进行RAPD分析。用统计分析软件对扩增出的条带进行聚类分析,以Shonnon’s指数和Nei’s指数对青天葵遗传多样性进行估算。结果高盐低pH值法提取的新鲜样品纯度高,药材纯度低,但都能用于RAPD。选取能扩增出清晰条带的19条引物,把鲜品与干品分别聚类分析。干药材中小叶与中叶距离较近,与大叶及毛叶距离远。新鲜叶片中三种青天葵为一类,青天葵与其组培品、毛叶与红薯叶距离稍远,与车前草、积雪草距离最远。青天葵种群遗传多样性Shonnon’s指数为0.463,Nei’s指数为0.267,种群内遗传多样性较高,基因流为0.94。结论不同品种青天葵间及伪品在分子水平上存在差异,可用此方法鉴别青天葵。青天葵的遗传多样性大多是由地理环境造成的。

不同品种青天葵药材质量标准的比较研究

【目的】对不同品种的青天葵药材进行质量标准的比较研究,初步建立青天葵药材的质量标准。【方法】采集不同来源的青天葵野生种和栽培种,按叶片大小分为大叶、中叶、小叶3种,并采集青天葵替代品———同属植物毛叶芋兰,参照中华人民共和国药典附录方法检测不同品种青天葵药材的水分、灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量,并进行统计学比较。【结果】除水溶性浸出物含量外,青天葵药材不同品种间各项质量指标比较均无显著性差异。青天葵药材的含水量均不超过120 g.kg-1,总灰分不高于300 g.kg-1,酸不溶性灰分不高于195 g.kg-1,水溶性浸出物不少于27 g.kg-1,醇溶性浸出物不少于4 g.kg-1。【结论】初步建立了青天葵药材的质量标准,为临床用药提供更丰富的药用资源。

青天葵球茎的组织培养

[目的]通过组织培养方法获得青天葵组培苗。[方法]以青天葵的地下球茎为外植体进行组织培养,在不同生长阶段观察生长情况并记录相关数据。[结果]以MS+6-BA 5.0 mg/L作为初代诱导培养基较好;MS+6-BA 3.0 mg/L适合作为根状茎增殖培养基,根状茎用生长尖端增殖最好;不加任何激素的MS培养基适合诱导形成球茎;球茎移栽后长芽率达到83.9%。[结论]利用青天葵球茎进行组织培养,可为大面积人工栽培青天葵提供组培苗。

青天葵石油醚部位的化学成分

本实验采用多种色谱手段及重结晶方法对青天葵石油醚部位的化学成分进行分离纯化,并根据波谱分析和理化常数等方法对化合物进行结构鉴定.共得到了10个化合物,分别为:β-谷甾醇(1)、豆甾醇(2)、6,9,10-三羟基-7E-烯十八烷酸(3)、麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇(4)、豆甾-22-烯-3β,6β,9β-三醇(5)、麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6α-三醇(6)、3β-羟基豆甾-5,22-二烯-7-酮(7)、3β-羟基豆甾-5-烯-7-酮(8)、橙黄胡椒酰胺乙酸酯(9)、橙黄胡椒酰胺苯甲酸酯(10).其中化合物3、5～8、10为首次从青天葵植物中分离得到.

青天葵PAL基因序列特征和表达分析

在前期完成的青天葵（Nervilia fordii）转录组测序数据的基础上,采用生物信息学方法对3个青天葵PAL基因家族成员（NfPAL1、NfPAL2和NfPAL3）的c DNA序列及其编码蛋白质的氨基酸序列进行特征分析,并计算这些基因在青天葵叶片和球茎中的表达量。结果表明,从转录组数据中获得的3个青天葵PAL基因家族成员c DNA序列长度为1 743-2 091 bp,编码581-697个氨基酸。这些PAL基因编码包含苯丙氨酸解氨酶多功能域,并且不含跨膜结构域、信号肽和转运肽的亲水性稳定蛋白。3个青天葵PAL基因在青天葵中的表达呈组织特异性,其中,NfPAL1和NfPAL3在球茎中的表达量较高,而NfPAL2在叶片中具有较高的表达水平。

青天葵甲羟戊酸激酶基因的编码蛋白预测和表达分析

甲羟戊酸途径(mevalonic acid,MVA)是植物三萜类化合物生物合成的主要途径,而甲羟戊酸激酶(mevalonate kinase,MVK)是MVA途径中的关键限速酶之一。根据前期获得的青天葵[Nervilia fordii(Hance)Schltr.]转录组数据,采用生物信息学方法对青天葵MVK基因编码蛋白的理化特性、功能结构域、二级结构、信号肽、跨膜结构域等进行预测,并采用RPKM法分析该基因在青天葵球茎和叶片的表达量。结果表明,Nf MVK基因编码含有383个氨基酸的稳定型亲水性、酸性蛋白质,与其他植物MVK蛋白同源性可达70%。Nf MVK蛋白分子量为41.29 ku,含有甲羟戊酸激酶功能域,归属于GHMP_Kinase超级家族。该蛋白没有任何信号肽、转运肽和跨膜结构域,二级结构为混合型结构的蛋白质。Nf MVK基因在青天葵中的表达趋势为:球茎>叶片。该结果可为后续利用MVK基因调控青天葵三萜类活性成分的合成提供理论依据。

基质栽培中营养液对青天葵生长、抗氧化酶活性及氨基酸含量的影响

目的:筛选出适合青天葵无土栽培的营养液配方。方法:测定4种不同的营养液配方对基质栽培青天葵的生长、抗氧化酶活性及氨基酸含量的影响。结果:1/2剂量莴苣营养液配方最有利于青天葵的生长,能提高产量;4种营养液均能提高青天葵抗氧化酶活性及氨基酸含量,其中,1/2剂量绿叶菜营养液配方最有利于提高氨基酸含量。结论:1/2剂量莴苣营养液配方是青天葵生长的最适营养液,该研究结果可以为青天葵无土栽培提供依据。

青天葵EBP1基因原核表达载体的构建

[目的]构建青天葵器官大小调控基因——Erb3结合蛋白(Erb3-binding protein,EBP1)编码基因的原核表达载体,以期为通过原核表达体系鉴定该基因的功能奠定基础。[方法]将引入酶切位点的NfEBP1基因的PCR产物及表达载体pET-28、pET-16b分别进行双酶切,之后连接相应的酶切产物,热击转化到E.coli Top10细胞,通过菌落PCR、测序和酶切筛选阳性重组子。将确认的阳性重组子质粒转化至E.coli BL21表达宿主菌,并对其进行双酶切验证。[结果]构建了重组表达质粒pET-28-NfEBP1-1188和pET-16-NfEBP1-1188,其转化E.coli BL21表达宿主细胞后,分别获得含有2个载体的工程菌。[结论]该研究成功构建了青天葵EBP1基因的原核表达载体,为后续通过原核表达体系鉴定该基因的功能奠定了基础。

青天葵叶片总RNA提取方法的比较研究

采用RNeasy Plant Mini Kit法、RNAiso Plus法、RNAiso for Polysaccharide-rich PlantTissue法、CTAB法和SDS法,并结合4种抽提试剂组合,分别提取青天葵叶片总RNA。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外检测及RT-PCR反应对提取效果进行了比较分析。结果表明:除RNAiso Plus法外,其它方法提取的总RNA均有一定程度的DNA污染。RNAiso Plus法组③(1/5体积KAC+4/5体积PCI)完整性最好,SDS法组④(1/5体积NaCl+4/5体积PCI)浓度最高,为372.4ng/μL。5种方法共20个处理组获得的RNA反转录后均能扩增出18SrRNA基因片段。该研究建立起了适用于青天葵叶片的总RNA提取方法,为青天葵的基因克隆、表达及转录组分析奠定了技术基础。

青天葵EBP1基因原核表达载体的构建(英文)

[目的]构建青天葵器官大小调控基因———Erb3结合蛋白(Erb3-binding protein,EBP1)编码基因的原核表达载体,以期为通过原核表达体系鉴定该基因的功能奠定基础。[方法]将引入酶切位点的NfEBP1基因的PCR产物及表达载体pET-28、pET-16b分别进行双酶切,之后连接相应的酶切产物,热击转化到E.coli Top10细胞,通过菌落PCR、测序和酶切筛选阳性重组子。将确认的阳性重组子质粒转化至E.coli BL21表达宿主菌,并对其进行双酶切进行验证。[结果]构建了重组表达质粒pET-28-NfEBP1-1188和pET-16-NfEBP1-1188,其转化E.coliBL21表达宿主细胞后,获得含有2个载体的工程菌。[结论]该研究成功构建了青天葵EBP1基因的原核表达载体,为后续通过原核表达体系鉴定该基因的功能奠定了基础。

青天葵HMGR基因片段的鉴定和生物信息学分析

采用生物信息学对青天葵转录组测序获取的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶编码基因片段Nf HMGR及其编码蛋白进行功能鉴定和表达分析。结果表明,Nf HMGR基因片段序列长度为1 563 bp,与其他植物HMGR基因的同源性最高可达88%;编码含有521个氨基酸、分子量约为55.34 ku的亲水性不稳定蛋白。Nf HMGR蛋白具有3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶Ⅰ类酶功能域,归属于3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶超级家族,包含3处跨膜结构域,不含任何信号肽、转运肽,二级结构表现为混合型结构蛋白质。在青天葵不同组织中,Nf HMGR基因在球茎中的表达量高于在叶片中的表达量。