不同类型星形胶质细胞对神经干细胞定向分化的影响

目的观察不同类型星形胶质细胞作为饲养层细胞对神经干细胞定向分化为神经元的影响。方法通过无血清培养的方法,将原代培养所获得的神经干细胞克隆;经纯化和标记后,分别接种在以原浆型和纤维型星形胶质细胞作为饲养细胞的培养皿中并加入NeuralBasal培养基,10d后行NF-200免疫荧光染色,在显微镜下随机选取20个视野,记数神经元和标记神经干细胞的比例,并对分化的神经元细胞进行胆碱酯酶染色和Fura-3探针标记。结果在原浆型和纤维型星形胶质细胞培养条件下,神经干细胞分化为神经元的比例分别为72%与43%,分化细胞胆碱酯酶染色阳性。分化神经元在药物刺激下,细胞内可发生钙离子活动的变化。结论原浆型星形胶质细胞具有较好地促进神经干细胞向神经元,特别是向有生物学活性的运动神经元分化,可作为神经组织工程中研究中一种新的种子细胞。

神经干细胞与乳鼠基底膜共培养后分化为毛细胞样细胞的研究

目的探讨体外培养和鉴定胚胎大鼠神经干细胞及诱导其分化为毛细胞样细胞。方法从SD系胚鼠大脑分离神经干细胞,在无血清培养基中培养。取乳鼠基底膜与神经干细胞一起培养,14～21天后通过免疫荧光和免疫组化法检测毛细胞标志物myosin VIIa和calretinin。结果培养的神经干细胞胞体透亮,折光性好,Nestin鉴定阳性。诱导分化后的细胞免疫荧光和免疫组化示myosin VIIa和calretinin阳性。结论无血清条件下能培养出活性很好的神经干细胞,乳鼠基底膜能引导其朝毛细胞方向分化。

神经干细胞分化过程中微管蛋白表达变化的光电镜观察

目的对神经干细胞向神经元定向分化过程中微管蛋白的表达变化进行光、电镜观察研究。方法采用细胞培养技术、免疫荧光技术以及免疫电镜技术对神经干细胞向神经元定向分化过程中微管蛋白的表达变化进行观察。结果在神经干细胞向神经元定向分化的不同时期,存在微管蛋白的表达变化,在分化初期以核周附近分布明显,随神经元的成熟散在分布于胞质中及突起内,形成细网状,构成细胞骨架,维持细胞形态。结论在神经干细胞向神经元定向分化过程中伴随有微管蛋白的表达变化,随神经元的成熟而构成细胞骨架,维持细胞形态。

巢蛋白和性别决定基因高迁移率组蛋白阳性细胞在成年大鼠穹隆下器的表达

目的：观察巢蛋白与性别决定基因高迁移率组蛋白（SOX2）在穹隆下器的阳性细胞表达情况.方法：Wistar大鼠经心灌注后,采用免疫组织化学和免疫组织化学荧光显色观察巢蛋白、SOX2在穹隆下器中的表达情况.结果：巢蛋白阳性细胞呈絮状或丝状,有数目不等的分支,在室管膜下区域密集分布,室管膜、背侧区及两侧大血管周围分布较少,中央区域罕有分布.SOX2阳性细胞胞核多呈圆形或椭圆形,在穹隆下器室管膜、室管膜下及背侧区密集分布,中央区分布较少.SOX2和巢蛋白荧光双标染色,可见少量SOX2和巢蛋白双阳性表达细胞.结论：穹隆下器内SOX2及巢蛋白阳性细胞密集表达,并存在少量SOX2和巢蛋白双阳性表达细胞,说明穹隆下器可能存在神经干细胞/祖细胞.

MK-801对局灶性脑缺血再灌注大鼠细胞增殖的影响

目的研究MK-801对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经干细胞增殖的影响。方法60只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组(n=6)、假手术组(n=6)、手术组(n=12)和手术MK-801不同浓度干预组(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2mg/kgn=36)。用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型,在模型制作前30min按照不同浓度组的剂量腹腔注射MK-801,假手术组和手术对照组腹腔注射等量的生理盐水。在模型建立后第7天,通过免疫组化技术标记大鼠梗塞区大脑皮质的Brdu阳性细胞数目。结果MK-801浓度为0.4mg/kg时,可以明显抑制内源性神经干细胞的增殖,0.8mg/kg剂量以上有显著的抑制作用,并且随着浓度升高抑制作用呈递增趋势。结论NMDA受体拮抗剂MK-801在局灶性脑缺血后对大鼠内源性神经干细胞的增殖有抑制作用,并且随浓度的增加抑制作用增强。

穹窿海马伞切割后大鼠海马伞内神经干细胞的观察研究

目的观察穹窿海马伞切割侧和非切割侧大鼠海马伞内神经干细胞的表达情况。方法切割SD大鼠右侧穹窿海马伞,于术后2d经腹腔注射BrdU,连续5d,术后7d取脑冰冻切片,进行BrdU/Nestin免疫荧光双标检测。结果穹窿海马伞切割侧海马伞内的BrdU阳性细胞数和Nestin阳性细胞数均明显多于非切割侧,且出现较多的BrdU/Nestin双标的阳性细胞,而非切割侧未见BrdU/Nestin双标的阳性细胞。结论穹窿海马伞切割后,切割侧海马伞内出现较多增殖的神经干细胞,我们推测海马伞的损伤,导致海马伞内局部微环境发生变化,产生某些信号物质,刺激脑内其他部位的神经干细胞增殖并迁移到海马伞内。

人胚神经干细胞的体外分离培养和长期冻存

目的建立从脑组织中分离人胚神经干细胞的方法和体外长期培养的稳定体系,为细胞治疗提供基础。方法采用机械酶学法从胎脑中获得神经干细胞,这些细胞在含成纤维细胞生长因子和上皮细胞生长因子的无血清培养基中生长,血清刺激诱导分化,程序冷冻法保存细胞。结果这些细胞可在体外持续增殖,并被诱导分化成神经元和神经胶质细胞,可以长期冷冻保存。结论人胚神经干细胞分离培养体系和冻存方法的成功建立为神经损伤、退行性疾病以及其他疾病的细胞治疗提供了潜在的细胞资源。

SD大鼠癫痫大发作后海马结构SDF-1表达的研究

目的检测基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在癫痫大发作后不同时段的表达情况,探索SDF-1在癫痫大发作后海马结构重塑中发挥的作用,为进一步探讨癫痫的发病机制提供实验依据。方法腹腔注射匹罗卡品22.5 mg/kg体重,制造SD大鼠癫痫大发作模型后,分别于6小时、12小时、24小时、2天,7天、14天、28天处死大鼠,用免疫组化法检测大鼠脑组织海马CA3区的SDF-1表达情况。结果SDF-1在癫痫发作后6小时开始升高,2-7天达峰值后开始下降,28天后基本恢复正常。结论SDF-1在癫痫大发作后的大鼠海马组织中表达明显增加,提示SDF-1在癫痫大发作后内源性神经干细胞向海马部位的定向迁移及海马结构重塑中可能发挥了一定的作用。